绿僵菌产孢调控转录因子及MicroRNA抑制表达载体的研究
发布时间：2020-12-07 20:55
绿僵菌（Metarhizium roberstii）是一类重要的虫生真菌,已经成功用于多种农林害虫的生物防治,但产孢率低是限制其应用推广的一个重要因素。转录因子是信号传导途径上重要的元件,通过调控靶标基因的表达从而进一步调控细胞的生长发育,对该类因子调控产孢功能的研究,有助于从分子水平上了解菌株中产孢相关基因表达调控的分子机制。为探明此类转录因子在绿僵菌中可能的调控功能,本研究选择了其中TEA/ATTS家族的AbaA以及APSES家族的StuA基因作为研究对象对绿僵菌中转录因子的产孢相关调控功能进行了深入的研究。通过对其序列及结构特征进行初步分析,再通过基因敲除等手段获得基因敲除突变株,对突变株在宏观、微观水平上的形态特征以及分子水平上的特征与野生型菌株进行差异比较,以进一步了解其相关功能。此外,本研究在实验室前期工作的基础上,推测绿僵菌中milRNA7（micro like RNA7）的功能可能与绿僵菌的产孢调控过程相关。本研究通过构建一种可以特异性研究micro RNA功能的STTM体系,对其靶标micro RNA的功能进行抑制,通过分析该转基因菌株与野生型菌株的差异以推断该mil...
【文章来源】：安徽农业大学安徽省
【文章页数】：113 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
不同真菌的APSESDNA结合结构域多序列比对Fig.3-2.MultiplealignmentoftheAPSESDNA-bindingdomainfromdifferentfungi
段 StuA 下游 3-4 重组载体的构建及转基因菌株的on of recombinant plasmids and acq臂，片段大小分别为 1008b StuA 基因敲除重组质粒，以基因 CDS 区序列为验证，野生型罗伯茨绿僵菌应的 1050bp 大小的目的的遗传稳定性，将敲除株因条带，做最后检测(图 31285bp对照株
可以推断所选 ARSEF23APSES 转录因子基因（EF-II 进化支 APSES 家族转录因子中的 StuA。基于保守的结构以及系统遗传树的相似性，该基因被鉴定为 StuA 转录因子敲除等方法对其调控功能进行进一步的研究。载体的构建及转基因菌株的获得基因序列同源检索分析，在罗伯茨绿僵菌基因组和转录组数DS 序列。根据这个 CDS 序列设计引物（表 3-3），通过 StuA 基因的上下游臂连入载体 pDHt-bar 质粒的 bar 基因的长度符合目的基因扩增片段大小的产物（图 3-4），利用 N测序结果，确定上下游臂是否成功连入载体中。
【参考文献】：
期刊论文
[1]An expression atlas of miRNAs in Arabidopsis thaliana[J]. Le Xu,Yugang Hu,Ying Cao,Jingrui Li,Ligeng Ma,Yan Li,Yijun Qi. Science China(Life Sciences). 2018(02)
[2]绿僵菌Marho2基因功能初步分析[J]. 陈丽,易萌,周江,孙云子,张传博. 热带作物学报. 2018(02)
[3]菌根共生相关miRNA研究进展[J]. 白龙,李丽丽,杨洪一. 北方园艺. 2017(13)
[4]上海生科院利用STTM技术发现水稻miRNA的新功能[J]. 郑庆伟. 农药市场信息. 2017(14)
[5]mro-miR-33在绿僵菌产孢中的作用[J]. 李琼,崔春来,宋红生,王四宝. 菌物学报. 2017(06)
[6]粗糙脉孢菌无性产孢过程中增量表达基因的功能分析[J]. 王飞,胡成成,刘波,李少杰,孙宪昀. 菌物学报. 2017(03)
[7]植物bHLH转录因子参与非生物胁迫信号通路研究进展[J]. 王昕嘉,李昆志. 生命科学. 2015(02)
[8]毒力回归计算方法及相应软件使用介绍[J]. 武怀恒,万鹏,黄民松. 安徽农业科学. 2014(27)
[9]miRNA海绵表达载体的构建策略[J]. 李铁军. 医学分子生物学杂志. 2014 (04)
[10]基于分子结构的lncRNA分子功能的研究进展[J]. 杨华,樊红. 东南大学学报(医学版). 2014(01)
博士论文
[1]构巢曲霉胞质分裂SIN途径反向调节基因的研究[D]. 仲国维.南京师范大学 2013
硕士论文
[1]蝗绿僵菌Macwh基因功能研究[D]. 陈星.重庆大学 2017
[2]蝗绿僵菌同源异型盒基因MaH1的克隆及功能研究[D]. 李慕春.重庆大学 2017
[3]转录因子ADA-6对粗糙脉孢菌无性发育分子调控机制的研究[D]. 王飞.齐鲁工业大学 2016
[4]蝗绿僵菌MabrlA在产孢调控作用和致病机制中的功能研究[D]. 石佑慧.重庆大学 2016
[5]绿僵菌核内锌指转录因子MaCrz1基因功能研究[D]. 刘远泽.重庆大学 2014
[6]蝗绿僵菌精氨酸酶基因MaAGA的功能分析[D]. 兰霞.四川农业大学 2013
[7]绿僵菌组成型启动子PMagpd和特异启动子PMagas1的结构与功能研究[D]. 焦润.重庆大学 2012
[8]基于Microarray芯片技术筛选大鼠脑创伤后皮层差异表达的microRNA[D]. 李耀华.天津医科大学 2009
[9]金龟子绿僵菌MaECM33基因的克隆及分析[D]. 蓝天敏.重庆大学 2009
[10]绿僵菌微循环产孢及相关基因分析[D]. 张石柱.重庆大学 2007
本文编号：2903886
【文章来源】：安徽农业大学安徽省
【文章页数】：113 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
不同真菌的APSESDNA结合结构域多序列比对Fig.3-2.MultiplealignmentoftheAPSESDNA-bindingdomainfromdifferentfungi
段 StuA 下游 3-4 重组载体的构建及转基因菌株的on of recombinant plasmids and acq臂，片段大小分别为 1008b StuA 基因敲除重组质粒，以基因 CDS 区序列为验证，野生型罗伯茨绿僵菌应的 1050bp 大小的目的的遗传稳定性，将敲除株因条带，做最后检测(图 31285bp对照株
可以推断所选 ARSEF23APSES 转录因子基因（EF-II 进化支 APSES 家族转录因子中的 StuA。基于保守的结构以及系统遗传树的相似性，该基因被鉴定为 StuA 转录因子敲除等方法对其调控功能进行进一步的研究。载体的构建及转基因菌株的获得基因序列同源检索分析，在罗伯茨绿僵菌基因组和转录组数DS 序列。根据这个 CDS 序列设计引物（表 3-3），通过 StuA 基因的上下游臂连入载体 pDHt-bar 质粒的 bar 基因的长度符合目的基因扩增片段大小的产物（图 3-4），利用 N测序结果，确定上下游臂是否成功连入载体中。
【参考文献】：
期刊论文
[1]An expression atlas of miRNAs in Arabidopsis thaliana[J]. Le Xu,Yugang Hu,Ying Cao,Jingrui Li,Ligeng Ma,Yan Li,Yijun Qi. Science China(Life Sciences). 2018(02)
[2]绿僵菌Marho2基因功能初步分析[J]. 陈丽,易萌,周江,孙云子,张传博. 热带作物学报. 2018(02)
[3]菌根共生相关miRNA研究进展[J]. 白龙,李丽丽,杨洪一. 北方园艺. 2017(13)
[4]上海生科院利用STTM技术发现水稻miRNA的新功能[J]. 郑庆伟. 农药市场信息. 2017(14)
[5]mro-miR-33在绿僵菌产孢中的作用[J]. 李琼,崔春来,宋红生,王四宝. 菌物学报. 2017(06)
[6]粗糙脉孢菌无性产孢过程中增量表达基因的功能分析[J]. 王飞,胡成成,刘波,李少杰,孙宪昀. 菌物学报. 2017(03)
[7]植物bHLH转录因子参与非生物胁迫信号通路研究进展[J]. 王昕嘉,李昆志. 生命科学. 2015(02)
[8]毒力回归计算方法及相应软件使用介绍[J]. 武怀恒,万鹏,黄民松. 安徽农业科学. 2014(27)
[9]miRNA海绵表达载体的构建策略[J]. 李铁军. 医学分子生物学杂志. 2014 (04)
[10]基于分子结构的lncRNA分子功能的研究进展[J]. 杨华,樊红. 东南大学学报(医学版). 2014(01)
博士论文
[1]构巢曲霉胞质分裂SIN途径反向调节基因的研究[D]. 仲国维.南京师范大学 2013
硕士论文
[1]蝗绿僵菌Macwh基因功能研究[D]. 陈星.重庆大学 2017
[2]蝗绿僵菌同源异型盒基因MaH1的克隆及功能研究[D]. 李慕春.重庆大学 2017
[3]转录因子ADA-6对粗糙脉孢菌无性发育分子调控机制的研究[D]. 王飞.齐鲁工业大学 2016
[4]蝗绿僵菌MabrlA在产孢调控作用和致病机制中的功能研究[D]. 石佑慧.重庆大学 2016
[5]绿僵菌核内锌指转录因子MaCrz1基因功能研究[D]. 刘远泽.重庆大学 2014
[6]蝗绿僵菌精氨酸酶基因MaAGA的功能分析[D]. 兰霞.四川农业大学 2013
[7]绿僵菌组成型启动子PMagpd和特异启动子PMagas1的结构与功能研究[D]. 焦润.重庆大学 2012
[8]基于Microarray芯片技术筛选大鼠脑创伤后皮层差异表达的microRNA[D]. 李耀华.天津医科大学 2009
[9]金龟子绿僵菌MaECM33基因的克隆及分析[D]. 蓝天敏.重庆大学 2009
[10]绿僵菌微循环产孢及相关基因分析[D]. 张石柱.重庆大学 2007
本文编号：2903886
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