产碱性磷酸酶乳杆菌的筛
发布时间：2021-02-02 00:24
我国是一个农业大国,农作物产量的提高以及农作物病虫害防治均离不开农药,但农药的不合理施用在一定程度上引起了许多环境及健康问题。近年来研究发现碱性磷酸酶在有机磷农药降解方面发挥着重要作用。碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,EC 3.1.3.1,简称ALP）是一类非特异性磷酸单酯酶,在碱性条件下具有最佳活性,广泛存在于生命体中,参与体内多种生化反应和过程。本试验从78株乳酸菌中筛选出一株高产ALP的乳杆菌,在确定其种属后,优化了目的菌株中ALP的提取条件并纯化ALP,探究其酶学特性及其降解有机磷农药的作用。主要实验结果如下:1.利用传统培养方法从78株乳酸菌中,筛选出一株高产ALP的乳杆菌,将其命名为菌株Z23,酶活力为2.35±0.12U/mL。经形态学和分子生物学鉴定,菌株Z23为鼠李糖乳杆菌,16Sr RNA基因序列长度为1473 bp,基因登录号为MN582955。2.通过单因素试验和正交试验,优化了 ALP的提取条件,最佳提取条件为:细胞破碎时间15 min,破碎功率450W,料液比（g/mL）1:6,提取液pH值10.0,该条件下酶活力为4.95±0.26 ...
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３样品采集地点??Ｆｉｇ．３?Ｓａｍｐｌｅ?ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ?ｌｏｃａｔｉｏｎ??
?内蒙古农业大学硕士学位论文?２３??３厂??２?５?□胞内酶活?ｆ??ｅ?０胞外酶活?＠??２?■?ａ?ｄ?：??■■?■秘?１?－?？??一?Ｃ?ｒ＾ｉ??，１．５?－?ｍ??ｐ?：?ｂ??Ｓ?１?■??鍇?：．：??０．５?－?Ｄ?ｔ，?〇Ｅ?ｃ?ｅ??．．＿?．ｎｉｌ?．?＿?Ａ?ｐ－，?Ｆ＂??ｑ?＿?，?！；．？．｜：?，?？?．?ｒｎ?，?ＩＪ?．?＿ｉ??Ｂ４?Ｈ２?Ｑ７?Ｒ５?Ｔ２２?Ｚ２３??菌株编号??图４产酶菌株的复筛??Ｆｉｇ．４?Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ?ｏｆ?ｅｎｚｙｍｅ?ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ?ｓｔｒａｉｎｓ??注：不同字母间表示差异显著（Ｐ＜〇．〇５）。??由图４可知，复筛得到的６株乳酸菌在胞内和胞外均可检测出酶活，且胞内酶活??均大于胞外酶活，其中菌株Ｚ２３的胞内酶活最高，为２．３５±０．１２Ｕ／ｍＬ。王政等［９Ｑ］对接??种５种乳酸菌的脱脂乳中磷酸酶活性大小测定表明，活性最高的为鼠李糖乳杆菌，酶??活大小为〇．〇９７Ｕ／ｍＬ，本实验结果大于此文献中鼠李糖乳杆菌中磷酸酶的酶活。因此??选取菌株Ｚ２３为本次实验的供试菌株，并对其进行菌种鉴定，用于后续各项研宄。??３．１．３对硝基苯酚标准曲线的绘制??根据无色对硝基苯酚与碱性磷酸酶反应可生成黄色对硝基苯酚，取浓度分别为??１．２５、２．５、５、１０、２０、４０，ｏｌ／Ｌ的对硝基苯酚溶液，以对硝基苯酚的浓度为横坐??标，４０５ｎｍ波长下的吸光值为纵坐标绘制标准曲线，结果见图５。??
２４?产碱性磷酸酶乳杆菌的筛癣酶学性质及降解有机磷作用研究???１．２?ｒ??ｙ?＝?０．０２４２ｘ－０．００４１??１?￣?Ｒ２?＝?０．９９８５?．??Ｉ?０?６?－??°?０．４??°?２??０??１?１?１?＇??０?１０?２０?３０?４０??对硝基苯酌浓度（ｇｍｏｌ／Ｌ）??图５对硝基苯酚标准曲线??Ｆｉｇ．５?ｐ?－?ＮＰＰ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅ??由图５可知，对硝基苯酚浓度在０－４０?ｐｍｏｌ／Ｌ之间标准曲线的回归方程为ｙ?＝??０．０２４２Ｘ－?０．００４１，０．９９８５，这表明对硝基苯酚浓度在该浓度范围内的线性关系较??好，可根据标准曲线计算出ＡＬＰ的酶活性大校??３．１．４牛血清蛋白标准曲线的绘制??配制不同浓度的牛血清蛋白溶液，采用考马斯亮蓝法绘制蛋白质标准曲线，以浓??度为横坐标，５９５ｎｍ波长下的吸光值为纵坐标绘制标准曲线。结果见图６。??
本文编号：3013701
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【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
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图３样品采集地点??Ｆｉｇ．３?Ｓａｍｐｌｅ?ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ?ｌｏｃａｔｉｏｎ??
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２４?产碱性磷酸酶乳杆菌的筛癣酶学性质及降解有机磷作用研究???１．２?ｒ??ｙ?＝?０．０２４２ｘ－０．００４１??１?￣?Ｒ２?＝?０．９９８５?．??Ｉ?０?６?－??°?０．４??°?２??０??１?１?１?＇??０?１０?２０?３０?４０??对硝基苯酌浓度（ｇｍｏｌ／Ｌ）??图５对硝基苯酚标准曲线??Ｆｉｇ．５?ｐ?－?ＮＰＰ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅ??由图５可知，对硝基苯酚浓度在０－４０?ｐｍｏｌ／Ｌ之间标准曲线的回归方程为ｙ?＝??０．０２４２Ｘ－?０．００４１，０．９９８５，这表明对硝基苯酚浓度在该浓度范围内的线性关系较??好，可根据标准曲线计算出ＡＬＰ的酶活性大校??３．１．４牛血清蛋白标准曲线的绘制??配制不同浓度的牛血清蛋白溶液，采用考马斯亮蓝法绘制蛋白质标准曲线，以浓??度为横坐标，５９５ｎｍ波长下的吸光值为纵坐标绘制标准曲线。结果见图６。??
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