棉铃虫胚胎细胞系的建立及其对重组杆状病毒AcMNPV-EGFP的敏感性检测
发布时间：2021-09-12 09:53
昆虫细胞培养对昆虫细胞-杆状病毒生物技术的应用以及对医学、农业、及生物学的各个领域的发展都起着重要作用。本文以鳞翅目（Lepidoptera）夜蛾科（Noctuidae）的棉铃虫（Helicoverpa armigera）卵为实验材料,建立了一个新的棉铃虫胚胎细胞系。本实验主要从棉铃虫胚胎细胞系的建立、培养、生物学特性以及昆虫细胞系利用等方面进行了研究。新棉铃虫胚胎细胞系的建立不但为离体条件下进行相关的分子生物学等实验研究提供了潜在材料,也为昆虫细胞系的培养等相关研究奠定了一定的基础。主要的研究结果如下:1.棉铃虫胚胎细胞系Ha168的建立使用含有10%的TNM-FH培养基对棉铃虫胚胎细胞体外培养,历时将近两年的培养,最终建立了一个生物学特性稳定且生长良好且可以稳定传代的细胞系,命名为Ha168。2.棉铃虫胚胎细胞系Ha168的鉴定（1）细胞形态特征:Ha168细胞系为贴壁生长型细胞,以圆形,梭形细胞为主,还有少量的巨型细胞,其中圆形细胞约占77%,大小为14.30±2.804μm,n=100;梭形细胞约占20%,大小为12.04±2.928×47.09±12.674μm,n=100。...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
技术路线图
铃虫胚胎细胞系的建立 2016 年 8 月开始进行棉铃虫胚胎细胞的培养，棉铃虫胚胎细胞培养初周后可以观察到明显的有长条形的细胞伸出，长到第二个多月的时候 25cm2的细胞培养瓶底部。细胞贴壁生长并呈圆形、梭形等，组织块胞长出。培养一个月时便可以观察到贴壁的细胞之间开始连接，并呈网些网状生长的细胞会抽动，网状生长的细胞周围出现少量的分散细胞（到第二个月时，可以观察到细胞团周围开始有很多单个生长的细胞，以增殖(图 2-2)。待细胞铺满瓶底时开始第一次传代。随着传次数的增细胞团逐渐消失，细胞增殖现象明显。传到第 8 代时，观察到 Ha168 团逐渐较少，分散的细胞占大多数（图 2-3）。传至第 16 代以后，Ha本上都是分散的单个细胞（图 2-4）。到目前为止 Ha168 细胞系以经
图 2- 2 原代培养两个月后的 Ha168 细胞形态（标尺=50um）. 2-2 Photomicrograph of Ha168 cells after 2 months of primary culture（Scale bar:50
【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞污染及检测鉴定[J]. 陈琳,陈鲤群. 中国细胞生物学学报. 2017(04)
[2]昆虫细胞无血清培养基研究进展[J]. 马伟,王家敏,令世鑫,马桂兰,马花,乔自林,马忠仁,冯玉萍. 动物医学进展. 2016(02)
[3]昆虫杆状病毒表达系统的研究进展与应用[J]. 凌同,余黎,白慕群. 微生物学免疫学进展. 2014(02)
[4]两株棉铃虫胚胎新细胞系的建立及其对杆状病毒侵染的反应[J]. 郑桂玲,李长友,周洪旭,李淑文,李国勋,薛明. 昆虫学报. 2010(02)
[5]7种鳞翅目昆虫细胞系染色体分析[J]. 张欣,冯颖,丁伟峰,马涛,马艳. 林业科学研究. 2008(04)
[6]昆虫细胞系的培养和建立技术[J]. 张寰,张永安,秦启联,王玉珠,曲良建,李瑄,苗麟,殷珍仙,张爱君,温发园. 昆虫学报. 2007(08)
[7]昆虫细胞培养及其应用进展[J]. 张佑红,朱雄伟,陈燕. 武汉化工学院学报. 2006(03)
[8]RAPD技术用于昆虫离体细胞鉴定的初步探讨[J]. 邱彤,李婷,吴刚,杜曼丽,蒋才富,刘凯于,余泽华. 生物技术. 2004(03)
[9]中国昆虫染色体研究现状与展望[J]. 张礼生,张青文,蔡青年,徐静,周明牂. 昆虫学报. 2003(06)
[10]RAPD技术在鞘翅目昆虫中的应用概况[J]. 代金霞,郑哲民. 宁夏农学院学报. 2003(01)
博士论文
[1]达摩凤蝶细胞系的建立与蛋白表达特性研究[D]. 丁伟峰.中国林业科学研究院 2015
[2]昆虫细胞系的建立及其生物学特性与应用研究[D]. 张欣.中国林业科学研究院 2011
[3]昆虫脂肪体细胞体外增殖方法及同源病毒敏感脂肪体细胞系建立研究[D]. 张寰.中国林业科学研究院 2006
硕士论文
[1]DNA条形码技术在主要实蝇类害虫识别中的应用[D]. 刘慎思.西南大学 2012
[2]两种鞘翅目昆虫细胞培养及昆虫细胞系染色体分析[D]. 张欣.中国林业科学研究院 2006
本文编号：3394014
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
技术路线图
铃虫胚胎细胞系的建立 2016 年 8 月开始进行棉铃虫胚胎细胞的培养，棉铃虫胚胎细胞培养初周后可以观察到明显的有长条形的细胞伸出，长到第二个多月的时候 25cm2的细胞培养瓶底部。细胞贴壁生长并呈圆形、梭形等，组织块胞长出。培养一个月时便可以观察到贴壁的细胞之间开始连接，并呈网些网状生长的细胞会抽动，网状生长的细胞周围出现少量的分散细胞（到第二个月时，可以观察到细胞团周围开始有很多单个生长的细胞，以增殖(图 2-2)。待细胞铺满瓶底时开始第一次传代。随着传次数的增细胞团逐渐消失，细胞增殖现象明显。传到第 8 代时，观察到 Ha168 团逐渐较少，分散的细胞占大多数（图 2-3）。传至第 16 代以后，Ha本上都是分散的单个细胞（图 2-4）。到目前为止 Ha168 细胞系以经
图 2- 2 原代培养两个月后的 Ha168 细胞形态（标尺=50um）. 2-2 Photomicrograph of Ha168 cells after 2 months of primary culture（Scale bar:50
【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞污染及检测鉴定[J]. 陈琳,陈鲤群. 中国细胞生物学学报. 2017(04)
[2]昆虫细胞无血清培养基研究进展[J]. 马伟,王家敏,令世鑫,马桂兰,马花,乔自林,马忠仁,冯玉萍. 动物医学进展. 2016(02)
[3]昆虫杆状病毒表达系统的研究进展与应用[J]. 凌同,余黎,白慕群. 微生物学免疫学进展. 2014(02)
[4]两株棉铃虫胚胎新细胞系的建立及其对杆状病毒侵染的反应[J]. 郑桂玲,李长友,周洪旭,李淑文,李国勋,薛明. 昆虫学报. 2010(02)
[5]7种鳞翅目昆虫细胞系染色体分析[J]. 张欣,冯颖,丁伟峰,马涛,马艳. 林业科学研究. 2008(04)
[6]昆虫细胞系的培养和建立技术[J]. 张寰,张永安,秦启联,王玉珠,曲良建,李瑄,苗麟,殷珍仙,张爱君,温发园. 昆虫学报. 2007(08)
[7]昆虫细胞培养及其应用进展[J]. 张佑红,朱雄伟,陈燕. 武汉化工学院学报. 2006(03)
[8]RAPD技术用于昆虫离体细胞鉴定的初步探讨[J]. 邱彤,李婷,吴刚,杜曼丽,蒋才富,刘凯于,余泽华. 生物技术. 2004(03)
[9]中国昆虫染色体研究现状与展望[J]. 张礼生,张青文,蔡青年,徐静,周明牂. 昆虫学报. 2003(06)
[10]RAPD技术在鞘翅目昆虫中的应用概况[J]. 代金霞,郑哲民. 宁夏农学院学报. 2003(01)
博士论文
[1]达摩凤蝶细胞系的建立与蛋白表达特性研究[D]. 丁伟峰.中国林业科学研究院 2015
[2]昆虫细胞系的建立及其生物学特性与应用研究[D]. 张欣.中国林业科学研究院 2011
[3]昆虫脂肪体细胞体外增殖方法及同源病毒敏感脂肪体细胞系建立研究[D]. 张寰.中国林业科学研究院 2006
硕士论文
[1]DNA条形码技术在主要实蝇类害虫识别中的应用[D]. 刘慎思.西南大学 2012
[2]两种鞘翅目昆虫细胞培养及昆虫细胞系染色体分析[D]. 张欣.中国林业科学研究院 2006
本文编号：3394014
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/nykj/3394014.html
