棒曲霉转化子库的构建和产孢相关flbA基因的克隆及功能分析
发布时间：2021-01-31 05:51
棒曲霉（Aspergillus clavatus）是一种常见的土壤真菌,广泛分布于气候较暖的土壤中,它也广泛地分布在一些食物中,为小型丝状真菌,属于曲霉属的真菌。棒曲霉在室内的环境中其实并不常见,然而,它经常与酿酒业联系在一起。能够在查氏培养基、PDA等上培养。棒曲霉代谢可以产生多种生物活性物质。有丰富的胞内胞外水解酶活性。其次生代谢产物能够对真菌细菌产生一定作用的抑制,如展青霉素等。展青霉素又叫棒曲霉素,具有广谱的抗生素特点。现阶段,对于棒曲霉的研究大多是其代谢方面相关。而对于产孢相关基因方面的研究还很少。本课题把本实验保藏的棒曲霉Ac-32作为研究材料,主要的研究内容及结果如下所示。第一,克隆及分析flbA（分生孢子形成相关基因）。依照NCBI中提供的flbA基因序列,采用Primer 5.0软件设计引物,然后,进行PCR扩增,将PCR所得的产物进行凝胶电泳并对目的条带进行割胶回收。DNA片段进行测序,对编码蛋白的三级结构以及结构信息进行分析。基因长度2208 bp,核苷酸序列与构巢曲霉的相似性为69.9%,黑曲霉为68.1%,比对棒曲霉、黑曲霉、构巢曲霉序列发现同源序列低。flb...
【文章来源】：浙江师范大学浙江省
【文章页数】：99 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
代表性曲霉菌株的菌落形态（实验室提供）
第一章文献综述21.2棒曲霉（A.clavatus）简介和研究概况棒曲霉(Aspergillusclavatus)属于曲霉属的真菌，为小型丝状真菌，是一种常见的土壤真菌，广泛分布于气候较暖的土壤中，它也广泛地分布在一些食物中，尤其是谷物。棒曲霉在室内的环境中其实并不常见，然而，它经常与酿酒业联系在一起。能够在查氏培养基，PDA等培养基上培养，菌落在早期为白色，在后期密被暗蓝绿色的分生孢子，菌落的质地丝绒状，有环形及辐射形沟纹，没有什么特别的气味，有时会有渗出液，菌落的反面淡黄色或是无色。分生孢子近椭圆形，表面光滑，在顶囊上紧密排列。分生孢子头呈棒形，近环状排列，在早期也为白色，后期为暗蓝绿色。分生孢子梗茎长短不一，比菌丝体宽，由基内菌丝生成，分生孢子梗在营养菌丝上直立生长，无隔且孢子梗呈棒状。顶囊由分生孢子梗顶端逐渐膨大成为棍棒形[1]。至今为止还没有发现其有有性阶段。（1）形态特征：棒曲霉是曲霉属的一种。PDA平板上培养5d后，菌落呈灰蓝色，边缘白色，质地粉状（图3A）。显微镜下观察，典型特征是分生孢子梗顶端（顶囊）膨大成为棍棒形（图3C）。图1.2曲霉的菌落（A,实验室提供）、分生孢子头、足细胞、分生孢子梗和分生孢子（B,C）Figure1.2ColoniesofAspergillus(A,providedbythelaboratory),conidiahead,podocytes,conidiophore,andconidia(B,C)ABC
第一章文献综述31.3棒曲霉相关代谢产物棒曲霉有比较好的工业应用前景，代谢可以产生多种生物活性物质。棒曲霉有丰富的胞内胞外水解酶活性，比如能够产生纤维素酶、几丁质酶、蛋白酶、糖化酶、α-淀粉酶、DNaes、RNaes等多种酶。其次生代谢产物能够对真菌细菌产生一定作用的抑制，如展青霉素等。展青霉素又叫棒曲霉素，具有广谱的抗生素特点。棒曲霉毒性代谢产物细胞松弛素E[2]，具有很强的抗血管生成和细胞毒活性。2丝状真菌模式曲霉——构巢曲霉（Aspergillusnidulans）的分生孢子形成调控模型无性孢子形成是多种真菌的一种常见繁殖模式，包括许多医学、工业和农业上的重要物种。高等真菌的无性孢子被称为分生孢子，虽然分生孢子的形态和功能多种多样，但所有的分生孢子都代表非能动的无性繁殖体，这些无性繁殖体不由细胞质逐渐分裂形成，而是由产孢细胞的顶端或侧边。产生分生孢子过程不是单一的，与多因素相关。包括基因表达的时空调控、细胞间通讯等。控制这些过图1.3棒曲霉的菌落和显微特征（实验室提供）(A)菌落形态；(B)分生孢子头自然生长形态；(C)棍棒形的顶囊；(D)分生孢子Figure1.3coloniesandmicroscopiccharacteristicsofAspergillusclavatus(providedbylaboratory)(A)colonymorphology;(B)thenaturalgrowthformofconidiumhead;(C)club-shapedapicalsac;(D)conidia
【参考文献】：
期刊论文
[1]绿衣观音土曲中棒曲霉的研究[J]. 冯春,汪光明,梁运祥,田焕章,王丽新. 酿酒科技. 2004(05)
本文编号：3010317
【文章来源】：浙江师范大学浙江省
【文章页数】：99 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
代表性曲霉菌株的菌落形态（实验室提供）
第一章文献综述21.2棒曲霉（A.clavatus）简介和研究概况棒曲霉(Aspergillusclavatus)属于曲霉属的真菌，为小型丝状真菌，是一种常见的土壤真菌，广泛分布于气候较暖的土壤中，它也广泛地分布在一些食物中，尤其是谷物。棒曲霉在室内的环境中其实并不常见，然而，它经常与酿酒业联系在一起。能够在查氏培养基，PDA等培养基上培养，菌落在早期为白色，在后期密被暗蓝绿色的分生孢子，菌落的质地丝绒状，有环形及辐射形沟纹，没有什么特别的气味，有时会有渗出液，菌落的反面淡黄色或是无色。分生孢子近椭圆形，表面光滑，在顶囊上紧密排列。分生孢子头呈棒形，近环状排列，在早期也为白色，后期为暗蓝绿色。分生孢子梗茎长短不一，比菌丝体宽，由基内菌丝生成，分生孢子梗在营养菌丝上直立生长，无隔且孢子梗呈棒状。顶囊由分生孢子梗顶端逐渐膨大成为棍棒形[1]。至今为止还没有发现其有有性阶段。（1）形态特征：棒曲霉是曲霉属的一种。PDA平板上培养5d后，菌落呈灰蓝色，边缘白色，质地粉状（图3A）。显微镜下观察，典型特征是分生孢子梗顶端（顶囊）膨大成为棍棒形（图3C）。图1.2曲霉的菌落（A,实验室提供）、分生孢子头、足细胞、分生孢子梗和分生孢子（B,C）Figure1.2ColoniesofAspergillus(A,providedbythelaboratory),conidiahead,podocytes,conidiophore,andconidia(B,C)ABC
第一章文献综述31.3棒曲霉相关代谢产物棒曲霉有比较好的工业应用前景，代谢可以产生多种生物活性物质。棒曲霉有丰富的胞内胞外水解酶活性，比如能够产生纤维素酶、几丁质酶、蛋白酶、糖化酶、α-淀粉酶、DNaes、RNaes等多种酶。其次生代谢产物能够对真菌细菌产生一定作用的抑制，如展青霉素等。展青霉素又叫棒曲霉素，具有广谱的抗生素特点。棒曲霉毒性代谢产物细胞松弛素E[2]，具有很强的抗血管生成和细胞毒活性。2丝状真菌模式曲霉——构巢曲霉（Aspergillusnidulans）的分生孢子形成调控模型无性孢子形成是多种真菌的一种常见繁殖模式，包括许多医学、工业和农业上的重要物种。高等真菌的无性孢子被称为分生孢子，虽然分生孢子的形态和功能多种多样，但所有的分生孢子都代表非能动的无性繁殖体，这些无性繁殖体不由细胞质逐渐分裂形成，而是由产孢细胞的顶端或侧边。产生分生孢子过程不是单一的，与多因素相关。包括基因表达的时空调控、细胞间通讯等。控制这些过图1.3棒曲霉的菌落和显微特征（实验室提供）(A)菌落形态；(B)分生孢子头自然生长形态；(C)棍棒形的顶囊；(D)分生孢子Figure1.3coloniesandmicroscopiccharacteristicsofAspergillusclavatus(providedbylaboratory)(A)colonymorphology;(B)thenaturalgrowthformofconidiumhead;(C)club-shapedapicalsac;(D)conidia
【参考文献】：
期刊论文
[1]绿衣观音土曲中棒曲霉的研究[J]. 冯春,汪光明,梁运祥,田焕章,王丽新. 酿酒科技. 2004(05)
本文编号：3010317
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