小菜蛾酚氧化酶PxPPO1基因内含子序列克隆及分析

发布时间：2019-10-22 23:02

【摘要】：酚氧化酶(phenoloxidase,PO)(EC 1.14.18.1)是一种广泛存在于动物、植物、昆虫、微生物及人体内的一种结构复杂的多亚基的含铜氧化还原酶,在昆虫生理发育和内源性免疫过程中具有重要作用,如昆虫黑化、伤口愈合等。本课题组在前期研究中得到了编码小菜蛾(Plutella xylostella L.)酚氧化酶原PxPPO1基因的mRNA,并研究了它在小菜蛾虫体中的时空表达情况。本文在此基础上通过染色体步移法,克隆得到了编码小菜蛾酚氧化酶原的PxPPO1全基因,通过对PxPPO1基因的序列进行分析,得到PxPPO1基因的内含子和外显子及其所在位置,计算了内含子AT%含量、接头、碱基大小等信息,这为深入研究该基因的结构与功能奠定了基础。本研究的主要内容如下:1.通过对GenBank中搜索到的鳞翅目PPO1基因序列进行比较,选取最保守序列设计引物,以基因组DNA为模板进行PCR扩增,得到一段包含内含子在内的基因序列。以得到的基因序列作为染色体步移法的引物模板,设计5′端上游3条嵌套式特异性引物,进行5′侧翼端扩增。通过多次步移,将所得序列拼接后得到小菜蛾PxPPO1基因全序列,共计7202bp。2.通过在线分析软件EMBOSS Needle和NCBI BLAST程序对PxPPO1基因序列分析,分析得出该序列含有12个外显子和11个内含子,其中4745bp的碱基为内含子序列,5识擞幸桓，

本文编号：2551811