HCH（六六六）降解菌的分离、鉴定和相关降解基因的克隆

发布时间：2021-07-29 13:54

　　本研究从长期受六六六污染的土壤中分离到3株能以y-HCH为唯一碳源生长的六六六降解菌,分别命名为BHC-B、BHC-C 和 BHC-D。测定了此三株六六六降解菌的16S rRNA基因序列,提交至GenBank,其登陆号分别为No.KC191573, No. KC191574和No.KC191575。系统发育分析显示,菌株BHC-B, BHC-C 和 BHC-D聚成一枝,表现出很高的相似性;与该菌株16S rRNA基因序列相似性较高的菌株都是研究得较多的六六六降解菌株,分别是Sphingobium japonicum UT26T, Sphingobium francense Sp+T 和 Sphingobium indicum B90AT,相似性都大于99%（99.10%到99.72%）。综合它们的形态和生理生化特征,以及系统进化分析,将菌株BHC-B、BHC-C和BHC-D皆鉴定为鞘脂菌属（Sphingobium sp.）。由于这些菌株相互之间的16S rRNA基因序列相似性大于99%,因此从这个层面上区分它们比较困难。ERIC-PCR是一种常用于分析肠道微生物菌群结构的方法,我们尝试... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
符号与缩略语说明
前言
文献综述
    第一章 有机氯农药的污染及生物修复
        1. 有机氯农药的污染及残留状况
        2 生物修复
            2.1 生物修复的概念
            2.2 生物修复的主要主力军——微生物
            2.3 微生物降解的机制
    第二章 六六六生物降解研究进展
        1. 六六六的理化性质
        2 六六六的微生物降解
            2.1 六六六微生物降解研究情况
            2.2 六六六好氧微生物降解途径研究
    第三章 微生物多样性分析及ERIC-PCR技术应用
        1 ERIC概述
        2 ERIC-PCR的建立
        3 ERIC-PCR在微生物分类鉴定中的应用
实验部分
    第一章 六六六降解菌的分离筛选
        1 材料与方法
            1.1 培养基与试剂
            1.2 六六六降解菌的分离和筛选
            1.3 降解菌株的生理生化指标测定
            1.4 降解菌株16S rRNA基因的扩增与分析
            1.5 降解菌株的系统发育分析
            1.6 HCH降解菌的ERIC-PCR分析
            1.7 六六六气相色谱检测
        2 结果与分析
            2.1 六六六降解菌株的分离筛选
            2.2 降解菌株的形态
            2.3 六六六降解菌株的生理生化特征
            2.4 降解菌株的16S rRNA基因扩增
            2.5 六六六降解菌株的系统进化分析
            2.6 环境条件对降解菌株生长的影响
        3 本章小结
    第二章 六六六降解菌降解特性研究
        1 材料和方法
            1.1 菌株、培养基和试剂
            1.2 六六六降解菌中lin基因分析
            1.3 六六六含量的测定
        2 结果与分析
            2.1 温度对BHC-B,BHC-C和BHC-D降解γ-HCH的影响
            2.2 pH值对BHC-B,BHC-C和BHC-D降解γ-HCH的影响
            2.3 通气量对菌株BHC-B、BHC-C和BHC-D降解γ-HCH的影响
            2.4 接种量对BHC-B,BHC-C和BHC-D降解γ-HCH的影响
            2.5 菌株BHC-B,BHC-C和BHC-D菌株对六六六4种主要异构体(α-、β-γ-和δ-HCH)的降解
            2.6 降解菌株BHC-B、BHC-C和BHC-D的lin基因分析
        3 本章小结
    第三章 菌株Sphingomonas sp.BHC-A降解δ-六六六的代谢途径的研究
        1 材料与方法
            1.1 试剂与培养基
            1.2 菌株与质粒
            1.3 菌株BHC-A中linA基因的敲除
            1.4 BHC-A中linB和敲除菌株BHC-A-△linA粗酶液的制备
            1.5 粗酶反应条件与提取
            1.6 气质联机实验
            1.7 基因序列的测定与分析
        2 结果与分析
            2.1 菌株Sphingomonas sp.BHC-A中linA基因敲除载体的构建
            2.2 敲除BHC-A菌株的linA基因
            2.3 敲除菌株Sphingomonas sp.BHC-A-AlinA降解δ-HCH的产物检测
            2.4 BHC-A中与降解δ-HCH相关基因的分析
            2.5 与δ-HCH降解相关的可能基因的验证
        3. 本章小结
参考文献
全文总结
本论文主要创新点
附录 文中所用培养基及试剂配方
攻读硕士学位期间发表的论女
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]中国东南部地区副猪嗜血杆菌分离株ERIC-PCR指纹图谱分析[J]. 李鹏,李军星,李玉峰,李文良,王先炜,姜平.  中国兽医学报. 2009(12)
[2]持久性有机污染物γ-六六六生物降解研究进展[J]. 张海燕,李梅,邱星辉.  微生物学通报. 2007(05)
[3]ERIC结构功能及ERIC-PCR技术的应用[J]. 吴清平,叶应旺,张菊梅,杨宁.  中国卫生检验杂志. 2006(04)
[4]六六六（HCH）降解菌Sphingomonassp.BHC-A的分离与降解特性的研究[J]. 马爱芝,武俊,汪婷,张国顺,李顺鹏.  微生物学报. 2005(05)
[5]有机氯农药在南京市郊蔬菜中的生物富集与质量安全[J]. 郜红建,蒋新.  环境科学学报. 2005(01)
[6]ERIC-PCR技术在李斯特氏菌种、菌株鉴定中的应用[J]. 金莉莉,王秋雨,侯潇.  遗传. 2003(02)
[7]大肠杆菌MG1655菌株ERIC-PCR图谱主带序列组成分析[J]. 陈迎春,曹又方,赵立平.  微生物学通报. 2002(06)
[8]ERIC序列在不同细菌基因组中分布的分析[J]. 曹又方,赵立平.  山西大学学报(自然科学版). 2002(04)
[9]气相色谱法测定茶叶中六六六、DDT残留量[J]. 杨静红,马亚文,孙宏宾.  中国公共卫生. 2001(05)
[10]农药六六六的GC/MS分析[J]. 张力.  广东公安科技. 2000(01)



本文编号：3309451