桔小实蝇马拉硫磷抗性品系选育及代谢抗性机制研究
发布时间：2021-10-12 10:10
本学位论文以桔小实蝇Bactrocera dorsalis （Hendel）为研究对象,综合运用杀虫剂生物测定、抗性选育、生化分析及分子生物学等相关实验技术,在室内对桔小实蝇进行马拉硫磷抗性选育的基础上,进行了代谢抗性相关生理生化机制的研究,旨在延长有机磷类杀虫剂的使用时间,同时为田间监测和治理桔小实蝇抗药性提供策略。此外,结合qPCR技术明确了桔小实蝇3种代谢酶共11个基因在不同发育阶段和不同组织的表达模式,初步解析了桔小实蝇对马拉硫磷产生代谢抗性的分子机制。主要的研究结果如下：1桔小实蝇室内马拉硫磷抗性品系选育对桔小实蝇室内种群进行了马拉硫磷抗性选育。其中,未逐代连续用药状态下筛选25代,其抗性倍数仅增长了8.89倍；此后进行逐代连续用药筛选,13代后,抗性增长至21.10倍,达中抗水平；交互抗性测定结果显示,桔小实蝇马拉硫磷抗性品系对辛硫磷、毒死蜱、高效氯氰菊酯、阿维菌素和氟虫腈等药剂产生了不同程度的交互抗性,其中对辛硫磷、毒死蜱和高效氯氰菊酯的抗性倍数分别达15.80、14.14和4.14倍。2桔小实蝇对马拉硫磷代谢抗性的生化机制研究2.1桔小实蝇不同发育阶段3种代谢酶活性比较...
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1 桔小实蝇的发生及危害
2 桔小实蝇抗药性研究概况
2.1 桔小实蝇抗药性的发展
2.2 桔小实蝇抗性机制的研究
3 有机磷类杀虫剂的特点及作用机理
3.1 有机磷杀虫剂作用特点
3.2 有机磷杀虫剂作用机理
4 昆虫对有机磷类杀虫剂的代谢抗性机制
4.1 羧酸酯酶介导的有机磷类杀虫剂的抗性机制
4.2 GSTs介导的有机磷类杀虫剂的抗性机制
4.3 细胞色素P450介导的有机磷类杀虫剂的抗性机制
5 马拉硫磷作用机理及抗性研究
引言
第二章 桔小实蝇抗马拉硫磷品系的选育
1 材料与方法
1.1 供试虫源
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
1.4 室内毒力测定
1.5 抗性筛选
2 结果与分析
2.1 桔小实蝇对马拉硫磷的抗性筛选
2.2 交互抗性的测定
3 讨论
第三章 桔小实蝇对马拉硫磷代谢抗性的生化机制研究
第一节 桔小实蝇不同发育阶段3种代谢酶活性测定
1 材料与方法
1.1 供试虫源
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
1.4 样品制备
1.5 蛋白含量测定
1.6 CarEs活性测定
1.7 GSTs活性测定
1.8 P450s活性测定
2 结果与分析
2.1 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系不同发育阶段CarEs的活性
2.2 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系不同发育阶段GSTs的活性
2.3 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系不同发育阶段P450s的活性
3 讨论
第二节 桔小实蝇成虫不同组织3种代谢酶活性测定
1 材料与方法
1.1 供试虫源
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
1.4 桔小实蝇成虫组织的解剖
1.5 实验方法
2 结果与分析
2.1 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系成虫不同组织CarEs的活性
2.2 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系成虫不同组织GSTs的活性
2.3 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系成虫不同组织P450s的活性
3 讨论
第三节 桔小实蝇幼虫不同组织3种代谢酶活性测定
1 材料与方法
1.1 供试虫源
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
1.4 桔小实蝇幼虫组织的解剖
1.5 实验方法
2 结果与分析
2.1 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系幼虫不同组织CarEs的活性
2.2 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系幼虫不同组织GSTs的活性
2.3 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系幼虫不同组织P450s的活性
3 讨论
第四章 桔小实蝇解毒代谢酶基因的表达模式解析
第一节 桔小实蝇不同发育阶段3种解毒代谢酶基因表达模式解析
1 材料与方法
1.1 供试虫源
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
1.4 引物设计
1.5 桔小实蝇不同发育阶段RNA提取及第一链cDNA合成
1.6 定量PCR的引物扩增效率和熔解曲线分析
1.7 定量PCR
1.8 数据分析方法
2 结果与分析
2.1 定量引物扩增效率及其扩增产物的熔解曲线
2.2 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系2个CarEs基因在不同发育阶段的表达模式
2.3 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系4个GSTs基因在不同发育阶段的表达模式
2.4 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系5个P450s基因在不同发育阶段的表达模式
3 讨论
第二节 桔小实蝇不同组织3种解毒代谢酶基因表达模式解析
1 材料与方法
1.1 供试虫源
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
1.4 桔小实蝇成虫组织(马氏管、中肠和脂肪体)的解剖
1.5 桔小实蝇不同组织RNA提取
1.6 实验方法
2 结果与分析
2.1 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系2个CarEs基因在不同组织的表达模式
2.2 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系4个GSTs基因在不同组织的表达模式
2.3 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系5个P450s基因在不同组织的表达模式
3 讨论
第五章 主要结果、结论与研究展望
1 主要结果与结论
1.1 桔小实蝇抗性品系选育及交互抗性
1.2 桔小实蝇马拉硫磷代谢抗性的生化机制研究
1.3 桔小实蝇解毒代谢酶基因表达模式解析
2 研究展望
2.1 继续选育马拉硫磷抗性品系,提高抗性倍数
2.2 开展桔小实蝇马拉硫磷抗性品系生态适合度的研究
2.3 补充代谢抗性机制研究数据
2.4 靶标抗性机制的研究
参考文献
在读期间发表的论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]桔小实蝇对多杀霉素的抗药性风险评估[J]. 李培征,陆永跃,梁广文,曾玲. 环境昆虫学报. 2012(04)
[2]桔小实蝇电压门控钠离子通道基因cDNA克隆及其生物信息学分析[J]. 蒋玄赵,魏丹丹,申光茂,豆威,王进军. 中国农业科学. 2012(19)
[3]5种引诱剂对桔小实蝇的引诱效果[J]. 梁关生,程东美. 广东农业科学. 2011(13)
[4]桔小实蝇CYP4D46的克隆及其组织特异性表达研究[J]. 黄勇,申光茂,刘丽,熊赛,蒋红波,王进军. 环境昆虫学报. 2010(02)
[5]桔小实蝇的综合治理[J]. 郑重禄. 中国南方果树. 2009(03)
[6]棉铃虫羧酸酯酶基因的克隆、序列分析及组织表达[J]. 王东,李兵,管京敏,赵华强,陈玉华,沈卫德. 昆虫学报. 2008(09)
[7]桔小实蝇实验种群对敌百虫、高效氯氰菊酯和阿维菌素的抗性增长规律[J]. 潘志萍,陆永跃,曾玲,曾鑫年. 昆虫学报. 2008(06)
[8]广州地区桔小实蝇的发生与综合防治关键措施[J]. 梁帆,梁广勤,赵菊鹏,周庆贤,胡学难,刘志斌,欧阳汉泉,梁振宇. 广东农业科学. 2008(03)
[9]家蚕谷胱甘肽硫-转移酶的组织分布及发育期变化规律[J]. 侯成香,桂仲争. 蚕业科学. 2007(03)
[10]华南地区桔小实蝇抗药性动态监测[J]. 章玉苹,曾玲,陆永跃,梁广文. 华南农业大学学报. 2007(03)
博士论文
[1]桔小实蝇消化和解毒代谢相关基因鉴定及其对药剂胁迫的应激反应[D]. 申光茂.西南大学 2013
[2]桔小实蝇GSTs生化及分子毒理学特性研究[D]. 胡飞.西南大学 2012
[3]3种书虱酯酶基因的克隆及其mRNA表达水平研究[D]. 唐培安.西南大学 2009
硕士论文
[1]桔小实蝇对常用杀虫剂的敏感性及其3种解毒酶酶学特性研究[D]. 王京京.西南大学 2013
本文编号：3432375
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1 桔小实蝇的发生及危害
2 桔小实蝇抗药性研究概况
2.1 桔小实蝇抗药性的发展
2.2 桔小实蝇抗性机制的研究
3 有机磷类杀虫剂的特点及作用机理
3.1 有机磷杀虫剂作用特点
3.2 有机磷杀虫剂作用机理
4 昆虫对有机磷类杀虫剂的代谢抗性机制
4.1 羧酸酯酶介导的有机磷类杀虫剂的抗性机制
4.2 GSTs介导的有机磷类杀虫剂的抗性机制
4.3 细胞色素P450介导的有机磷类杀虫剂的抗性机制
5 马拉硫磷作用机理及抗性研究
引言
第二章 桔小实蝇抗马拉硫磷品系的选育
1 材料与方法
1.1 供试虫源
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
1.4 室内毒力测定
1.5 抗性筛选
2 结果与分析
2.1 桔小实蝇对马拉硫磷的抗性筛选
2.2 交互抗性的测定
3 讨论
第三章 桔小实蝇对马拉硫磷代谢抗性的生化机制研究
第一节 桔小实蝇不同发育阶段3种代谢酶活性测定
1 材料与方法
1.1 供试虫源
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
1.4 样品制备
1.5 蛋白含量测定
1.6 CarEs活性测定
1.7 GSTs活性测定
1.8 P450s活性测定
2 结果与分析
2.1 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系不同发育阶段CarEs的活性
2.2 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系不同发育阶段GSTs的活性
2.3 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系不同发育阶段P450s的活性
3 讨论
第二节 桔小实蝇成虫不同组织3种代谢酶活性测定
1 材料与方法
1.1 供试虫源
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
1.4 桔小实蝇成虫组织的解剖
1.5 实验方法
2 结果与分析
2.1 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系成虫不同组织CarEs的活性
2.2 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系成虫不同组织GSTs的活性
2.3 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系成虫不同组织P450s的活性
3 讨论
第三节 桔小实蝇幼虫不同组织3种代谢酶活性测定
1 材料与方法
1.1 供试虫源
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
1.4 桔小实蝇幼虫组织的解剖
1.5 实验方法
2 结果与分析
2.1 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系幼虫不同组织CarEs的活性
2.2 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系幼虫不同组织GSTs的活性
2.3 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系幼虫不同组织P450s的活性
3 讨论
第四章 桔小实蝇解毒代谢酶基因的表达模式解析
第一节 桔小实蝇不同发育阶段3种解毒代谢酶基因表达模式解析
1 材料与方法
1.1 供试虫源
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
1.4 引物设计
1.5 桔小实蝇不同发育阶段RNA提取及第一链cDNA合成
1.6 定量PCR的引物扩增效率和熔解曲线分析
1.7 定量PCR
1.8 数据分析方法
2 结果与分析
2.1 定量引物扩增效率及其扩增产物的熔解曲线
2.2 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系2个CarEs基因在不同发育阶段的表达模式
2.3 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系4个GSTs基因在不同发育阶段的表达模式
2.4 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系5个P450s基因在不同发育阶段的表达模式
3 讨论
第二节 桔小实蝇不同组织3种解毒代谢酶基因表达模式解析
1 材料与方法
1.1 供试虫源
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
1.4 桔小实蝇成虫组织(马氏管、中肠和脂肪体)的解剖
1.5 桔小实蝇不同组织RNA提取
1.6 实验方法
2 结果与分析
2.1 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系2个CarEs基因在不同组织的表达模式
2.2 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系4个GSTs基因在不同组织的表达模式
2.3 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系5个P450s基因在不同组织的表达模式
3 讨论
第五章 主要结果、结论与研究展望
1 主要结果与结论
1.1 桔小实蝇抗性品系选育及交互抗性
1.2 桔小实蝇马拉硫磷代谢抗性的生化机制研究
1.3 桔小实蝇解毒代谢酶基因表达模式解析
2 研究展望
2.1 继续选育马拉硫磷抗性品系,提高抗性倍数
2.2 开展桔小实蝇马拉硫磷抗性品系生态适合度的研究
2.3 补充代谢抗性机制研究数据
2.4 靶标抗性机制的研究
参考文献
在读期间发表的论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]桔小实蝇对多杀霉素的抗药性风险评估[J]. 李培征,陆永跃,梁广文,曾玲. 环境昆虫学报. 2012(04)
[2]桔小实蝇电压门控钠离子通道基因cDNA克隆及其生物信息学分析[J]. 蒋玄赵,魏丹丹,申光茂,豆威,王进军. 中国农业科学. 2012(19)
[3]5种引诱剂对桔小实蝇的引诱效果[J]. 梁关生,程东美. 广东农业科学. 2011(13)
[4]桔小实蝇CYP4D46的克隆及其组织特异性表达研究[J]. 黄勇,申光茂,刘丽,熊赛,蒋红波,王进军. 环境昆虫学报. 2010(02)
[5]桔小实蝇的综合治理[J]. 郑重禄. 中国南方果树. 2009(03)
[6]棉铃虫羧酸酯酶基因的克隆、序列分析及组织表达[J]. 王东,李兵,管京敏,赵华强,陈玉华,沈卫德. 昆虫学报. 2008(09)
[7]桔小实蝇实验种群对敌百虫、高效氯氰菊酯和阿维菌素的抗性增长规律[J]. 潘志萍,陆永跃,曾玲,曾鑫年. 昆虫学报. 2008(06)
[8]广州地区桔小实蝇的发生与综合防治关键措施[J]. 梁帆,梁广勤,赵菊鹏,周庆贤,胡学难,刘志斌,欧阳汉泉,梁振宇. 广东农业科学. 2008(03)
[9]家蚕谷胱甘肽硫-转移酶的组织分布及发育期变化规律[J]. 侯成香,桂仲争. 蚕业科学. 2007(03)
[10]华南地区桔小实蝇抗药性动态监测[J]. 章玉苹,曾玲,陆永跃,梁广文. 华南农业大学学报. 2007(03)
博士论文
[1]桔小实蝇消化和解毒代谢相关基因鉴定及其对药剂胁迫的应激反应[D]. 申光茂.西南大学 2013
[2]桔小实蝇GSTs生化及分子毒理学特性研究[D]. 胡飞.西南大学 2012
[3]3种书虱酯酶基因的克隆及其mRNA表达水平研究[D]. 唐培安.西南大学 2009
硕士论文
[1]桔小实蝇对常用杀虫剂的敏感性及其3种解毒酶酶学特性研究[D]. 王京京.西南大学 2013
本文编号：3432375
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