吸引线虫的细菌多样性及其活性挥发物研究

发布时间：2020-10-22 04:34

　　 细菌挥发物在“细菌-线虫”互作中发挥重要作用,同时吸引线虫的细菌挥发物在线虫生防中有着潜在的应用价值。本文开展三方面的研究内容:首先,以秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)和全齿复活线虫(Panagrellus redivivus)为靶标,从各种生境来源的细菌中筛选出一批诱吸线虫的细菌资源;其次,通过解析16S rRNA基因序列,从而确定吸引线虫细菌的分类地位;最后,经由GC-MS分析和纯品验证,鉴定诱吸线虫的细菌有机挥发物的类型。主要结果归纳如下:1.挥发物诱吸线虫的细菌筛选从来自三七内生菌、山葵内生菌以及溶洞细菌的450株细菌中,以秀丽隐杆线虫和全齿复活线虫为靶标,应用培养皿分区划线法筛选,获得对秀丽隐杆线虫具有强诱吸活性(CI ≥ 0.5)的菌株有17株,中等诱吸活性(0.3 ≤CI0.5)的菌株57株,弱诱吸活性(0.1 ≤CI0.3)的菌株有77株。即共计有154株菌株对秀丽隐杆线虫具有诱吸性。其中,52株分离自植物内生菌,102株分离自溶洞土壤。对全齿复活线虫具有强诱吸活性(CI ≥ 0.5)的菌株72株,中等诱吸活性(0.3 ≤CI0.5)的菌株46株,弱诱吸活性(0.1 ≤CI0.3)的菌株有44株。即共计有167株菌株对全齿复合线虫具有诱吸性。其中,66株来自植物内生菌,101株来自溶洞土壤。2.挥发物吸引线虫的细菌多样性分析从挥发物诱吸线虫的细菌中选取有诱吸性的75株为代表,基于16S rRNA基因序列分析确定其分类地位。结果显示,这75株菌株主要分布在3个类群:放线菌门、变形菌门、和厚壁菌门。其中,放线菌门的细菌共有45株,占总数的60%;在放线菌门中,优势菌属为链霉菌属(Streptomyces),包含5个种,共计13株菌。3.细菌诱吸线虫的挥发物组分分析选出8株对秀丽隐杆线虫诱吸性最强的菌株,分别进行GC/MS和纯品验证,鉴定出诱吸线虫的细菌挥发物共11种:2-辛酮、甲基壬基甲酮、2-十四酮、2-癸酮、二甲基二硫、2-十三烷酮、2-壬酮、苯甲醚、2,5-二甲基乙基苯酚、环十五酮、2-庚酮。其中,2-十三烷酮在0.25 mg/mL浓度下的诱吸活性最强。
【学位单位】：云南大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S432.45
【部分图文】：

Ｉ?１??ｎ?ｊｙｉ??图２：?土壤稀释涂布１?Ｏ＇４浓度的平板细菌菌落生长情况??Ｂａｃｔｅｒｉａｌ?ｃｏｌｏｎｉｅｓ?ｂｙ?ｓｐｒｅａｄｉｎｇ?１０￣４?ｄｉｌｕｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ｓｏｉｌ?ｓａｍｐｌｅ?ｏｎ?ｍｅｄｉｕｍ?

３．２吸引线虫的细菌资源评估??应用培养皿分区划线的方法测定了?４５０株细菌对线虫的诱吸效果。其中的２５０??株用于吸引秀丽隐杆线虫的筛选（表１，图４）：强诱吸活性（Ｃ泛０．５）的菌株有??１７株，占总数的１１．３０％；中等诱吸活性（０．３丈１＜０．５）的菌株有５７株，占总数??的２２．８％；弱诱吸活性（０．１丈１＜０．３的菌株有７７株，占总数的３０．１％；无诱吸性??（ＣＩＣ０．１）的菌株有９６株，占总数的３８％。??４５０株菌株的２００株用于吸引全齿复活线虫的筛选（表１，图４）：强诱吸活性??（ＣＩ２０．５）的菌株有７２株，占总数的３６．７３％；中等诱吸活性（０．３￡ＣＩ＜０．５）的菌??株有４６株，占总数的２３．４７％；弱诱吸活性（０．匕ＣＩＣ０．３）的菌株有４４株，占总??数的２２．４５％；无诱吸性（ＣＩＳ０．１）的菌株有３２株，占总数的１６．３％。??６０％??３０．１％??５０％?－??４〇％?３６＾｜％??３０％?■秀１！隐＇杆线虫??＂?２：＾｜°?２２Ｊ％ｌ－４７％?＿?「全齿线虫??２０％?１＾３％??１１?ｔｍ??０％??ｉ－?！?ｉ?ｒ??ＣＫ０．１?０．１＜ＣＩ＜０．３?０．３＜ＣＫ０．５?Ｃｌ＞０．５??图４：诱吸线虫的细菌菌株??Ｆｉｇｕｒｅ４：?Ｂａｃｔｅｒｉａｌ?ｓｔｒａｉｎｓ?ａｔｔｒａｃｔｉｎｇ?ｎｅｍａｔｏｄｅｓ??在筛选的菌株中
【参考文献】

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本文编号：2851100