球孢白僵菌Bb b m01菌株PacC基因突变体的构建及其毒力和孢子萌发率的测定

发布时间：2021-06-20 15:18

　　通过敲除球孢白僵菌（Beauveria bassiana）菌株bm01的PacC基因,研究了PacC基因敲除对球孢白僵菌毒力和分生孢子萌发速率的影响。利用农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）介导的转化方法转化Bb_bm01,通过同源重组敲除Bb_bm01的PacC基因,筛选ΔPacC基因敲除菌株,获得了遗传稳定的ΔPacC基因敲除菌株。通过毒力测定,对比了野生菌株和ΔPacC基因敲除菌株对家蚕和大蜡螟毒力的差异,发现ΔPacC基因敲除菌株对家蚕和大蜡螟毒力都减弱,差异具有统计学意义（p<0.01）,表明在Bb_bm01菌株中的PacC基因与它的致病性相关;另外,比较ΔPacC基因敲除菌株与野生型菌株Bb_bm01在SDB液体培养基中的孢子萌发率,发现ΔPacC基因敲除菌株孢子萌发明显减慢,表明PacC基因参与调控孢子萌发。 

【文章来源】：基因组学与应用生物学. 2016,35(08)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

敲除菌株在转录水平的筛选与鉴定Figure 5 PCR analysis in transcriptional level

随着丝状真菌基因组序列的测定,以及高效分子生物学手段的发展,如RNA干扰(Fire et al.,1998;韦淑亚等,2013)、基因敲除技术(Limal et al.,2006)及酵母杂交系统(Duyvesteijn et al.,2005)等,为丝状真菌的基因功能鉴定提供更有效的契机。其中,根癌农杆菌介导的基因敲除技术能够有效和特异性地抑制目标基因的表达,且操作易于掌握,是构建真菌基因突变体的首选技术,也广泛应用于丝状真菌的基因功能鉴定(Munch et al.,2011;Nakamura et al.,2012;Nai et al.,2015)。本研究采用根癌农杆菌介导的基因敲除技术构建球孢白僵菌Bb_bm01菌株的Pac C基因敲除突变体,经基因组水平和转录水平验证,成功获得基因敲除菌株ΔPac C。图7 ΔPac C敲除菌株及Bb2347的孢子萌发Figure 7 Conidial germination of mutantΔPac C or Bb2347

图1 Pac C基因上下游序列的PCR扩增产物Figure 1 PCR amplification product of upstream and downstream sequence of the Pac C gene图3 Pac C基因敲除原理示意图Figure 3 Schematic representation of the Pac C wild type(WT)

【参考文献】：
期刊论文
[1]球孢白僵菌生物学特性与其对不同昆虫侵染差异相关性分析[J]. 曹伟平,宋健,甄伟,王金耀,冯书亮,杜立新.  中国生物防治学报. 2013(04)
[2]水稻钙依赖型蛋白激酶OsCPK9基因RNAi表达载体的构建及遗传转化[J]. 韦淑亚,张莹莹,赵旭东,刘小东,罗青晨,卫秋慧,陈鹏,何光源,杨广笑.  基因组学与应用生物学. 2013(05)



本文编号：3239442