棘孢木霉T4株task1基因过表达及功能的初步分析

发布时间：2021-04-27 20:54

　　本论文所研究的task1基因为MAPKs家族的成员，在真核细胞信号传递网中功能显著，在前期的研究中发现task1对生物防治真菌的生防功能具有一定的调控作用，因此对task1深入研究有利于生物防治真菌在分子方面的内在调节机制的剖析意义重大。棘孢木霉本身的生物防治能力突出，并含有task1，因此研究野生型棘孢木霉的task1基因表达状况，对于棘孢木霉调节生防能力意义重大。获得的纯化的目的基因task1，成功的整合入表达载体中，构建重组的表达载体，通过电转化和真菌共培养等方法，在筛选平板上获得诸多的阳性的转化子。对于得到的转化子进行分子生物学分析，在分子鉴定后，选取其中最优良的菌株，进行形态学、酶学及生防特性的测定。在对于形态学的比较中发现，当目的基因task1在原始菌株中表达上调后，转化子的菌丝状态、生长和产孢状况优越于原始的野生菌株，并且菌丝缠绕密集，产孢数优于原始菌株，为其2.25倍。在对两种菌的酶活性测定中，得出转化子的C1、滤纸酶活、CX、β-葡萄糖苷酶等酶活性影响较大，并均有很大的提升。因此，进行了转化子的纤维素酶的实时定量PCR，发现转化子的纤维素的基因的表达量也有很大的提高，... 

【文章来源】：哈尔滨工业大学黑龙江省 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
    1.1 课题背景及研究的目的和意义
    1.2 木霉菌的生防与分子机制研究进展
        1.2.1 木霉菌的生防机制
        1.2.2 木霉菌的生防分子机制
    1.3 丝裂原蛋白激酶与细胞信号转导
        1.3.1 MAPK 蛋白激酶在真菌中的作用
        1.3.2 丝裂原蛋白激酶信号传递途径
    1.4 国外对于棘孢木霉的研究
    1.5 国内的研究现状
    1.6 国内外文献综述的简析
    1.7 丝状真菌转化方法研究进展
        1.7.1 PEG 法
        1.7.2 醋酸锂法
        1.7.3 基因枪法
        1.7.4 REMI 法
        1.7.5 ATMT 法
    1.8 实际应用潜在的问题
    1.9 课题的技术路线图与主要研究内容
        1.9.1 技术路线图
        1.9.2 主要研究内容
第2章 实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 菌种及菌种样品的来源
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 培养基
        2.1.4 本课题所用的引物
        2.1.5 主要仪器设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 棘孢木霉 T4 菌株 task1 基因的获得
        2.2.2 构建重组质粒 pCAMBIA1301-task1
        2.2.3 重组质粒转化野生型棘孢木霉
        2.2.4 转化子与病原菌的对峙实验
        2.2.5 转化子生长速率和产孢能力测定
        2.2.6 野生型和转化子菌丝形态观察
        2.2.7 转化子酶活的测定
第3章 Task1 重组体构建及转化子的鉴定
    3.1 引言
    3.2 棘孢木霉 T4 株 task1 基因的 PCR 及纯化
    3.3 重组表达质粒的构建
    3.4 重组质粒电转化 AGL-1
    3.5 野生型棘孢木霉 T4 对潮霉素敏感性实验
    3.6 棘孢木霉 T4 转化子的 PCR 鉴定
    3.7 转化子稳定性的鉴定
    3.8 转化子实时定量 PCR 鉴定
    3.9 本章小结
第4章 转化子生防特性研究
    4.1 引言
    4.2 转化子形态学检测
    4.3 野生棘孢木霉与 Z4 菌丝形态观察
    4.4 病原菌对峙实验
        4.4.1 棘孢木霉对峙立枯丝核菌
        4.4.2 棘孢木霉对峙镰刀菌菌
    4.5 酶活测定
        4.5.1 葡萄糖标准曲线的绘制
        4.5.2 Cx酶活性的测定
        4.5.3 C1酶活性的测定
        4.5.4 滤纸酶活性的测定
        4.5.5 β-葡萄糖苷酶活性测定
    4.6 本章小结
结论
参考文献
致谢



本文编号：3164142