桔小实蝇胰岛素信号通路六个重要基因的表达与功能研究
发布时间：2021-08-26 01:28
桔小实蝇Bactrocera dorsalis （Hendel）隶属双翅目Diptera、实蝇科Tephritidae,广泛分布于热带和亚热带地区。桔小实蝇寄主范围广、适应性、繁殖力以及扩散能力强,是一种重要的果蔬害虫。该虫成虫产卵于果实内,孵化后的幼虫通过潜居果瓤取食进行危害,造成果实腐烂、未熟先落,使果蔬的经济价值和食用价值大幅度降低。桔小实蝇的防治经历了一个从诱集防治到化学防治的过程,目前,由于大量不合理地使用化学杀虫剂,造成了桔小实蝇对多种常用杀虫剂产生了严重的抗药性。昆虫胰岛素信号的转导可以调节机体的生长发育、代谢、生殖以及衰老等重要生理过程。因此,阐明桔小实蝇胰岛素信号通路调控其变态发育的分子机制,可为寻找杀虫剂新的作用靶标提供理论基础。本学位论文基于桔小实蝇转录组数据库信息,运用RT-PCR结合RACE技术,从桔小实蝇体内克隆获得了6个胰岛素信号通路基因的cDNA序列,并对其特征序列进行注释,利用qPCR技术解析了6个基因在桔小实蝇不同发育阶段、不同组织的表达特性,以及饥饿胁迫和激素处理后基因的应激表达模式；最后利用RNAi技术探索了胰岛素受体底物蛋白（Insulin r...
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 胰岛素及其信号转导的研究概况
1.1.1 胰岛素
1.1.2 胰岛素信号通路
1.2 昆虫胰岛素信号通路
1.2.1 昆虫胰岛素受体及其信号通路中的其他成员
1.2.2 昆虫胰岛素信号通路的生理功能
1.3 饥饿与胰岛素信号的关系
1.4 昆虫胰岛素信号通路与其它昆虫激素信号的相互作用
1.4.1 胰岛素信号与蜕皮激素的相互作用
1.4.2 胰岛素信号通路与保幼激素的相互作用
1.5 胰岛素对昆虫脂肪体的影响
引言
第二章 桔小实蝇胰岛素信号通路基因的克隆及序列分析
2.1 材料和方法
2.1.1 供试昆虫
2.1.2 主要仪器及试剂
2.1.3 总RNA提取
2.1.4 总RNA中gDNA的去除
2.1.5 cDNA合成
2.1.6 引物设计和合成
2.1.7 PCR扩增反应
2.1.8 克隆和测序
2.1.9 生物信息学分析
2.2 结果与分析
2.3 讨论
第三章 桔小实蝇胰岛素信号通路基因的发育阶段和组织表达特异性分析
3.1 材料和方法
3.1.1. 供试昆虫
3.1.2 实验试剂及仪器
3.1.3 总RNA提取
3.1.4 cDNA合成
3.1.5 引物设计和合成
3.1.6 实时定量PCR
3.1.7 标准曲线制作
3.1.8 数据分析
3.2 结果与分析
3.2.1 引物扩增效率
3.2.2 胰岛素信号通路基因在不同发育时期的表达分析
3.2.3 胰岛素信号通路基因在不同组织中的表达分析
3.2.4 胰岛素信号通路基因在成虫不同组织中的表达分析
3.3 讨论
第四章 外源激素和饥饿对桔小实蝇胰岛素信号通路基因表达的影响
4.1 材料和方法
4.1.1 供试昆虫
4.1.2 实验试剂及仪器
4.1.3 激素处理
4.1.4 饥饿处理
4.1.5 总RNA提取
4.1.6 cDNA合成
4.1.7 引物设计和合成
4.1.8 实时定量PCR
4.1.9 数据分析
4.2 结果与分析
4.2.1 外源激素对桔小实蝇胰岛素信号通路基因表达的影响
4.2.2 饥饿对桔小实蝇胰岛素信号通路基因表达的影响
4.3 讨论
第五章 桔小实蝇IRS基因的功能分析
5.1 材料和方法
5.1.1 供试昆虫
5.1.2 实验试剂及仪器
5.1.3 dsRNA引物的设计
5.1.4 dsRNA合成
5.1.5 dsRNA检测
5.1.6 显微注射
5.1.7 RNA干扰水平检测和表型观察
5.2 结果与分析
5.2.1 dsRNA合成
5.2.2 沉默效率
5.2.3 表型变化
5.3 讨论
第六章 主要结论、创新点及研究展望
6.1 主要结论
6.2 创新点
6.3 展望
参考文献
缩略词表
发表论文与科研成果
致谢
本文编号：3363268
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 胰岛素及其信号转导的研究概况
1.1.1 胰岛素
1.1.2 胰岛素信号通路
1.2 昆虫胰岛素信号通路
1.2.1 昆虫胰岛素受体及其信号通路中的其他成员
1.2.2 昆虫胰岛素信号通路的生理功能
1.3 饥饿与胰岛素信号的关系
1.4 昆虫胰岛素信号通路与其它昆虫激素信号的相互作用
1.4.1 胰岛素信号与蜕皮激素的相互作用
1.4.2 胰岛素信号通路与保幼激素的相互作用
1.5 胰岛素对昆虫脂肪体的影响
引言
第二章 桔小实蝇胰岛素信号通路基因的克隆及序列分析
2.1 材料和方法
2.1.1 供试昆虫
2.1.2 主要仪器及试剂
2.1.3 总RNA提取
2.1.4 总RNA中gDNA的去除
2.1.5 cDNA合成
2.1.6 引物设计和合成
2.1.7 PCR扩增反应
2.1.8 克隆和测序
2.1.9 生物信息学分析
2.2 结果与分析
2.3 讨论
第三章 桔小实蝇胰岛素信号通路基因的发育阶段和组织表达特异性分析
3.1 材料和方法
3.1.1. 供试昆虫
3.1.2 实验试剂及仪器
3.1.3 总RNA提取
3.1.4 cDNA合成
3.1.5 引物设计和合成
3.1.6 实时定量PCR
3.1.7 标准曲线制作
3.1.8 数据分析
3.2 结果与分析
3.2.1 引物扩增效率
3.2.2 胰岛素信号通路基因在不同发育时期的表达分析
3.2.3 胰岛素信号通路基因在不同组织中的表达分析
3.2.4 胰岛素信号通路基因在成虫不同组织中的表达分析
3.3 讨论
第四章 外源激素和饥饿对桔小实蝇胰岛素信号通路基因表达的影响
4.1 材料和方法
4.1.1 供试昆虫
4.1.2 实验试剂及仪器
4.1.3 激素处理
4.1.4 饥饿处理
4.1.5 总RNA提取
4.1.6 cDNA合成
4.1.7 引物设计和合成
4.1.8 实时定量PCR
4.1.9 数据分析
4.2 结果与分析
4.2.1 外源激素对桔小实蝇胰岛素信号通路基因表达的影响
4.2.2 饥饿对桔小实蝇胰岛素信号通路基因表达的影响
4.3 讨论
第五章 桔小实蝇IRS基因的功能分析
5.1 材料和方法
5.1.1 供试昆虫
5.1.2 实验试剂及仪器
5.1.3 dsRNA引物的设计
5.1.4 dsRNA合成
5.1.5 dsRNA检测
5.1.6 显微注射
5.1.7 RNA干扰水平检测和表型观察
5.2 结果与分析
5.2.1 dsRNA合成
5.2.2 沉默效率
5.2.3 表型变化
5.3 讨论
第六章 主要结论、创新点及研究展望
6.1 主要结论
6.2 创新点
6.3 展望
参考文献
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发表论文与科研成果
致谢
本文编号：3363268
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