杀草丹降解菌Acidovorax sp. S351的分离鉴定、生物学特性及遗传机制研究

发布时间：2018-05-17 09:00

  本文选题：杀草丹 + 生物降解　； 参考：《南京农业大学》2015年硕士论文

【摘要】：从杀草丹生产药厂排污口所得土样中分离到一株能以杀草丹为唯一碳源生长的细菌S351(16S rDNA GenBank登陆号:KR048280)。根据其生理生化和16S rDNA序列序列相似度分析,将该菌鉴定为食酸菌属(Acidowrax sp.)。菌株属G-菌,菌落为白色,不透明,黏度较大,圆形,边缘齐整,凸起。较湿润,不容易挑取;菌体呈短杆状,表面多皱褶,有荚膜,没有观察到鞭毛,不产芽孢。对菌株S351的生物学特性研究结果显示,该菌株在pH6.0～7.0范围内生长良好,在pH7.0生长最好,最适生长温度为30℃,装液量20mL时,生长量最大,随着装液量的增加生长呈下降趋势。在0～10mg·L-1的盐浓度范围生长较好,以葡萄糖,果糖为碳源的培养基中生长较好。该菌株在36h内对100mgL-1的杀草丹降解率达到99.6%。降解杀草丹的最适温度为30℃,pH值为7.0,降解速率与初始接种量呈正相关。接种量大于5%时有较高降解效果。通过降解菌株S351利用底物的情况,发现能利用对氯苄硫醇,对氯苯甲酸和对羟基苯甲酸等,但不能利用氯苯,2,4,6-三氯苯和苄硫醇。将该菌株在不加杀草丹的无选择压力平板上连续划线传代后,获得一株降解功能丢失的突变株S3512,对野生株S351和突变株S3512进行了全基因组测序,获得了两个菌株的基因组框架图。根据全基因组框架图的基因注释和下载的fcbABC基因的保守区设计引物,从杀草丹降解菌株S351扩增到了对氯苯甲酸的降解基因。对菌株S351对杀草丹的降解途径进行了比较详细的推测,根据实验结果,以及基因组的测序结果,确定了一条杀草丹的完整代谢途径。对菌株S351和突变株S3512的基因组框架图比对,发现了突变株的多个疑似缺失片段,经过PCR验证,确定了两个片段,contig180和contig138,用设计引物PCR推断的方法,确定了两个片段的连接方式是contig180-contig138,对这个拼接片段进行侧翼片段扩增,将获得的片段和已知片段拼接,获得了不一条长约9k的片段,其中,一端已经确定,另一端有待继续研究。对杀草丹降解酶的粗酶液进行了初步研究,没有检测到明显酶活,可能是由于却某种辅酶(辅因子)。
[Abstract]:A strain of bacteria S351N 16s rDNA GenBank was isolated from the soil sample from the sewage outlet of Shicaodan production Factory, which can grow with the sole carbon source. The landing number is: KR048280. According to the similarity analysis of physiological and biochemical characteristics and 16s rDNA sequence, the strain was identified as Acidowrax sp. The colony is white, opaque, sticky, round, well-edged and protruding. The bacteria were short rod shaped, pleated surface, had capsule, no flagella was observed, and no spores were produced. The biological characteristics of strain S351 showed that the strain grew well in the range of pH6.0~7.0, and grew best in pH7.0. The optimum growth temperature was 30 鈩，

本文编号：1900764