班氏跳小蜂气味结合蛋白OBPs的结合特性分析
发布时间：2021-01-21 21:23
扶桑绵粉蚧（Phenacoccus solenopsis Tinsley）是一种严重危害棉花的重要入侵性害虫,而班氏跳小蜂（Aenasius bambawalei Hayat）是其专性寄生性天敌,在扶桑绵粉蚧生物防治过程中具有较好的应用潜力。昆虫气味结合蛋白（OBPs）是气味分子和气味受体之间的桥梁,能够携带疏水性气味分子穿过亲水性淋巴液到达受体细胞,对气味的特异性结合和选择运输上有着重要的研究意义,若能明确班氏跳小蜂气味结合蛋白与配体的相互作用关系,将为筛选班氏跳小蜂寄主定位行为活性物质提供理论依据,也为扶桑绵粉蚧的生物防治提供绿色通道。为此,本课题以班氏跳小蜂为研究对象,在构建转录组的基础上筛选并克隆出了5个AbamOBPs基因,完成AbamOBP50与AbamOBP1的表达与纯化:测定了AbamOBP50与22种寄主挥发物的结合特性;利用荧光猝灭、圆二色谱及同源建模和分子对接分析了AbamOBP1与配基的相互作用关系;利用RNAi及Y型嗅觉仪初步筛选出了对班氏跳小蜂具有行为活性的物质。主要研究结果如下:1、班氏跳小蜂AbamOBPs基因克隆、蛋白表达和纯化通过RT-PCR技术成功...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
班氏跳小蜂AbamOBP50、AbamOBP41、AbamOBP1、AbamOBP47和AbamOBP43的核苷酸序列及推导的氨基酸序列
2-2 班氏跳小蜂 AbamOBP50、AbamOBP47、AbamOBP43、AbamOBP41 和 AbamOBP1 基的 PCR 扩增Fig. 2-2 PCR amplification of AbamOBP50、AbamOBP47、AbamOBP43、AbamOBP41 andAbamOBP1 genes from A.bambawalei2.4 班氏跳小蜂 AbamOBPs 原核表达将成功构建的 pET30a-AbamOBP50 和 pET17b-AbamOBP1 转化到表达菌21(DE3)pLysS 感受态细胞中，分别涂布在含有 Kan 和 Amp 的 LB 平板上，37置培养 12h，挑斑摇菌送测检验，对测序正确的菌株进行蛋白诱导表达T30a-AbamOBP50 和 pET17b-AbamOBP1 诱导条件设置为 37℃，220r/min 活化600在 0.4-0.8，加 IPTG 终浓度为 0.1mmol/L 的条件下诱导 4h 后，经 SDS-PAG测，在蛋白对应大小位置处成功表达了目的融合蛋白（图 2-2），而在对照组的
班氏跳小蜂气味结合蛋白 OBPs 的结合特性分析 15kD 左右位置有一条带。以 pET17b 为表达载体的含 AbamOBP1 的融合蛋白经 SDS-PAGE 检测后发现分表达在沉淀中。将包涵体进行变性、复性、透析处理后，过 DE52 阴离子交和 QFF 强阴离子交换柱后获得 AbamOBP1 纯蛋白（图 2 -2），经 SDS-PAGE显示只在 15kD 左右位置有一条带。获得的纯蛋白 AbamOBP50 纯度较高，可用续的荧光竞争结合试验。获得的纯蛋白 AbamOBP1 纯度较高，可为后续的荧光及圆二色谱分析试验。1 2 3 4 5 6 7
【参考文献】：
期刊论文
[1]昆虫气味认知的嗅觉神经结构及分子机制[J]. 那杰,白旭,郭瑞,那宇鹏,王丹,刘卫娜. 现代生物医学进展. 2015(04)
[2]班氏跳小蜂对扶桑绵粉蚧的寄生效能[J]. 高原,黄建,王竹红,温玉琪,钟顺. 武夷科学. 2014(00)
[3]班氏跳小蜂触角及其上感器的扫描电镜观察[J]. 龙秀珍,高燕,曾宪儒,韦德卫,曾涛,于永浩. 环境昆虫学报. 2013(03)
[4]班氏跳小蜂对扶桑绵粉蚧的寄生功能反应[J]. 黄俊,吕要斌,张娟,黄芳,贝亚维. 昆虫学报. 2012(12)
[5]班氏跳小蜂个体发育研究[J]. 何佳,许再福. 环境昆虫学报. 2012(04)
[6]扶桑绵粉蚧寄生性天敌班氏跳小蜂生物学研究[J]. 黄玲,刘慧,肖铁光,周社文. 应用昆虫学报. 2011(06)
[7]昆虫对气味信息素的感受机制[J]. 刘召,花保祯. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2010(11)
[8]吡蚜酮与牛血清白蛋白的相互作用[J]. 徐巍,吴霞,周海平,刘潇彧,杨景和,范金勇,张梅凤. 高等学校化学学报. 2009(11)
[9]野桑蚕性信息素结合蛋白基因pbp1、气味受体基因or1和or3的克隆及其与家蚕同源基因的进化分析[J]. 张升祥,徐世清,孔令斐,司马杨虎,崔为正. 昆虫学报. 2009(08)
[10]广州扶桑上发现扶桑绵粉蚧[J]. 马骏,胡学难,刘海军,梁帆,赵菊鹏,冯黎霞,陈乃中. 植物检疫. 2009(02)
硕士论文
[1]班氏跳小蜂寄主定位的嗅觉机制[D]. 聂晓培.华中农业大学 2017
[2]松褐天牛肿腿蜂的寄主定位机制[D]. 周长祥.华中农业大学 2016
[3]松褐天牛气味结合蛋白基因的克隆与功能分析[D]. 王娟.华中农业大学 2015
[4]扶桑绵粉蚧寄生性天敌的优势种—班氏跳小蜂寄生特性的研究[D]. 杜亮.浙江农林大学 2014
[5]扶桑绵粉蚧对棉花挥发物影响的研究及其生殖方式的研究[D]. 赵奕曼.浙江农林大学 2014
本文编号：2991916
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
班氏跳小蜂AbamOBP50、AbamOBP41、AbamOBP1、AbamOBP47和AbamOBP43的核苷酸序列及推导的氨基酸序列
2-2 班氏跳小蜂 AbamOBP50、AbamOBP47、AbamOBP43、AbamOBP41 和 AbamOBP1 基的 PCR 扩增Fig. 2-2 PCR amplification of AbamOBP50、AbamOBP47、AbamOBP43、AbamOBP41 andAbamOBP1 genes from A.bambawalei2.4 班氏跳小蜂 AbamOBPs 原核表达将成功构建的 pET30a-AbamOBP50 和 pET17b-AbamOBP1 转化到表达菌21(DE3)pLysS 感受态细胞中，分别涂布在含有 Kan 和 Amp 的 LB 平板上，37置培养 12h，挑斑摇菌送测检验，对测序正确的菌株进行蛋白诱导表达T30a-AbamOBP50 和 pET17b-AbamOBP1 诱导条件设置为 37℃，220r/min 活化600在 0.4-0.8，加 IPTG 终浓度为 0.1mmol/L 的条件下诱导 4h 后，经 SDS-PAG测，在蛋白对应大小位置处成功表达了目的融合蛋白（图 2-2），而在对照组的
班氏跳小蜂气味结合蛋白 OBPs 的结合特性分析 15kD 左右位置有一条带。以 pET17b 为表达载体的含 AbamOBP1 的融合蛋白经 SDS-PAGE 检测后发现分表达在沉淀中。将包涵体进行变性、复性、透析处理后，过 DE52 阴离子交和 QFF 强阴离子交换柱后获得 AbamOBP1 纯蛋白（图 2 -2），经 SDS-PAGE显示只在 15kD 左右位置有一条带。获得的纯蛋白 AbamOBP50 纯度较高，可用续的荧光竞争结合试验。获得的纯蛋白 AbamOBP1 纯度较高，可为后续的荧光及圆二色谱分析试验。1 2 3 4 5 6 7
【参考文献】：
期刊论文
[1]昆虫气味认知的嗅觉神经结构及分子机制[J]. 那杰,白旭,郭瑞,那宇鹏,王丹,刘卫娜. 现代生物医学进展. 2015(04)
[2]班氏跳小蜂对扶桑绵粉蚧的寄生效能[J]. 高原,黄建,王竹红,温玉琪,钟顺. 武夷科学. 2014(00)
[3]班氏跳小蜂触角及其上感器的扫描电镜观察[J]. 龙秀珍,高燕,曾宪儒,韦德卫,曾涛,于永浩. 环境昆虫学报. 2013(03)
[4]班氏跳小蜂对扶桑绵粉蚧的寄生功能反应[J]. 黄俊,吕要斌,张娟,黄芳,贝亚维. 昆虫学报. 2012(12)
[5]班氏跳小蜂个体发育研究[J]. 何佳,许再福. 环境昆虫学报. 2012(04)
[6]扶桑绵粉蚧寄生性天敌班氏跳小蜂生物学研究[J]. 黄玲,刘慧,肖铁光,周社文. 应用昆虫学报. 2011(06)
[7]昆虫对气味信息素的感受机制[J]. 刘召,花保祯. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2010(11)
[8]吡蚜酮与牛血清白蛋白的相互作用[J]. 徐巍,吴霞,周海平,刘潇彧,杨景和,范金勇,张梅凤. 高等学校化学学报. 2009(11)
[9]野桑蚕性信息素结合蛋白基因pbp1、气味受体基因or1和or3的克隆及其与家蚕同源基因的进化分析[J]. 张升祥,徐世清,孔令斐,司马杨虎,崔为正. 昆虫学报. 2009(08)
[10]广州扶桑上发现扶桑绵粉蚧[J]. 马骏,胡学难,刘海军,梁帆,赵菊鹏,冯黎霞,陈乃中. 植物检疫. 2009(02)
硕士论文
[1]班氏跳小蜂寄主定位的嗅觉机制[D]. 聂晓培.华中农业大学 2017
[2]松褐天牛肿腿蜂的寄主定位机制[D]. 周长祥.华中农业大学 2016
[3]松褐天牛气味结合蛋白基因的克隆与功能分析[D]. 王娟.华中农业大学 2015
[4]扶桑绵粉蚧寄生性天敌的优势种—班氏跳小蜂寄生特性的研究[D]. 杜亮.浙江农林大学 2014
[5]扶桑绵粉蚧对棉花挥发物影响的研究及其生殖方式的研究[D]. 赵奕曼.浙江农林大学 2014
本文编号：2991916
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