禾谷镰刀菌病毒FgHV2/JS16和FgMTV1/SX64的功能鉴定

发布时间：2021-06-09 05:34

　　真菌病毒（Mycovirus或Fungal virus）是侵染真菌的病毒,近年来,越来越受到重视。小麦赤霉病是我国一种重要的植物病害,其优势致病菌是禾谷镰刀菌（Fusarium graminearum）。Fusarium graminearum hypovirus 2（FgHV2/JS16）和Fusarium graminearum mycotymovirus 1（FgMTV1/SX64）,是本实验室在前期工作中分别从江苏省和陕西省禾谷镰刀菌菌株中鉴定的新病毒,全长序列分别为12800和7863个核苷酸,FgHV2/JS16和FgMTV1/SX64分别是低毒病毒科（Hypoviridae）和芜菁黄花叶病毒科（Tymoviridae）的新病毒。在此基础上,本文对FgHV2/JS16的寄主菌株JS16中大小约为5 kb的dsRNA片段测序鉴定,并系统分析FgHV2/JS16的生物学功能及对寄主转录组的影响;对FgMTV1/SX64的分类地位进行精确分析,且系统分析FgMTV1/SX64的生物学功能。该研究为真菌病毒的分类提供重要参考,也为真菌病毒在生物防治中的应用奠定理论基础。1、对禾谷镰... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一部分 引言
    1.1 真菌病毒的研究进展
        1.1.1 真菌病毒的起源
        1.1.2 真菌病毒的分类
        1.1.3 真菌病毒的传播
        1.1.4 真菌病毒的低毒力
        1.1.5 真菌病毒与寄主真菌的互作
        1.1.6 真菌病毒在生防上的应用及存在的挑战
    1.2 真菌病毒中低毒病毒科病毒的研究
        1.2.1 低毒病毒科病毒种类和特点
        1.2.2 低毒病毒科病毒与寄主的互作
    1.3 真菌病毒中芜菁黄花叶病毒科病毒的研究
        1.3.1 芜菁黄花叶病毒属（Tymovirus）
        1.3.2 玉米雷亚朵非纳病毒属（Marafivirus）
        1.3.3 葡萄斑点病毒属（Maculavirus）
    1.4 禾谷镰刀菌中的真菌病毒
        1.4.1 小麦赤霉病
        1.4.2 禾谷镰刀菌的研究进展
        1.4.3 禾谷镰刀菌中的真菌病毒
    1.5 研究目的及意义
第二部分 禾谷镰刀菌病毒FgHV2/JS16的功能鉴定
    第一章 禾谷镰刀菌病毒FgHV2/JS16的缺陷型RNA克隆及序列分析
        2.1 实验材料
            2.1.1 供试菌株
            2.1.2 实验试剂
            2.1.3 实验仪器
            2.1.4 试剂配制
        2.2 实验方法
            2.2.1 菌株培养
            2.2.2 缺陷型RNA的dsRNA提取
            2.2.3 缺陷型RNA的胶回收
            2.2.4 缺陷型RNA的c DNA克隆
            2.2.5 缺陷型RNA序列拼接
            2.2.6 缺陷型RNA的Northern blot验证
            2.2.7 序列分析所用的软件及方法
        2.3 结果与分析
            2.3.1 菌株JS16 dsRNA的提取
            2.3.2 缺陷型RNA的cDNA克隆
            2.3.3 缺陷型RNA全长序列拼接
            2.3.4 FgHV2/JS16基因组RNA与其缺陷型RNA的基因组结构比对
            2.3.5 缺陷型RNA的Northern blot验证
        2.4 小结与讨论
    第二章 禾谷镰刀菌病毒FgHV2/JS16的生物学功能鉴定
        3.1 实验材料
            3.1.1 供试菌株
            3.1.2 实验试剂
            3.1.3 实验仪器
            3.1.4 试剂配制
        3.2 实验方法
            3.2.1 菌落形态的观察和生长速度的测定
            3.2.2 分生孢子产量的测定
            3.2.3 生物产量的测定
            3.2.4 毒素测定
            3.2.5 致病力测定
            3.2.6 RNAi相关基因的表达测定
        3.3 结果与分析
            3.3.1 菌落形态的观察和生长速度的测定
            3.3.2 分生孢子产量的测定
            3.3.3 生物产量的测定
            3.3.4 毒素测定
            3.3.5 致病力测定
            3.3.6 RNAi相关基因的表达测定
        3.4 小结与讨论
    第三章 感染FgHV2/JS16的禾谷镰刀菌的转录组分析
        4.1 实验材料
            4.1.1 供试菌株
            4.1.2 实验试剂
            4.1.3 实验仪器
            4.1.4 试剂配制
        4.2 实验方法
            4.2.1 菌株活化与培养
            4.2.2 RNA提取
            4.2.3 cDNA文库构建和深度测序
            4.2.4 差异表达基因的鉴定
            4.2.5 基因本体富集分析
        4.3 结果与分析
            4.3.1 差异表达基因的鉴定
            4.3.2 代表性转录组的鉴定
            4.3.3 差异表达基因的GO分析
            4.3.4 与代谢途径有关的基因表达
            4.3.5 与膜转运系统相关的基因表达
            4.3.6 FgHV2/JS16侵染对转录因子的影响
            4.3.7 与RNAi相关的基因表达上调
            4.3.8 与真菌毒素和色素合成相关的基因表达上调
            4.3.9 与有性生殖相关的基因表达
        4.4 小结与讨论
第三部分 禾谷镰刀菌病毒FgMTV1/SX64的功能鉴定
    第一章 禾谷镰刀菌病毒FgMTV1/SX64的分类地位
        5.1 实验材料
            5.1.1 供试菌株
            5.1.2 实验试剂
            5.1.3 实验仪器
            5.1.4 试剂配制
        5.2 实验方法
            5.2.1 菌株培养
            5.2.2 dsRNA提取
            5.2.3 序列分析所用的软件及方法
        5.3 结果与分析
            5.3.1 菌株SX64 dsRNA的提取
            5.3.2 FgMTV1/SX64的基因组结构
            5.3.3 FgMTV1/SX64的全序列分析
            5.3.4 FgMTV1/SX64编码蛋白序列比对
            5.3.5 FgMTV1/SX64分类地位的确定
        5.4 小结与讨论
    第二章 禾谷镰刀菌病毒FgMTV1/SX64的生物学功能鉴定
        6.1 实验材料
            6.1.1 供试菌株
            6.1.2 实验试剂及仪器
        6.2 实验方法
            6.2.1 菌落形态的观察和生长速度的测定
            6.2.2 分生孢子产量的测定
            6.2.3 生物产量的测定
            6.2.4 毒素测定
            6.2.5 致病力测定
        6.3 结果与分析
            6.3.1 菌落形态的观察和生长速度的测定
            6.3.2 分生孢子产量的测定
            6.3.3 生物产量的测定
            6.3.4 毒素测定
            6.3.5 致病力测定
        6.4 小结与讨论
第四部分 全文总结
参考文献
附录
致谢
作者简历



本文编号：3220045