灰霉菌中两个假定分泌蛋白的功能研究
发布时间：2021-05-24 18:38
灰霉菌是一种具有广泛非特异性寄主的死体营养型真菌,可侵染1000多种植物,对农作物生产和采后贮藏造成重大损失,被认为是十大病原真菌之一。灰霉菌和核盘菌在系统发育上具有高度的同源性,是研究腐生真菌的模式物种。灰霉菌可以通过分泌大量的胞外蛋白,在侵染植物的过程中发挥重要作用。但是到目前为止,仍有许多分泌蛋白的功能和作用机制是未知的。因此对灰霉菌分泌蛋白开展相关研究,对进一步揭示灰霉菌致病机制和与寄主植物的互作关系具有重要意义。本课题组在之前的研究中发现核盘菌中编码1个假定分泌蛋白的SS1G08163基因在抑制植物防御反应和促进核盘菌侵染植物方面具有一定的作用。因此我们猜想灰霉菌中与核盘菌SS1G08163同源的基因是否也参与到植物-灰霉菌的互作过程。通过氨基酸序列比对,我们鉴定出了2个同源基因:BCIN04g00360和BCIN09g07100,它们与SS1G08163分别具有50.00%和60.87%的同源性。利用同源重组技术,我们分别对BCIN04g003...
【文章来源】：福建农林大学福建省
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
1.1 灰霉菌及其危害
1.1.1 灰霉菌生物学特性
1.1.2 灰霉病症状和流行规律
1.2 灰霉菌分泌蛋白研究进展
1.2.1 细胞壁降解酶
1.2.2 参与宿主蛋白质降解的蛋白酶
1.2.3 氧爆发相关蛋白
1.2.4 可诱导植物过敏性反应的蛋白
1.2.5 与毒素产生和分泌相关的蛋白
1.3 植物抗灰霉病机制
1.3.1 PAMP/DAMP信号识别和传导
1.3.2 植物激素调控
1.3.3 其它相关防御反应
1.4 本研究的内容和目的
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 菌株和载体
2.1.3 药品和试剂
2.1.4 化学溶液
2.1.5 培养基
2.2 实验方法
2.2.1 供试植物的种植和管理
2.2.2 粗提真菌基因组DNA
2.2.3 PCR反应体系和条件
2.2.4 琼脂糖凝胶DNA回收
2.2.5 制备灰霉菌原生质体
2.2.6 灰霉菌原生质体转化
2.2.7 菌落生长速率测定
2.2.8 灰霉菌致病性分析
2.2.9 RNA提取
2.2.10 RNA反转录
2.2.11 载体构建
2.2.12 制备大肠杆菌感受态细胞
2.2.13 大肠杆菌转化
2.2.14 细菌质粒提取
2.2.15 制备农杆菌GV3101 感受态细胞
2.2.16 农杆菌转化
2.2.17 烟草瞬时表达
3 结果与分析
3.1 灰霉菌中与核盘菌SS1G_08163 同源基因的鉴定
3.2 目的基因敲除突变体的获得
3.3 ΔBCIN_04g00360和ΔBCIN_09g07100 菌落生长测定
3.4 ΔBCIN_04g00360和ΔBCIN_09g07100 致病性分析
3.5 烟草瞬时表达载体的构建和农杆菌转化
3.6 BCIN_04g00360和BCIN_09g07100 在烟草叶片中的亚细胞定位
3.7 BCIN_04g00360和BCIN_09g07100 诱导植物细胞死亡调控分析
3.8 BCIN_04g00360和BCIN_09g07100 干扰由INF1 介导的植物防卫反应分析
4 结论与讨论
参考文献
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]草莓灰霉病研究进展[J]. 张国珍,钟珊. 植物保护. 2018(02)
[2]番茄灰霉病的生物学特性与防治研究进展[J]. 刘福平,黄台明,宋淑芳,邓立宝. 安徽农业科学. 2014(31)
[3]番茄灰霉病防治研究进展[J]. 赵杨,苗则彦,李颖,白元俊. 中国植保导刊. 2014(07)
[4]防治灰霉病药剂的开发进展[J]. 韩君,范怀峰,王海娜,刘峰. 农药研究与应用. 2011(03)
[5]番茄灰霉病病原菌生物学特性的研究[J]. 徐明,李海涛,张子君,邹庆道. 贵州农业科学. 2009(03)
[6]保护地主要园艺作物灰霉病菌生物学特性比较研究[J]. 孟祥东,傅俊范,周如军,严雪瑞. 沈阳农业大学学报. 2007(03)
[7]葡萄灰霉病研究进展[J]. 陈宇飞,文景芝,李立军. 东北农业大学学报. 2006(05)
[8]低温对葡萄孢菌（Botrytis cinerea）菌丝生长和孢子萌发以及对贮藏菊苣侵染力的影响（英文）[J]. 田世平. 植物病理学报. 2001(01)
[9]番茄灰霉病在果实上的侵染部位及防治新技术[J]. 李保聚,朱国仁,赵奎华,乔勇. 植物病理学报. 1999(01)
本文编号：3204665
【文章来源】：福建农林大学福建省
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
1.1 灰霉菌及其危害
1.1.1 灰霉菌生物学特性
1.1.2 灰霉病症状和流行规律
1.2 灰霉菌分泌蛋白研究进展
1.2.1 细胞壁降解酶
1.2.2 参与宿主蛋白质降解的蛋白酶
1.2.3 氧爆发相关蛋白
1.2.4 可诱导植物过敏性反应的蛋白
1.2.5 与毒素产生和分泌相关的蛋白
1.3 植物抗灰霉病机制
1.3.1 PAMP/DAMP信号识别和传导
1.3.2 植物激素调控
1.3.3 其它相关防御反应
1.4 本研究的内容和目的
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 菌株和载体
2.1.3 药品和试剂
2.1.4 化学溶液
2.1.5 培养基
2.2 实验方法
2.2.1 供试植物的种植和管理
2.2.2 粗提真菌基因组DNA
2.2.3 PCR反应体系和条件
2.2.4 琼脂糖凝胶DNA回收
2.2.5 制备灰霉菌原生质体
2.2.6 灰霉菌原生质体转化
2.2.7 菌落生长速率测定
2.2.8 灰霉菌致病性分析
2.2.9 RNA提取
2.2.10 RNA反转录
2.2.11 载体构建
2.2.12 制备大肠杆菌感受态细胞
2.2.13 大肠杆菌转化
2.2.14 细菌质粒提取
2.2.15 制备农杆菌GV3101 感受态细胞
2.2.16 农杆菌转化
2.2.17 烟草瞬时表达
3 结果与分析
3.1 灰霉菌中与核盘菌SS1G_08163 同源基因的鉴定
3.2 目的基因敲除突变体的获得
3.3 ΔBCIN_04g00360和ΔBCIN_09g07100 菌落生长测定
3.4 ΔBCIN_04g00360和ΔBCIN_09g07100 致病性分析
3.5 烟草瞬时表达载体的构建和农杆菌转化
3.6 BCIN_04g00360和BCIN_09g07100 在烟草叶片中的亚细胞定位
3.7 BCIN_04g00360和BCIN_09g07100 诱导植物细胞死亡调控分析
3.8 BCIN_04g00360和BCIN_09g07100 干扰由INF1 介导的植物防卫反应分析
4 结论与讨论
参考文献
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]草莓灰霉病研究进展[J]. 张国珍,钟珊. 植物保护. 2018(02)
[2]番茄灰霉病的生物学特性与防治研究进展[J]. 刘福平,黄台明,宋淑芳,邓立宝. 安徽农业科学. 2014(31)
[3]番茄灰霉病防治研究进展[J]. 赵杨,苗则彦,李颖,白元俊. 中国植保导刊. 2014(07)
[4]防治灰霉病药剂的开发进展[J]. 韩君,范怀峰,王海娜,刘峰. 农药研究与应用. 2011(03)
[5]番茄灰霉病病原菌生物学特性的研究[J]. 徐明,李海涛,张子君,邹庆道. 贵州农业科学. 2009(03)
[6]保护地主要园艺作物灰霉病菌生物学特性比较研究[J]. 孟祥东,傅俊范,周如军,严雪瑞. 沈阳农业大学学报. 2007(03)
[7]葡萄灰霉病研究进展[J]. 陈宇飞,文景芝,李立军. 东北农业大学学报. 2006(05)
[8]低温对葡萄孢菌（Botrytis cinerea）菌丝生长和孢子萌发以及对贮藏菊苣侵染力的影响（英文）[J]. 田世平. 植物病理学报. 2001(01)
[9]番茄灰霉病在果实上的侵染部位及防治新技术[J]. 李保聚,朱国仁,赵奎华,乔勇. 植物病理学报. 1999(01)
本文编号：3204665
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