钩状木霉抑菌作用的比较基因组学和蛋白质组学研究
发布时间：2020-12-15 03:42
木霉（Trichoderma）是真菌中重要的生物防治菌之一。本文以从土壤中分离获得的具有抑菌作用的钩状木霉（Trichoderma hamatum）为研究对象,采用比较基因组学和蛋白组学等方法,分析差异基因和差异表达蛋白,探索该钩状木霉菌产生抑菌作用的机理,并通过实时荧光定量PCR对差异基因表达进行验证。主要的研究结果如下：1.从致病菌区土壤中分离与鉴定出对烟草青枯病有生物防治效果的钩状木霉菌株YYH13和无生物防治效果的YYH16。YYH13代谢产物和发酵液对青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）有明显的抑制作用,发酵液在80℃以内能保持抑菌活性,120h的发酵液抑菌效果最好。田间试验进一步验证了YYH13菌剂对烟草青枯病有较好的防治作用。2.采用硫酸铵沉淀法从发酵液中分离得到具有抑菌活性的蛋白质组分,SDS-PAGE法分析YYH16和YYH13发酵液的差异蛋白,确定差异蛋白的分子量范围为80-100 kDa、40-50 kDa和20-30 kDa。用LC-MS/MS初步鉴定出125个差异蛋白质。以Mascot库为基准,从8个蛋白质片段中筛选到与生物防治密切相关...
【文章来源】：湖南农业大学湖南省
【文章页数】：124 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２－１部分筛选的菌株??Ｆｉｇ?２－１?Ｓｅｌｅｃ化ｄ?ｓｔｒａｉｎｓ??
第二章钩状木霉生物防治菌株的筛选与盜定??属于无性阶段，这符合半知菌亚口的特征，可确定属于半知菌亚口。而且筛选菌??株的菌丝体发达，分生抱子梗上形成分生抱子可确定其属于丝抱目（图２－３Ｂ）。通??过扫描电镜观察，菌株的菌丝体是正直和纵横交错的分支（图２－３Ａ）。参考民ｉｆａ沪９１??和Ｂｉｓｓｅｔｔｔｗｗｉ种群分类系统初步鉴定筛选的生物防治活性菌株属于木霉属。??Ａ?Ｂ??ｍ?■?Ａ?ａ??Ｃ?Ｄ??（Ａ：ＹＹＨ１３；?Ｂ：ＹＹＨ１６；?Ｃ：ＹＹＨ１４；?Ｄ：ＹＹＨ０７）??图２－２部分菌株形态观察??Ｆｉｇ?２－２?Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ?ｏｆ?ｓｅｌｅｃｔｅｄ?ｓｔｒａｉｎｓ??Ａ?Ｂ??（Ａ：菌丝；Ｂ：抱子）??图２－３苗株扫描电镜图??Ｆｉｇ?２－３?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ?ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ?ｓｃａｎｎｉｎｇ?ｏｆ?ｓｅｌｅｃ怡ｄ?ｓｔｒａｉｎｓ??２．３．２．２分子鉴定??将筛选出的菌株进行ＩＴＳ?ＰＣ民扩增，测序结果显示菌株的ＩＴＳ片段大小在??５６０ｂｐ－７２０ｂｐ之间。经Ｂｌａｓｔ比对显示，筛选的菌株均属于木霉属。但通过构建系??统发育树，发现不同菌株间存在明显的进化差异。??从图２－５可知，筛选的菌株分为兰类：其中ＹＹＨ０Ｋ?ＹＹＨ０２、ＹＹＨ０６、ＹＹＨ０９、??ＹＹＨ１３－２０、ＹＹＨ２２、ＹＹＨ２８、ＹＹＨ３０、ＹＹＨ３６?亲缘关系较近，这?１６?株菌均与??７：片顯加誦（钩状木霉ＭＴＳ序列同源性最高，达９９％；而ＹＹＨ０８、ＹＹ监１、ＹＹＨ２７??１３??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]长枝木霉TlCC鉴定及其生物学特性研究[J]. 王斌,Ali Khatib Bakar,刘金亮,张世宏,潘洪玉. 中国农学通报. 2011(05)
[2]哈茨木霉高产几丁质酶菌株的筛选及产酶条件研究[J]. 王红梅,蒋立科,陶芳,魏练平,岳永德. 浙江大学学报(农业与生命科学版). 2010(02)
[3]里氏木霉纤维二糖水解酶Ⅱ在毕赤酵母中的高效表达[J]. 张煜,刘刚,余少文,汤新,邢苗. 菌物学报. 2005(03)
[4]绿色木霉TR-8菌株的生物学特性研究[J]. 纪明山,李博强,许远,时越,谷祖敏,陈捷. 沈阳农业大学学报. 2004(03)
[5]应用木霉制剂防治几种药用植物病害的研究[J]. 丁万隆,程惠珍,陈君. 中国中药杂志. 2003(01)
本文编号：2917588
【文章来源】：湖南农业大学湖南省
【文章页数】：124 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２－１部分筛选的菌株??Ｆｉｇ?２－１?Ｓｅｌｅｃ化ｄ?ｓｔｒａｉｎｓ??
第二章钩状木霉生物防治菌株的筛选与盜定??属于无性阶段，这符合半知菌亚口的特征，可确定属于半知菌亚口。而且筛选菌??株的菌丝体发达，分生抱子梗上形成分生抱子可确定其属于丝抱目（图２－３Ｂ）。通??过扫描电镜观察，菌株的菌丝体是正直和纵横交错的分支（图２－３Ａ）。参考民ｉｆａ沪９１??和Ｂｉｓｓｅｔｔｔｗｗｉ种群分类系统初步鉴定筛选的生物防治活性菌株属于木霉属。??Ａ?Ｂ??ｍ?■?Ａ?ａ??Ｃ?Ｄ??（Ａ：ＹＹＨ１３；?Ｂ：ＹＹＨ１６；?Ｃ：ＹＹＨ１４；?Ｄ：ＹＹＨ０７）??图２－２部分菌株形态观察??Ｆｉｇ?２－２?Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ?ｏｆ?ｓｅｌｅｃｔｅｄ?ｓｔｒａｉｎｓ??Ａ?Ｂ??（Ａ：菌丝；Ｂ：抱子）??图２－３苗株扫描电镜图??Ｆｉｇ?２－３?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ?ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ?ｓｃａｎｎｉｎｇ?ｏｆ?ｓｅｌｅｃ怡ｄ?ｓｔｒａｉｎｓ??２．３．２．２分子鉴定??将筛选出的菌株进行ＩＴＳ?ＰＣ民扩增，测序结果显示菌株的ＩＴＳ片段大小在??５６０ｂｐ－７２０ｂｐ之间。经Ｂｌａｓｔ比对显示，筛选的菌株均属于木霉属。但通过构建系??统发育树，发现不同菌株间存在明显的进化差异。??从图２－５可知，筛选的菌株分为兰类：其中ＹＹＨ０Ｋ?ＹＹＨ０２、ＹＹＨ０６、ＹＹＨ０９、??ＹＹＨ１３－２０、ＹＹＨ２２、ＹＹＨ２８、ＹＹＨ３０、ＹＹＨ３６?亲缘关系较近，这?１６?株菌均与??７：片顯加誦（钩状木霉ＭＴＳ序列同源性最高，达９９％；而ＹＹＨ０８、ＹＹ监１、ＹＹＨ２７??１３??
第二章钩状木霉生物防治菌株的筛选与盜定??属于无性阶段，这符合半知菌亚口的特征，可确定属于半知菌亚口。而且筛选菌??株的菌丝体发达，分生抱子梗上形成分生抱子可确定其属于丝抱目（图２－３Ｂ）。通??过扫描电镜观察，菌株的菌丝体是正直和纵横交错的分支（图２－３Ａ）。参考民ｉｆａ沪９１??和Ｂｉｓｓｅｔｔｔｗｗｉ种群分类系统初步鉴定筛选的生物防治活性菌株属于木霉属。??Ａ?Ｂ??ｍ?■?Ａ?ａ??Ｃ?Ｄ??（Ａ：ＹＹＨ１３；?Ｂ：ＹＹＨ１６；?Ｃ：ＹＹＨ１４；?Ｄ：ＹＹＨ０７）??图２－２部分菌株形态观察??Ｆｉｇ?２－２?Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ?ｏｆ?ｓｅｌｅｃｔｅｄ?ｓｔｒａｉｎｓ??Ａ?Ｂ??（Ａ：菌丝；Ｂ：抱子）??图２－３苗株扫描电镜图??Ｆｉｇ?２－３?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ?ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ?ｓｃａｎｎｉｎｇ?ｏｆ?ｓｅｌｅｃ怡ｄ?ｓｔｒａｉｎｓ??２．３．２．２分子鉴定??将筛选出的菌株进行ＩＴＳ?ＰＣ民扩增，测序结果显示菌株的ＩＴＳ片段大小在??５６０ｂｐ－７２０ｂｐ之间。经Ｂｌａｓｔ比对显示，筛选的菌株均属于木霉属。但通过构建系??统发育树，发现不同菌株间存在明显的进化差异。??从图２－５可知，筛选的菌株分为兰类：其中ＹＹＨ０Ｋ?ＹＹＨ０２、ＹＹＨ０６、ＹＹＨ０９、??ＹＹＨ１３－２０、ＹＹＨ２２、ＹＹＨ２８、ＹＹＨ３０、ＹＹＨ３６?亲缘关系较近，这?１６?株菌均与??７：片顯加誦（钩状木霉ＭＴＳ序列同源性最高，达９９％；而ＹＹＨ０８、ＹＹ监１、ＹＹＨ２７??１３??
【参考文献】：
期刊论文
[1]长枝木霉TlCC鉴定及其生物学特性研究[J]. 王斌,Ali Khatib Bakar,刘金亮,张世宏,潘洪玉. 中国农学通报. 2011(05)
[2]哈茨木霉高产几丁质酶菌株的筛选及产酶条件研究[J]. 王红梅,蒋立科,陶芳,魏练平,岳永德. 浙江大学学报(农业与生命科学版). 2010(02)
[3]里氏木霉纤维二糖水解酶Ⅱ在毕赤酵母中的高效表达[J]. 张煜,刘刚,余少文,汤新,邢苗. 菌物学报. 2005(03)
[4]绿色木霉TR-8菌株的生物学特性研究[J]. 纪明山,李博强,许远,时越,谷祖敏,陈捷. 沈阳农业大学学报. 2004(03)
[5]应用木霉制剂防治几种药用植物病害的研究[J]. 丁万隆,程惠珍,陈君. 中国中药杂志. 2003(01)
本文编号：2917588
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