抗茄链格孢菌放线菌的筛选及鉴定

发布时间：2019-11-14 10:09

【摘要】：以茄链格孢菌为靶标菌,采用平板对峙法和生长速率法对分离自药用植物的221株放线菌进行筛选,通过生理生化特征、培养特征、形态特征和基于16S rRNA基因序列的相似性分析对活性菌株的种属进行了鉴定。结果表明,抑菌率75%以上放线菌有3株,其中菌株3150被鉴定为环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)的一个菌株,菌株3679被鉴定为氢化链霉菌(Streptomyces hydrogenans)的一个菌株,菌株4536被鉴定为链霉菌属(Streptomyces sp.)菌株。薄层色谱分析结果显示菌株3679代谢产物丰富且分离度好,进一步分离可望得到具有较好生防作用的化合物。
【图文】：

GTGATCCAGCCGCA-3')扩增放线菌16SrＲNA。PCＲ扩增条件:95℃预变性5min，1个循环;95℃变性1min，55℃退火1min，72℃延伸2min，35个循环;72℃延伸10min，1个循环。PCＲ产物送生工生物工程技术服务(上海)有限公司测序。将测得的序列利用EzTaxon在线比对软件进行物种的相似性搜索，用MEGA5．01软件进行序列比对并构建系统发育树，确定菌株的种属。2结果2．1茄链格孢菌拮抗放线菌的筛选利用平板对峙法初筛得到18株拮抗放线菌。通过生长速率法对这18株放线菌发酵液进行复筛，，当发酵液稀释20倍时抑菌率75%以上的有3株(图1)，分别是菌株3679(抑菌率79．84%)、3150(抑菌率75．85%)、4536(抑菌率83．46%)。图1菌株3150、3679、4536发酵液对茄链格孢菌的抑制Fig．1Inhibitionoffermentationbrothofstrains3150，3679，4536againstAlternariasolani对上述3株高活性放线菌的发酵液用乙酸乙酯萃取，菌丝体用丙酮浸提，所得粗提物用薄层色谱法分析。结果(图2)显示，菌株3679的代谢产物较丰富，分离度较好。采用气相色谱-质谱联用的方法对3株活性菌株发酵液的乙酸乙酯提取物进行检测，将所得质谱信息与计算机质谱数据库标准谱图对照分析发现:菌株3679的提取物色谱峰分别为芳香烃类、酚类、酯类、脂肪酸类及含氮化合物，菌株3150、4536的提取物色谱峰较少。2．2拮抗放线菌菌株3150、3679、4536的鉴定在电子显微镜下观察，3株菌株成熟孢子丝形成的孢子链均呈串珠状，孢子为柱形，表面光滑无刺(图3)，此特征为链霉菌属的典型形态特征。在选定的8种培养基上，3株菌株都不产生可溶性色素，在营养琼脂培养基、燕麦培养基、无机盐淀粉琼脂培养基上生长一般，在其他培养基上生长较好。菌株3150和3679的气生菌丝颜色多为黄白色，菌株4536的气生菌

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本文编号：2560758