海洋桔青霉W1抗真菌蛋白的分离纯化与特性研究
发布时间：2021-12-17 17:39
植物致病真菌是造成主要粮食和经济作物减产的头号杀手,目前大量使用的化学农药已经对环境和人类健康造成了巨大的负面影响。同时开发新型化学农药的高成本及耐药微生物的迅速出现等因素,引起我们对生物农药的关注。其中,抗真菌蛋白因其来源广泛及其独特的作用机制,为新型抗真菌活性物质的研究提供了重要信息,并成为了研究热点。此外,陆地生物资源已被大量开发,发现新型抗菌物质的可能性不断下降,迫切需要寻找新的来源。海洋提供了非常特殊的生态环境,使海洋微生物能够进化出特殊的代谢途径,产生更多新型的抗菌活性物质,将在植物病原菌治理及活性物质开发方面发挥重要作用,因此,从海洋微生物中分离抗真菌蛋白具有重要的研究意义。为了从海洋中寻找具有高效抗菌活性的天然产物,本研究首先采用平板稀释法和平板扩散法从深海中筛选活性菌株。通过使用不同配方的培养基,对采集自各种海洋环境（大洋、北极和南极）的深海样品进行微生物菌株的分离筛选,筛选到了300余株真菌以及大量的细菌,其中包括了许多具有抗菌活性的微生物。接着以7株植物病原真菌和7株致病细菌为指示菌进一步筛选并鉴定出具有高效抗菌活性的菌株,植物病原真菌包括宛氏拟青霉、胶孢炭疽菌、...
【文章来源】：厦门大学福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：123 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
Content
摘要
Abstract
第一章 前言
1.1 真菌的危害
1.2 微生物农药
1.3 海洋活性微生物资源
1.3.1 海洋微生物的多样性
1.3.2 海洋微生物是新型活性物质的重要来源
1.4 微生物来源的抗菌蛋白
1.4.1 微生物来源抗菌蛋白的分类
1.4.2 真菌来源抗菌蛋白的作用机制
1.5 抗菌蛋白在农业防治中的应用
1.5.1 利用抗菌蛋白控制植物疾病
1.5.2 抗菌蛋白的合成
1.5.3 利用转基因植物表达抗菌蛋白
1.6 本课题的研究意义和目的
第二章 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 样品来源
2.1.2 受试菌
2.1.3 培养基
2.1.4 寡核苷酸引物
2.1.5 主要试剂及材料
2.1.6 主要溶液
2.1.7 主要仪器设备
2.2 实验方法
2.2.1 菌株的初筛及保藏
2.2.2 拮抗活性菌株的复筛
2.2.3 拮抗活性菌株的分子生物学鉴定
2.2.4 粗蛋白的分离
2.2.5 色谱分析法分离抗真菌蛋白
2.2.6 硝酸银染色
2.2.7 质谱分析
2.2.8 N端测序
2.2.9 抗真菌蛋白MIC(最低抑制浓度)测定
2.2.10 抗真菌蛋白的理化性质分析
2.2.11 添加营养源对发酵上清活性的影响
2.2.12 抗菌物质应用于农作物病害防治
第三章 结果与分析
3.1 抗菌活性菌株的分离筛选及初步鉴定
3.1.1 活性菌株筛选
3.1.2 活性菌株的鉴定与统计
3.2 海洋桔青霉W1抗真菌蛋白的分离纯化
3.2.1 海洋真菌W1的鉴定
3.2.2 海洋桔青霉W1发酵上清的抑菌活性
3.2.3 饱和硫酸铵沉淀及抗菌物质的初步鉴定
3.2.4 DEAE离子交换层析及活性检测
3.2.5 CM离子交换层析及活性检测
3.2.6 SDS-PAGE和硝酸银染色
3.2.7 抗真菌蛋白的质谱分析
3.2.8 抗真菌蛋白的N端测序分析
3.3 海洋桔青霉W1抗真菌蛋白的理化性质分析
3.3.1 抗真菌蛋白的MIC(最低抑制浓度)测定
3.3.2 紫外辐射对抗真菌蛋白活性的影响
3.3.3 温度对抗真菌蛋白活性的影响
3.3.4 加热时间对抗真菌蛋白活性的影响
3.3.5 金属离子对抗真菌蛋白活性的影响
3.3.6 有机溶剂对抗真菌蛋白活性的影响
3.3.7 pH对抗真菌蛋白活性的影响
3.3.8 表面活性剂对抗真菌蛋白活性的影响
3.3.9 蛋白酶对抗真菌蛋白活性的影响
3.4 添加营养源对发酵上清活性的影响
3.5 海洋桔青霉W1在作物病害防治上的应用
第四章 小结与讨论
4.1 小结
4.2 讨论
展望
参考文献
附录1 第21次大洋科考采集的印度洋样品站位信息表
附录2 第22次大洋科考采集的南大西洋样品站位信息表
附录3 第26次大洋科考采集的南大西洋样品站位信息表
附录4 第5次北极科考采集的沉积物样品站位信息表
附录5 第28次南极科考采集的水样站位信息表
附录6 第29次南极科考采集的样品站位信息表
硕士期间发表的研究成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]微生物农药研究进展[J]. 袁兵兵,张海青,陈静. 山东轻工业学院学报(自然科学版). 2010(01)
[2]微生物资源在现代农业中的应用[J]. 袁龙刚,张军林. 陕西农业科学. 2006(05)
[3]海洋细菌B-9987菌株产生的抑菌物质及对几种植物病原真菌的作用[J]. 田黎,顾振芳,陈杰,黄乐平,田玲. 植物病理学报. 2003(01)
本文编号：3540610
【文章来源】：厦门大学福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：123 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
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摘要
Abstract
第一章 前言
1.1 真菌的危害
1.2 微生物农药
1.3 海洋活性微生物资源
1.3.1 海洋微生物的多样性
1.3.2 海洋微生物是新型活性物质的重要来源
1.4 微生物来源的抗菌蛋白
1.4.1 微生物来源抗菌蛋白的分类
1.4.2 真菌来源抗菌蛋白的作用机制
1.5 抗菌蛋白在农业防治中的应用
1.5.1 利用抗菌蛋白控制植物疾病
1.5.2 抗菌蛋白的合成
1.5.3 利用转基因植物表达抗菌蛋白
1.6 本课题的研究意义和目的
第二章 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 样品来源
2.1.2 受试菌
2.1.3 培养基
2.1.4 寡核苷酸引物
2.1.5 主要试剂及材料
2.1.6 主要溶液
2.1.7 主要仪器设备
2.2 实验方法
2.2.1 菌株的初筛及保藏
2.2.2 拮抗活性菌株的复筛
2.2.3 拮抗活性菌株的分子生物学鉴定
2.2.4 粗蛋白的分离
2.2.5 色谱分析法分离抗真菌蛋白
2.2.6 硝酸银染色
2.2.7 质谱分析
2.2.8 N端测序
2.2.9 抗真菌蛋白MIC(最低抑制浓度)测定
2.2.10 抗真菌蛋白的理化性质分析
2.2.11 添加营养源对发酵上清活性的影响
2.2.12 抗菌物质应用于农作物病害防治
第三章 结果与分析
3.1 抗菌活性菌株的分离筛选及初步鉴定
3.1.1 活性菌株筛选
3.1.2 活性菌株的鉴定与统计
3.2 海洋桔青霉W1抗真菌蛋白的分离纯化
3.2.1 海洋真菌W1的鉴定
3.2.2 海洋桔青霉W1发酵上清的抑菌活性
3.2.3 饱和硫酸铵沉淀及抗菌物质的初步鉴定
3.2.4 DEAE离子交换层析及活性检测
3.2.5 CM离子交换层析及活性检测
3.2.6 SDS-PAGE和硝酸银染色
3.2.7 抗真菌蛋白的质谱分析
3.2.8 抗真菌蛋白的N端测序分析
3.3 海洋桔青霉W1抗真菌蛋白的理化性质分析
3.3.1 抗真菌蛋白的MIC(最低抑制浓度)测定
3.3.2 紫外辐射对抗真菌蛋白活性的影响
3.3.3 温度对抗真菌蛋白活性的影响
3.3.4 加热时间对抗真菌蛋白活性的影响
3.3.5 金属离子对抗真菌蛋白活性的影响
3.3.6 有机溶剂对抗真菌蛋白活性的影响
3.3.7 pH对抗真菌蛋白活性的影响
3.3.8 表面活性剂对抗真菌蛋白活性的影响
3.3.9 蛋白酶对抗真菌蛋白活性的影响
3.4 添加营养源对发酵上清活性的影响
3.5 海洋桔青霉W1在作物病害防治上的应用
第四章 小结与讨论
4.1 小结
4.2 讨论
展望
参考文献
附录1 第21次大洋科考采集的印度洋样品站位信息表
附录2 第22次大洋科考采集的南大西洋样品站位信息表
附录3 第26次大洋科考采集的南大西洋样品站位信息表
附录4 第5次北极科考采集的沉积物样品站位信息表
附录5 第28次南极科考采集的水样站位信息表
附录6 第29次南极科考采集的样品站位信息表
硕士期间发表的研究成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]微生物农药研究进展[J]. 袁兵兵,张海青,陈静. 山东轻工业学院学报(自然科学版). 2010(01)
[2]微生物资源在现代农业中的应用[J]. 袁龙刚,张军林. 陕西农业科学. 2006(05)
[3]海洋细菌B-9987菌株产生的抑菌物质及对几种植物病原真菌的作用[J]. 田黎,顾振芳,陈杰,黄乐平,田玲. 植物病理学报. 2003(01)
本文编号：3540610
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