黄淮三省大田作物短体线虫的种类调查与鉴定

发布时间：2020-11-05 08:16

　　 短体线虫(Pratylenchus Filipjev,1936)又称根腐线虫,是一类迁移性的植物内寄生线虫,在世界各地普遍发生,寄主范围广泛。短体线虫、根结线虫和孢囊线虫是作物上危害最为严重的三种植物寄生线虫,对农业生产造成了巨大的经济损失。目前,黄淮地区短体线虫的发生分布以及危害等相关的研究报道较少,为了更加系统、准确地了解黄淮地区短体线虫的分布和危害,从而为该线虫的防治提供理论基础,本研究对黄淮地区短体线虫种群进行了调查,并利用形态和分子相结合的方法对其种类进行了鉴定。本研究共采集到河南、山东、安徽三省共27个地级市主要大田作物的根际土样209份,并对样品中的短体线虫进行了分类鉴定,同时对纯培养得到的咖啡短体线虫(P.coffeae)进行了繁殖力测定,研究结果如下:1、在小麦、玉米、芝麻、大豆、烟草等作物上共分离出短体线虫58个种群,它们来自河南郑州市、洛阳市、许昌市、商丘市、焦作市、南阳市、信阳市、平顶山市;山东省的临沂市、泰安市、新泰市、莱芜市;安徽省的宿州市。采用单雌培养的方法在胡萝卜愈伤组织上纯化培养出短体线虫22个不同种群。利用形态和分子相结合的方法鉴定了短体线虫25个种群,它们属于短体属线虫的3个种,分别为咖啡短体线虫、斯克里布纳短体线虫(P.scribnei)和落选短体线虫(P.neglectus)。2、本文共获得短体线虫18S序列8条、28S序列23条以及ITS序列25条,其中咖啡短体线虫7个种群共获得2条18S序列,序列长度均为1003 bp;6条28S序列,序列长度为780-781 bp;7条ITS序列,序列长度为1245-1254 bp;斯克里布纳短体线虫10个种群共获得2条18S序列,序列长度分别为897 bp、898 bp;8条28S序列,序列长度为785-786 bp;10条ITS序列,序列长度为1099-1106 bp;落选短体线虫8个种群共获得4条18S序列,序列长度为888-891 bp;9条28S序列,序列长度为776-781 bp;8条ITS序列,序列长度为897-914 bp。基于18S、28S D2D3区和ITS序列对短体线虫进行了系统发育分析,结果表明本文获得的短体线虫25个种群的序列均能与已报道的同种短体线虫序列形成一个单系群。3、在胡萝卜愈伤组织上分别接种30条、50条和100条咖啡短体线虫,60 d后的统计结果表明咖啡短体线虫能够在胡萝卜愈伤组织上大量繁殖,不同处理组之间存在显著性差异(p0.05),随着初始接种虫量的增加,其繁殖量逐渐增大。
【学位单位】：河南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S432.45
【文章目录】：
致谢
摘要
1 文献综述
    1.1 短体线虫的分类史
    1.2 短体线虫的种类
    1.3 短体线虫的形态学鉴定特征
    1.4 短体线虫的分子鉴定及系统学研究进展
    1.6 短体线虫的生物学习性
        1.6.1 短体线虫的生活史
        1.6.2 短体线虫的繁殖力
    1.7 短体线虫的经济重要性
        1.7.1 短体线虫的重要种类和寄主范围
        1.7.2 短体线虫的致病性
    1.8 短体线虫的发生条件
    1.9 短体线虫的防治方法
2 引言
3 材料与方法
    3.1 材料
        3.1.1 供试试剂
        3.1.2 主要试剂配制
    3.2 方法
        3.2.1 样品的采集
        3.2.2 线虫的分离
        3.2.3 短体线虫的培养和扩繁
            3.2.3.1 胡萝卜愈伤组织的制备
            3.2.3.2 短体线虫的扩繁
        3.2.4 短体线虫玻片的制作
        3.2.5 形态学特征数据的测量
        3.2.6 短体线虫rDNAPCR扩增
            3.2.6.1 单条线虫的DNA提取
            3.2.6.2 rDNA18S、28SD2D3区、ITS序列的PCR扩增
            3.2.6.3 短体线虫rDNAPCR产物的克隆与测序
        3.2.7 序列分析及系统发育树的构建
        3.2.8 咖啡短体线虫繁殖力测定
4 结果与分析
    4.1 咖啡短体线虫（P.coffeae）的描述
        4.1.1 形态学鉴定结果
        4.1.2 分子序列特征分析
    4.2 斯克里布纳短体线虫（P.scribneri）的描述
        4.2.1 形态学鉴定结果
        4.2.2 分子序列特征分析
    4.3 落选短体线虫（P.neglectus）的描述
        4.3.1 形态学鉴定结果
        4.3.2 分子序列特征分析
    4.4 系统发育树的构建
        4.4.1 基于rDNA18S序列的短体线虫系统发育关系分析
        4.4.2 基于rDNA28SD2D3区序列的短体线虫系统发育关系分析
        4.4.3 基于rDNAITS序列的短体线虫系统发育关系分析
    4.5 咖啡短体线虫的繁殖力测定
5 结论与讨论
    5.1 河南、山东、安徽三省短体线虫种类的分类鉴定
    5.2 短体线虫的系统发育关系
    5.3 咖啡短体线虫繁殖力测定
参考文献
ABSTRACT

【参考文献】

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本文编号：2871370