苏云金芽胞杆菌Sigma K在大肠杆菌中的表达与纯化

发布时间：2018-08-06 11:30

【摘要】：【目的】在大肠杆菌中表达纯化苏云金芽胞杆菌HD73的转录调控因子Sigma K(σK)。【方法】PCR扩增出苏云金芽胞杆菌HD73中sig K基因的ORF(Open reading frame)装载到带有His标签的表达载体p ET21b上,转入到表达菌株BL21(DE3)中获得重组菌株BL21(p ETsig K),通过SDS-PAGE、镍柱亲和纯化、阴离子交换纯化和凝胶迁移实验(EMSA)等方法对Sigma K蛋白进行提取、纯化和生物活性分析。【结果】正确表达出大小约为27 k D的His-Sigma K蛋白,并获得了纯化的蛋白。EMSA结果表明纯化的His-Sigma K蛋白可以与受其控制的cry1Ac基因启动子结合。【结论】表达和纯化了His-Sigma K蛋白,His-Sigma K具有与受其控制的启动子结合的功能。
[Abstract]:[objective] to express and purify Sigma K (蟽 K)., a transcriptional regulator of Bacillus thuringiensis HD73 in Escherichia coli. [methods] the ORF (Open reading frame) of sig K gene of Bacillus thuringiensis HD73 was amplified by PCR and loaded into the expression vector pET21b with His tag. The recombinant strain BL21 (p ETsig K), was transformed into the expression strain BL21 (DE3) to extract Sigma K protein by SDS-PAGE, nickel column affinity purification, anion exchange purification and gel migration test (EMSA). Purification and bioactivity analysis. [results] His-Sigma K protein of about 27 KD was correctly expressed. The purified protein. EMSA showed that the purified His-Sigma K protein could bind to the cry1Ac gene promoter under its control. [conclusion] the expression and purification of His-Sigma K protein His-Sigma K have the function of binding to the promoter controlled by it.
【作者单位】： 中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室;东北农业大学生命科学学院;
【基金】：国家自然科学基金项目(No.31270111,31300085)~~
【分类号】：S476.1;Q78

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