黄瓜根际土壤肉桂酸降解菌株的筛选及其功能特性研究
发布时间：2021-10-20 20:54
本研究以酚酸类物质肉桂酸为研究对象,采用富集培养、稀释涂布的方法,从连作黄瓜根际土壤中分离筛选肉桂酸降解菌株,并对其中两株能够高效降解肉桂酸的菌株进行了生物学鉴定、降解能力、降解特性和生物功能测定,并通过降解液种子发芽试验和温室土培试验验证了降解菌株对肉桂酸的降解效果。主要研究结果如下：（1）从连作黄瓜根际土壤中筛选得到1株肉桂酸降解真菌2-4和1株降解细菌42-3；通过形态学、生理生化及分子等多相分类法初步鉴定为黑曲霉（Aspergillus niger）和恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）,其在山东农业微生物菌种资源保藏管理中心的保藏编号为AMCC300047、AMCC100141。（2）在含2.0mmol·L-1肉桂酸的无机盐液体培养基培养条件下,运用紫外分光光度法测定了降解真菌2-4和降解细菌42-3的降解率和菌体生长量。在pH7.0、温度30℃、转速160r.min-1条件下,降解细菌能够在12h内达到99.35%的降解率,降解真菌72h达99.62%降解率。（3）通过单因素试验对降解菌进行降解特性测定,结果表明：降解真菌2-4适宜降解的温度条件为30℃-3...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
缩略词中英文对照表
中文摘要
Abstract
1 前言
1.1 蔬菜连作障碍
1.2 蔬菜连作障碍研究进展
1.2.1 化感物质
1.2.2 化感作用与自毒作用
1.3 连作障碍的栽培技术防治研究
1.4 连作障碍的生物防治研究
1.4.1 生防功能有益微生物
1.4.2 降解功能有益微生物
1.5 降解微生物降解机理的研究
1.5.1 生物降解
1.5.2 降解代谢途径
1.6 本研究的立项依据、研究内容与技术路线
1.6.1 立项依据
1.6.2 研究内容
1.6.3 技术路线
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 样品的采集
2.1.2 仪器设备
2.1.3 生化试剂
2.1.4 供试病原菌及黄瓜品种
2.1.5 主要培养基的配置
2.1.5.1 分离培养基
2.1.5.2 鉴定培养基
2.2 试验方法
2.2.1 肉桂酸降解菌的筛选浓度
2.2.2 肉桂酸降解菌的筛选
2.2.2.1 以肉桂酸为唯一碳源的微生物富集
2.2.2.2 以肉桂酸为唯一碳源的微生物的分离及纯化
2.2.2.3 以肉桂酸为唯一碳源的微生物的驯化验证
2.2.3 肉桂酸降解菌降解体系的建立
2.2.3.1 肉桂酸标准吸光曲线的测定
2.2.3.2 细胞悬液的制备
2.2.3.3 分光光度法测定
2.2.3.4 高效液相色谱分析
2.2.4 肉桂酸降解菌的生物学鉴定
2.2.4.1 形态学鉴定
2.2.4.2 生理生化鉴定
2.2.4.3 分子鉴定
2.2.5 肉桂酸降解菌的降解特性测定
2.2.5.1 培养初始pH
2.2.5.2 培养温度
2.2.5.3 底物浓度
2.2.5.4 底物专一性
2.2.6 肉桂酸降解菌的生物功能测定
2.2.6.1 降解真菌2-4对病原菌生长的影响
2.2.6.2 降解细菌42-3发酵液对黄瓜种子发芽的影响
2.2.6.3 降解细菌42-3菌体对黄瓜幼苗生长的影响
2.2.7 肉桂酸降解菌的降解液对黄瓜种子发芽试验
2.2.7.1 试验材料
2.2.7.2 试验设计
2.2.7.3 测定方法
2.2.8 肉桂酸降解菌的温室土培试验
2.2.8.1 试验材料
2.2.8.2 试验设计
2.2.8.3 测定方法
2.2.9 数据分析
3 结果与分析
3.1 肉桂酸降解菌筛选浓度的确定
3.2 肉桂酸降解菌的筛选结果
3.3 肉桂酸降解菌的降解体系
3.3.1 肉桂酸的标准吸光曲线
3.3.2 分光光度法测定降解率和菌体生长
3.3.3 高效液相降解图谱
3.4 肉桂酸降解菌的生物学鉴定
3.4.1 形态学鉴定结果
3.4.1.1 细菌形态特征
3.4.1.2 真菌形态特征
3.4.2 生理生化鉴定结果
3.4.3 分子鉴定结果
3.5 肉桂酸降解菌的降解特性
3.5.1 最适pH
3.5.2 最适温度
3.5.3 最适底物浓度
3.5.4 降解广谱性
3.6 肉桂酸降解菌的生物功能
3.6.1 降解真菌2-4对病原菌的平板对峙结果
3.6.2 降解细菌42-3发酵液对黄瓜种子发芽结果
3.6.3 降解细菌42-3菌体对黄瓜幼苗生长结果
3.7 肉桂酸降解菌的降解液对黄瓜种子发芽试验结果
3.7.1 种子发芽结果
3.7.2 幼苗生长量
3.7.3 抗氧化酶活性
3.7.4 可溶性蛋白及可溶性糖含量
3.7.5 丙二醛含量
3.8 肉桂酸降解菌的温室土培试验结果
3.8.1 不同处理对黄瓜株高的影响
3.8.2 不同处理对黄瓜茎粗的影响
3.8.3 不同处理对黄瓜叶面积的影响
3.8.4 不同处理对黄瓜幼苗干鲜重的影响
4 讨论
4.1 肉桂酸降解菌的筛选
4.2 肉桂酸降解菌的降解体系评价
4.3 肉桂酸降解菌的降解特性
4.4 肉桂酸降解菌的生物功能
4.5 肉桂酸降解菌的降解液对黄瓜种子发芽的影响
4.6 肉桂酸降解菌的温室土培降解效果
4.7 关于试验中存在的问题和进一步研究的设想
5 结论
参考文献
附录
致谢
攻读学位期间发表论文情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]拮抗菌与有机肥配合防治黄瓜连作障碍及提高黄瓜品质研究[J]. 吴洪生,周晓冬,闫霜,刘小雪,王增辉,孔祥云,刘正柱. 西南农业学报. 2013(04)
[2]一株氯氰菊酯降解真菌的筛选鉴定及其降解特性研究[J]. 王志龙,刘书亮,姚开,袁怀瑜,赖文,赵楠. 环境科学学报. 2013(06)
[3]核桃内生菌HT3对番茄和黄瓜的促生作用[J]. 王美琴,卢海波,赵立娟,郝晓娟. 山西农业科学. 2013(02)
[4]解磷真菌FM菌株对3种作物促生作用的初步研究[J]. 梁艳琼,雷照鸣,郑肖兰,吴伟怀,李锐,贺春萍. 广东农业科学. 2012(24)
[5]草莓根腐病拮抗真菌筛选鉴定及其防病促生作用[J]. 申光辉,薛泉宏,张晶,段佳丽,王东胜,杨兴华. 中国农业科学. 2012(22)
[6]黄瓜枯萎病拮抗放线菌筛选及其生防作用鉴定[J]. 刘金秀,马正,申屠旭萍,于冰,俞晓平. 园艺学报. 2012(06)
[7]园艺作物连作障碍的研究进展[J]. 耿士均,刘刊,商海燕,权俊娇,陆小平,王波. 北方园艺. 2012(07)
[8]植物根际促生细菌（PGPR）分离筛选与鉴定[J]. 杨蓉,房世杰,杨文琦,侯敏,詹发强,侯新强,张慧涛,龙宣杞,崔卫东. 新疆农业科学. 2011(12)
[9]阿魏酸降解放线菌的筛选及其降解与拮抗效果研究[J]. 王晓辉,薛泉宏. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2011(12)
[10]高效降解有机磷农药真菌的分离鉴定及其特性研究[J]. 王继雯,甄静,谢宝恩,刘莹莹,李冠杰,周伏忠,陈国参. 中国农学通报. 2011(27)
博士论文
[1]黄瓜自毒物质对细胞生长的影响及缓解机制[D]. 张韵.浙江大学 2009
[2]酚类物质对苹果的化感作用及重茬障碍影响机理的研究[D]. 张江红.山东农业大学 2005
[3]黄瓜根系自毒物质对其根系病害的助长作用及其缓解机制研究[D]. 叶素芬.浙江大学 2004
[4]外源酚酸对黄瓜自毒作用的生理生化机制研究[D]. 吴凤芝.东北农业大学 2002
硕士论文
[1]环渤海湾苹果产区再植障碍园与丰产园土壤细菌遗传多样性分析[D]. 张一.山东农业大学 2011
[2]杨树人工林连作酚酸生物降解的研究[D]. 王宗芹.山东农业大学 2010
[3]黄瓜幼苗对苯丙烯酸胁迫的生理响应及外源NO的缓解作用研究[D]. 王文.西南大学 2010
[4]草莓酚酸类自毒物质降解菌筛选及对草莓防病促生作用研究[D]. 杜霄霞.西北农林科技大学 2009
[5]肉桂醛和肉桂酸生物降解及其转化产物跟踪分析[D]. 暴玮.广西大学 2008
[6]白腐菌对黄瓜连作障碍修复作用研究[D]. 尤晓颜.河南农业大学 2006
[7]黄瓜根系分泌物中化感物质的鉴定及其生物降解研究[D]. 杜国营.河南农业大学 2006
[8]嫁接黄瓜连作障碍的研究[D]. 戚建华.西北农林科技大学 2004
本文编号：3447587
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
缩略词中英文对照表
中文摘要
Abstract
1 前言
1.1 蔬菜连作障碍
1.2 蔬菜连作障碍研究进展
1.2.1 化感物质
1.2.2 化感作用与自毒作用
1.3 连作障碍的栽培技术防治研究
1.4 连作障碍的生物防治研究
1.4.1 生防功能有益微生物
1.4.2 降解功能有益微生物
1.5 降解微生物降解机理的研究
1.5.1 生物降解
1.5.2 降解代谢途径
1.6 本研究的立项依据、研究内容与技术路线
1.6.1 立项依据
1.6.2 研究内容
1.6.3 技术路线
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 样品的采集
2.1.2 仪器设备
2.1.3 生化试剂
2.1.4 供试病原菌及黄瓜品种
2.1.5 主要培养基的配置
2.1.5.1 分离培养基
2.1.5.2 鉴定培养基
2.2 试验方法
2.2.1 肉桂酸降解菌的筛选浓度
2.2.2 肉桂酸降解菌的筛选
2.2.2.1 以肉桂酸为唯一碳源的微生物富集
2.2.2.2 以肉桂酸为唯一碳源的微生物的分离及纯化
2.2.2.3 以肉桂酸为唯一碳源的微生物的驯化验证
2.2.3 肉桂酸降解菌降解体系的建立
2.2.3.1 肉桂酸标准吸光曲线的测定
2.2.3.2 细胞悬液的制备
2.2.3.3 分光光度法测定
2.2.3.4 高效液相色谱分析
2.2.4 肉桂酸降解菌的生物学鉴定
2.2.4.1 形态学鉴定
2.2.4.2 生理生化鉴定
2.2.4.3 分子鉴定
2.2.5 肉桂酸降解菌的降解特性测定
2.2.5.1 培养初始pH
2.2.5.2 培养温度
2.2.5.3 底物浓度
2.2.5.4 底物专一性
2.2.6 肉桂酸降解菌的生物功能测定
2.2.6.1 降解真菌2-4对病原菌生长的影响
2.2.6.2 降解细菌42-3发酵液对黄瓜种子发芽的影响
2.2.6.3 降解细菌42-3菌体对黄瓜幼苗生长的影响
2.2.7 肉桂酸降解菌的降解液对黄瓜种子发芽试验
2.2.7.1 试验材料
2.2.7.2 试验设计
2.2.7.3 测定方法
2.2.8 肉桂酸降解菌的温室土培试验
2.2.8.1 试验材料
2.2.8.2 试验设计
2.2.8.3 测定方法
2.2.9 数据分析
3 结果与分析
3.1 肉桂酸降解菌筛选浓度的确定
3.2 肉桂酸降解菌的筛选结果
3.3 肉桂酸降解菌的降解体系
3.3.1 肉桂酸的标准吸光曲线
3.3.2 分光光度法测定降解率和菌体生长
3.3.3 高效液相降解图谱
3.4 肉桂酸降解菌的生物学鉴定
3.4.1 形态学鉴定结果
3.4.1.1 细菌形态特征
3.4.1.2 真菌形态特征
3.4.2 生理生化鉴定结果
3.4.3 分子鉴定结果
3.5 肉桂酸降解菌的降解特性
3.5.1 最适pH
3.5.2 最适温度
3.5.3 最适底物浓度
3.5.4 降解广谱性
3.6 肉桂酸降解菌的生物功能
3.6.1 降解真菌2-4对病原菌的平板对峙结果
3.6.2 降解细菌42-3发酵液对黄瓜种子发芽结果
3.6.3 降解细菌42-3菌体对黄瓜幼苗生长结果
3.7 肉桂酸降解菌的降解液对黄瓜种子发芽试验结果
3.7.1 种子发芽结果
3.7.2 幼苗生长量
3.7.3 抗氧化酶活性
3.7.4 可溶性蛋白及可溶性糖含量
3.7.5 丙二醛含量
3.8 肉桂酸降解菌的温室土培试验结果
3.8.1 不同处理对黄瓜株高的影响
3.8.2 不同处理对黄瓜茎粗的影响
3.8.3 不同处理对黄瓜叶面积的影响
3.8.4 不同处理对黄瓜幼苗干鲜重的影响
4 讨论
4.1 肉桂酸降解菌的筛选
4.2 肉桂酸降解菌的降解体系评价
4.3 肉桂酸降解菌的降解特性
4.4 肉桂酸降解菌的生物功能
4.5 肉桂酸降解菌的降解液对黄瓜种子发芽的影响
4.6 肉桂酸降解菌的温室土培降解效果
4.7 关于试验中存在的问题和进一步研究的设想
5 结论
参考文献
附录
致谢
攻读学位期间发表论文情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]拮抗菌与有机肥配合防治黄瓜连作障碍及提高黄瓜品质研究[J]. 吴洪生,周晓冬,闫霜,刘小雪,王增辉,孔祥云,刘正柱. 西南农业学报. 2013(04)
[2]一株氯氰菊酯降解真菌的筛选鉴定及其降解特性研究[J]. 王志龙,刘书亮,姚开,袁怀瑜,赖文,赵楠. 环境科学学报. 2013(06)
[3]核桃内生菌HT3对番茄和黄瓜的促生作用[J]. 王美琴,卢海波,赵立娟,郝晓娟. 山西农业科学. 2013(02)
[4]解磷真菌FM菌株对3种作物促生作用的初步研究[J]. 梁艳琼,雷照鸣,郑肖兰,吴伟怀,李锐,贺春萍. 广东农业科学. 2012(24)
[5]草莓根腐病拮抗真菌筛选鉴定及其防病促生作用[J]. 申光辉,薛泉宏,张晶,段佳丽,王东胜,杨兴华. 中国农业科学. 2012(22)
[6]黄瓜枯萎病拮抗放线菌筛选及其生防作用鉴定[J]. 刘金秀,马正,申屠旭萍,于冰,俞晓平. 园艺学报. 2012(06)
[7]园艺作物连作障碍的研究进展[J]. 耿士均,刘刊,商海燕,权俊娇,陆小平,王波. 北方园艺. 2012(07)
[8]植物根际促生细菌（PGPR）分离筛选与鉴定[J]. 杨蓉,房世杰,杨文琦,侯敏,詹发强,侯新强,张慧涛,龙宣杞,崔卫东. 新疆农业科学. 2011(12)
[9]阿魏酸降解放线菌的筛选及其降解与拮抗效果研究[J]. 王晓辉,薛泉宏. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2011(12)
[10]高效降解有机磷农药真菌的分离鉴定及其特性研究[J]. 王继雯,甄静,谢宝恩,刘莹莹,李冠杰,周伏忠,陈国参. 中国农学通报. 2011(27)
博士论文
[1]黄瓜自毒物质对细胞生长的影响及缓解机制[D]. 张韵.浙江大学 2009
[2]酚类物质对苹果的化感作用及重茬障碍影响机理的研究[D]. 张江红.山东农业大学 2005
[3]黄瓜根系自毒物质对其根系病害的助长作用及其缓解机制研究[D]. 叶素芬.浙江大学 2004
[4]外源酚酸对黄瓜自毒作用的生理生化机制研究[D]. 吴凤芝.东北农业大学 2002
硕士论文
[1]环渤海湾苹果产区再植障碍园与丰产园土壤细菌遗传多样性分析[D]. 张一.山东农业大学 2011
[2]杨树人工林连作酚酸生物降解的研究[D]. 王宗芹.山东农业大学 2010
[3]黄瓜幼苗对苯丙烯酸胁迫的生理响应及外源NO的缓解作用研究[D]. 王文.西南大学 2010
[4]草莓酚酸类自毒物质降解菌筛选及对草莓防病促生作用研究[D]. 杜霄霞.西北农林科技大学 2009
[5]肉桂醛和肉桂酸生物降解及其转化产物跟踪分析[D]. 暴玮.广西大学 2008
[6]白腐菌对黄瓜连作障碍修复作用研究[D]. 尤晓颜.河南农业大学 2006
[7]黄瓜根系分泌物中化感物质的鉴定及其生物降解研究[D]. 杜国营.河南农业大学 2006
[8]嫁接黄瓜连作障碍的研究[D]. 戚建华.西北农林科技大学 2004
本文编号：3447587
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