蝗绿僵菌C6转录因子MaRcp的克隆及功能研究
发布时间：2020-12-10 19:12
蝗绿僵菌作为专一性的杀蝗昆虫病原真菌,如今已被全面应用于防治蝗灾。孢子作为昆虫病原真菌的主要侵染器官,同时代表着细胞分化过程的起始与完成,因此在真菌的生长和繁殖过程中起着关键性的作用。产孢是丝状真菌的繁殖过程,许多丝状真菌有两种产孢方式:菌丝在顶端或侧端分化形成孢子的正常产孢方式;绕过菌丝时期直接形成孢子的微循环产孢方式。目前,对于昆虫病原真菌的正常产孢研究的比较多,而对于微循环产孢研究的略少。微循环产孢由于缺乏或极大地限制了菌丝的生长,故与正常产孢过程相比有不少优点,比如提高孢子产量,缩短产孢时间,增强孢子的抗逆性能等。因此,研究调控微循环产孢的机制能为改良生防真菌提供理论基础和新的技术指导。本研究筛选了蝗绿僵菌正常产孢与微循环产孢过程中差异表达的基因C6转录因子MaRcp进行了功能研究。利用生物信息学分析得出蝗绿僵菌MaRcp的cDNA全长为954 bp,编码34.9 kDa的蛋白质,等电点为8.2。此外,还发现其含有一个类似于GAL4的Zn(II)2Cys6双核簇结构域。通过构建C6转录因子MaRcp的缺失及回复菌株,研究了MaRcp在蝗绿僵菌中的功能,结果表明MaRcp缺失后蝗...
【文章来源】：重庆大学重庆市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Zn(II)2Cys6锌簇蛋白的结构示意图
33图 2.1 MaRcp 的保守结构域比对和系统发育树分析（A）MaRcp 的结构特征；（B）不同物种间 C6 转录因子的同源比对，发现其均含有 Zn(II)2Cys6双核簇结构域；（C）MaRcp 的系统发育树分析Fig.2.1 Conserved domain sequence alignment and phylogenetic analysis of MaRcp(A) Conservative structure domain position in N-terminal of MaRcp which contain 44aa predictedby SMART software. (B) Alignments of amino acid sequences of Zn(II)2Cys6 binuclear clusterdomain with orthologues from other fungi. Asterisks indicate six conserved cysteines. (C)Phylogenetic analysis of MaRcp with MEGA 4.0.
图2.2 C6转录因子敲除、回复载体的构建示意图及Southern验证图（A）构建敲除与回复载体的模式图；（B）Southern blot 验证正确转化子的结果图。Fig.2.2 Schematic of deletion and complementation strains construction and vertification.(A) Pattern diagram of deletion and complementation strain construction. (B) Transformantsvertification by Southern blot.2.3.3 MaRcp 缺失后，在 1/4 SDAY 培养基上产孢方式发生改变由于 MaRcp 来源于在正常产孢与微循环产孢中差异表达的基因，我们想知道MaRcp 的产孢方式如何，因此观察了 WT、ΔMaRcp 以及 CP 菌株在 SYA、1/4 SDAY培养基上的产孢方式（Fig.2.3）。我们发现在 SYA 培养基上 WT、ΔMaRcp、CP菌株的产孢方式无差异，均为微循环产孢（Fig.2.3A）。而在 1/4 SDAY 培养基上，与 WT、CP 菌株相比，ΔMaRcp 产孢方式发生改变。WT、CP 菌株为正常产孢，菌丝细长发达，且不断向前延伸，在 20 h 才形成产孢结构；而 ΔMaRcp 菌株为微循环产孢，菌丝粗短，在 14 h 即形成产孢结构，20 h 已经大量产孢，其产孢时间提前了近 6 h（Fig.2.3B）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国的蝗灾及防控对策[J]. 任炳忠,张雪. 吉林农业大学学报. 2013(02)
[2]20世纪以来中国蝗虫监测预测研究动态进展[J]. 白月明,刘玲,乐章燕,王培娟,高素华. 中国农学通报. 2012(26)
[3]国内外蝗害治理技术现状与展望[J]. 张龙. 应用昆虫学报. 2011(04)
[4]丝状真菌产孢机制及其相关基因研究进展[J]. 刘静,李中元,王军娥,刘晓魁,陈异. 贵州农业科学. 2009(04)
[5]Zn(Ⅱ)2Cys6锌簇蛋白研究进展[J]. 高蓝. 广东药学院学报. 2009(02)
[6]蝗虫灾害的生物防治现状及发展趋势[J]. 周永兴. 林业建设. 2008(06)
[7]贵港市近年蝗虫发生及治理对策初探[J]. 廖伟萍,谭春凤,徐文强,梁华源. 广西农学报. 2008(04)
[8]蝗虫天敌昆虫研究概述[J]. 胡奇,张龙. 中国植保导刊. 2007(04)
[9]酿酒酵母锌簇转录因子Pdr1和Pdr3的研究进展[J]. 王德俊,徐铮,曹永兵,姜远英. 医学分子生物学杂志. 2005(03)
[10]白僵菌分生孢子深层培养及其对马尾松毛虫的毒力[J]. 宋漳. 应用与环境生物学报. 2005(01)
本文编号：2909231
【文章来源】：重庆大学重庆市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Zn(II)2Cys6锌簇蛋白的结构示意图
33图 2.1 MaRcp 的保守结构域比对和系统发育树分析（A）MaRcp 的结构特征；（B）不同物种间 C6 转录因子的同源比对，发现其均含有 Zn(II)2Cys6双核簇结构域；（C）MaRcp 的系统发育树分析Fig.2.1 Conserved domain sequence alignment and phylogenetic analysis of MaRcp(A) Conservative structure domain position in N-terminal of MaRcp which contain 44aa predictedby SMART software. (B) Alignments of amino acid sequences of Zn(II)2Cys6 binuclear clusterdomain with orthologues from other fungi. Asterisks indicate six conserved cysteines. (C)Phylogenetic analysis of MaRcp with MEGA 4.0.
图2.2 C6转录因子敲除、回复载体的构建示意图及Southern验证图（A）构建敲除与回复载体的模式图；（B）Southern blot 验证正确转化子的结果图。Fig.2.2 Schematic of deletion and complementation strains construction and vertification.(A) Pattern diagram of deletion and complementation strain construction. (B) Transformantsvertification by Southern blot.2.3.3 MaRcp 缺失后，在 1/4 SDAY 培养基上产孢方式发生改变由于 MaRcp 来源于在正常产孢与微循环产孢中差异表达的基因，我们想知道MaRcp 的产孢方式如何，因此观察了 WT、ΔMaRcp 以及 CP 菌株在 SYA、1/4 SDAY培养基上的产孢方式（Fig.2.3）。我们发现在 SYA 培养基上 WT、ΔMaRcp、CP菌株的产孢方式无差异，均为微循环产孢（Fig.2.3A）。而在 1/4 SDAY 培养基上，与 WT、CP 菌株相比，ΔMaRcp 产孢方式发生改变。WT、CP 菌株为正常产孢，菌丝细长发达，且不断向前延伸，在 20 h 才形成产孢结构；而 ΔMaRcp 菌株为微循环产孢，菌丝粗短，在 14 h 即形成产孢结构，20 h 已经大量产孢，其产孢时间提前了近 6 h（Fig.2.3B）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国的蝗灾及防控对策[J]. 任炳忠,张雪. 吉林农业大学学报. 2013(02)
[2]20世纪以来中国蝗虫监测预测研究动态进展[J]. 白月明,刘玲,乐章燕,王培娟,高素华. 中国农学通报. 2012(26)
[3]国内外蝗害治理技术现状与展望[J]. 张龙. 应用昆虫学报. 2011(04)
[4]丝状真菌产孢机制及其相关基因研究进展[J]. 刘静,李中元,王军娥,刘晓魁,陈异. 贵州农业科学. 2009(04)
[5]Zn(Ⅱ)2Cys6锌簇蛋白研究进展[J]. 高蓝. 广东药学院学报. 2009(02)
[6]蝗虫灾害的生物防治现状及发展趋势[J]. 周永兴. 林业建设. 2008(06)
[7]贵港市近年蝗虫发生及治理对策初探[J]. 廖伟萍,谭春凤,徐文强,梁华源. 广西农学报. 2008(04)
[8]蝗虫天敌昆虫研究概述[J]. 胡奇,张龙. 中国植保导刊. 2007(04)
[9]酿酒酵母锌簇转录因子Pdr1和Pdr3的研究进展[J]. 王德俊,徐铮,曹永兵,姜远英. 医学分子生物学杂志. 2005(03)
[10]白僵菌分生孢子深层培养及其对马尾松毛虫的毒力[J]. 宋漳. 应用与环境生物学报. 2005(01)
本文编号：2909231
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