叶色草蛉热休克蛋白基因HSP70的克隆及表达分析
发布时间：2021-07-17 17:34
热休克蛋白HSPs是一类应激蛋白,是生物遇到不利的环境（如热胁迫、药物刺激等）自发产生的一种防御机制,能增强细胞对外界刺激的耐受能力和恢复能力,充当分子伴侣。其中热休克蛋白HSP70在这一家族中最为保守（核酸与氨基酸序列均高度保守）。在生物体内监测热休克蛋白HSP70的表达量的变化,可以作为一种生物指标来对环境污染进行评价。如今田间化学农药使用量很多,对害虫防治的同时应该对天敌昆虫也有影响,因此HSP70成为天敌昆虫对田间应激刺激的一种抵抗指标。在天敌昆虫饲养或者大量释放防治害虫方面,可以通过转基因等技术使天敌昆虫热休克蛋白的表达量升高,从而增强天敌昆虫对外界不利环境的防御能力,使其能够抵御强烈的应激条件,从而成功地防治害虫的同时保全天敌昆虫,这也是从基因角度对天敌昆虫的保护。目前国内外虽然已经报道过一些天敌昆虫的热休克蛋白基因序列,但对于豆科植物主要天敌昆虫叶色草蛉的HSP70的基因序列尚未见过报道。本实验通过克隆得到HSP70基因,并通过热休克和常用大豆田农药处理测得HSP70表达量的变化分析HSP70对叶色草蛉应激环境下的保护作用。叶色草蛉（Chrysopa phyllochro...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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【参考文献】：
期刊论文
[1]热休克蛋白免疫作用的研究进展[J]. 罗靖旻,罗建新. 医学综述. 2013(07)
[2]热休克蛋白70及27的研究进展[J]. 曾涛,李国勤,卢立志,陶争荣. 中国家禽. 2012(08)
[3]热休克蛋白70对细胞凋亡调控的研究进展分析[J]. 马广鹏. 中国预防兽医学报. 2011(10)
[4]昆虫滞育关联热休克蛋白的研究进展[J]. 肖海军,魏兆军,薛芳森. 昆虫学报. 2011(09)
[5]叶色草蛉对绣线菊蚜的捕食功能反应和搜寻效应[J]. 全仁哲,陈道富. 科技创新导报. 2011(08)
[6]热休克蛋白70的生物学功能及应用的研究进展[J]. 杨震国. 中国饲料. 2010(23)
[7]外源物质诱导家蚕小分子热激蛋白基因HSP19.9的组织表达活性分析[J]. 王瑞娴,高瑞娜,张婷,赵国栋,李兵,卫正国,沈卫德. 蚕业科学. 2010(05)
[8]二化螟热休克蛋白70基因的克隆及热胁迫下的表达分析[J]. 崔亚东,陆明星,杜予州. 昆虫学报. 2010(08)
[9]热休克蛋白70的结构和功能[J]. 王宇萍,蒋建东. 中国细胞生物学学报. 2010(02)
[10]热休克蛋白70的主要功能和应用前景[J]. 谢玉英. 生物技术通报. 2009(S1)
硕士论文
[1]大豆蚜热休克蛋白70基因的克隆、原核表达与定量分析[D]. 张拓.东北农业大学 2013
[2]豆卜馍夜蛾热休克蛋白Hsp70与Hsc70基因的克隆及原核表达[D]. 庞春杰.东北农业大学 2012
[3]凡纳滨对虾一种HSC70的cDNA克隆，原核表达及其体内表达分析[D]. 吴任.暨南大学 2006
本文编号：3288629
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１?ＨＳＰ７０的结构示意图??－
３．１叶色草蛉Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０的基因保守区片段??以叶色草蛉总ＲＮＡ反转录成ｃＤＮＡ的第一链为模板，用基因特异性引物Ｈｓｐ７０－ｕｐ、ｕｐ２??和Ｈｓｐ７０－ｌｏｗ／Ｈｓｃ７０－ｕｐ、ｕｐ２和Ｈｓｃ７０－ｌｏｗ进行ＰＣＲ扩增，特异性片段如图３－１。经回收纯化、??连接、转化、鉴定（酶切和ＰＣＲ方法）后测序，得到序列长分别为１３９７ｂｐ和１１０８ｂｐ的叶色??草蛉Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０基因保守区。??Ｍ??ｆ?２０００ｂＤ—ＨＨ｜??２０００ｂＤ??ｔｏｏｏｂｏ?ｉ〇〇〇ｂ＾？ｉｒｉｉ〇８ｂＤ??Ｉ??注：Ｍ：?Ｍａｒｋｅｒ，?１：叶色草蛉Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０分别为１３９７ｂｐ和１１０８ｂｐ保守区ＰＣＲ产物??图３－１叶色草蛉Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０基因保守区片段ＰＣＲ产物??Ｆｉｇ．３－１?Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０?ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ?ｒｅｇｉｏｎ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?Ｃｈｒｙｓｏｐａ?ｐｈｙｌｌｏｃｈｒｏｍａ??３．２叶色草蛉Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０基因ｃＤＮＡ序列的３’ＲＡＣＥ??设计叶色草蛉Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０基因的３’端序列的特异引物（见表２－１和２－２）?，?ＰＣＲ反应??３０个循环，特异性片段如图３－２。经验证后送到上海生工公司测序。克隆得到叶色草蛉??Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０基因３’端序列长为５３７ｂｐ和８３１ｂｐ，?Ｂｌａｓｔ结果表明，此两条序列分别为叶色草??蛉热休克蛋白Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０基因ｃＤＮＡ片段３’端序列的一部分。??１６??
抑￣＾￡亦：７５〇ｂＤ￣￣ｆｃｍ＾３ｉｂＤ??注：Ｍ：?Ｍａｒｋｅｒ，１：叶色草蛉?Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０?５３７ｂｐ／８３１ｂｐ３，－ＲＡＣＥＰＣＲ?产物??图３－２叶色草蛉Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０基因３’－ＲＡＣＥ?ＰＣＲ产物??Ｆｉｇ．３－２?Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０?３＇－ＲＡＣＥ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?Ｃｈｒｙｓｏｐａ?ｐｈｙｌｌｏｃｈｒｏｍａ??３．３叶色草蛉Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０基因ｃＤＮＡ序列的５’ＲＡＣＥ??设计叶色草蛉ＨｓＰ７０／ＨｓＣ７０基因的５Ｔ端序列的特异引物（见表２－１、２－２），特异性片段??如图３－３。经验证后送到上海生工公司测序。克隆得到叶色草蛉Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０基因５，端序列??长分别为６０３ｂｐ和４４８ｂｐ。??Ｍ??Ｍ????１??５００ｂｐ－｜ＪＪ＾Ｈ－６０３ｂｐ??■?５００ｂＤ—＾＾＾＾－４４８ｂｐ??２Ｓ０ｂｏ－ｌ??注：Ｍ：?Ｍａｒｋｅｒ，?ｈ?叶色草蛉?Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７〇?６０３ｂｐ／４４８ｂｐ５，－ＲＡＣＥＰＣＲ?产物??图３－３叶色草蛉Ｈｓｐ７〇／Ｈｓｃ７０基因５，－ＲＡＣＥ?ＰＣＲ产物??Ｆｉｇ．３－３?Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０?５＇－ＲＡＣＥ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?Ｃｈｒｙｓｏｐａ?ｐｈｙｌｌｏｃｈｒｏｍａ??３．４?Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０基因ｃＤＮＡ全长序列??以叶色草蛉ＨｓＰ７０／Ｈｓｃ７０ＲＴ－ＰＣＲ三个片段作为底物
【参考文献】：
期刊论文
[1]热休克蛋白免疫作用的研究进展[J]. 罗靖旻,罗建新. 医学综述. 2013(07)
[2]热休克蛋白70及27的研究进展[J]. 曾涛,李国勤,卢立志,陶争荣. 中国家禽. 2012(08)
[3]热休克蛋白70对细胞凋亡调控的研究进展分析[J]. 马广鹏. 中国预防兽医学报. 2011(10)
[4]昆虫滞育关联热休克蛋白的研究进展[J]. 肖海军,魏兆军,薛芳森. 昆虫学报. 2011(09)
[5]叶色草蛉对绣线菊蚜的捕食功能反应和搜寻效应[J]. 全仁哲,陈道富. 科技创新导报. 2011(08)
[6]热休克蛋白70的生物学功能及应用的研究进展[J]. 杨震国. 中国饲料. 2010(23)
[7]外源物质诱导家蚕小分子热激蛋白基因HSP19.9的组织表达活性分析[J]. 王瑞娴,高瑞娜,张婷,赵国栋,李兵,卫正国,沈卫德. 蚕业科学. 2010(05)
[8]二化螟热休克蛋白70基因的克隆及热胁迫下的表达分析[J]. 崔亚东,陆明星,杜予州. 昆虫学报. 2010(08)
[9]热休克蛋白70的结构和功能[J]. 王宇萍,蒋建东. 中国细胞生物学学报. 2010(02)
[10]热休克蛋白70的主要功能和应用前景[J]. 谢玉英. 生物技术通报. 2009(S1)
硕士论文
[1]大豆蚜热休克蛋白70基因的克隆、原核表达与定量分析[D]. 张拓.东北农业大学 2013
[2]豆卜馍夜蛾热休克蛋白Hsp70与Hsc70基因的克隆及原核表达[D]. 庞春杰.东北农业大学 2012
[3]凡纳滨对虾一种HSC70的cDNA克隆，原核表达及其体内表达分析[D]. 吴任.暨南大学 2006
本文编号：3288629
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