内生菌和根际微生物对三种牧草的生长和抗病作用研究
发布时间：2022-01-08 03:52
植物内生菌及根际微生物产生的功能性代谢产物能为宿主植物提供一定的营养,还可提高宿主的抗病性和抗逆性。实验材料“川草2号”老芒麦、“川西”肃草、“阿坝”垂穗披碱草是3种优良新品种牧草。通过平板分离法,从3种牧草分离获得根际微生物和内生菌共173种,其中真菌22种、细菌151种。对各菌株进行抗小麦赤霉病和促进生长功能评价结果表明,4株真菌及61株细菌可产生吲哚乙酸（IAA）,浓度范围为0.02～14.75 mg/L,菌株PJ81产量最高为14.75 mg/L;有8株真菌和93株细菌可产生赤霉素（GA3）,浓度范围为11.03～468.91 mg/L,其中PJ119产量最高为468.91mg/L;9株真菌及85株细菌可产铁载体;有5株真菌和77株细菌能够降解纤维素。不同菌株抑制病原菌效果存在差异,抑菌率范围为:43.35%-82.76%。综合分析分离各菌株能力表明,菌株PJ22、PJ68、PJ73和PJ81均具上述的抗病和促生能力。真菌菌株中无同时具备促生及抗病能力的菌株,菌株PJ161在真菌中产生IAA能力最强,达8.76 mg/L,PJ112真菌产生GA3...
【文章来源】：西华师范大学四川省
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
实验技术路线
第二章材料与方法9第二章材料与方法2.1试验材料2.1.1样品采集材料“川草2号”老芒麦，“阿坝”垂穗披碱草和“川西”肃草来自四川省阿坝藏族羌族自治州红原县（如图2-1），由四川省草原科学研究院提供（海拔3472m）。样品采集方式采取连根拔起的方式。样品采集地点的海拔高度及经纬度如表2-1所示。图2-1材料采集点Figure.2-1Collectionpointsofplantmaterialsusedinthisstudy表2-1牧草样品采集地点Table.2-1Thelocationofthesamplingpoints牧草海拔/m经度/E纬度/N“川草2号”老芒麦3475102.5453°32.7775°“川西”肃草3470102.5454°32.7776°“阿坝”垂穗披碱草3472102.5456°32.7776°2.1.2实验主要试剂本实验主要采用蛋白胨、NaCl、琼脂粉、葡萄糖、酵母膏、牛肉膏、酪蛋白、胰蛋白胨、MgSO4·7H2O、麦芽浸膏、萘啶酮酸、放线菌酮、铬天青、FeCl3、Na2HPO4、KH2PO4、NH4Cl、哌嗪二乙磺酸等试剂。
块CAS检测培养基上点种菌饼，重复3次。分别置于30℃下恒温培养箱培养细菌3d；28℃下培养真菌7d。菌落周围穿线黄色晕圈为阳性，无黄色晕圈则为阴性，测定并记录水解圈大校2.2.5微生物抑菌效果采用平板对峙培养[123]。菌株培养及菌饼制备参照2.2.4.3），将菌饼（6mm）接种到中部接种了赤霉病病原菌菌饼(6mm)且培养了的PDA培养基（80mm）。进行对峙培养7d。以未加细菌的的接种了赤霉病原菌的培养基作为空白对照。对有抑菌效果的细菌测定其抑菌效果，抑菌效率=（对照组病原菌直径-实验组病原菌直径）/对照组病原菌直径。图2-2离体拮抗实验Figure.2-2Thediagramofantagonisticinvitro2.2.6目标菌株系统发育地位分析2.2.6.1细菌DNA提取取3mL培养菌液，10000xg离心2min。倒掉上清液，加入180μLTE缓冲液，18μL50mg/mL溶菌酶、5μLRNA酶（20mg/L），30℃水浴30min。5000xg离心5min，取10μL上清液。加入25mgGlassBeads和200μLBufferTL，涡旋5min，静置，取上清至1.5mL离心管。加25uL蛋白酶K，涡旋10s，瞬时离心。50℃水浴30min，每隔3min涡旋一次。10000xg离心2min，取上清至新离心管。加220uLBufferBL，混匀后于65℃水浴10min。加入220μL无水乙醇，涡旋20s。转移混合液于吸附柱，10000xg离心1min。将吸附柱放入另一收集管，加500μLBufferKB，10000xg离心1min，倒掉废液。加入650μLDNAWashBuffer，10000xg离心1min，倒掉废液。加450μLDNAWashBuffer，
【参考文献】：
期刊论文
[1]两株灰黄霉素产生菌的18S rDNA和ITS序列测定与分析[J]. 陆娇娇,畅瑛,李波,施碧红. 福建农业科技. 2019(10)
[2]施用腐植酸对植物根际和内生微生物的影响[J]. 王若楠,邱小倩,刘亮,杨金水,李宝珍,袁红莉. 腐植酸. 2019(04)
[3]海南广藿香内生真菌分离鉴定及拮抗菌株筛选[J]. 易天凤,吴友根,于靖,张军锋,杨东梅. 热带作物学报. 2019(08)
[4]羊源芽孢纤维素降解菌的筛选与H-7菌株鉴定[J]. 高双喜,王萱,任菁,李妍,周国玺,郝庆红,李玘,郭云霞. 饲料工业. 2019(14)
[5]药用植物中具有抗真菌活性的内生真菌及其次级代谢产物的研究[J]. 武艳霜,陆悦,朱作斌,陈莹,李颖. 国外医药(抗生素分册). 2019(04)
[6]甘蔗内生菌分离鉴定及功能多样性研究[J]. 刘鲁峰,寸海春,何鹏飞,狄义宁,吴毅歆,何丽莲,李富生,何月秋. 热带作物学报. 2019(06)
[7]复合微生物菌剂对棉花生理特性及根际土壤微生物和化学性质的影响[J]. 宋以玲,于建,陈士更,肖承泽,李玉环,苏秀荣,丁方军. 土壤. 2019(03)
[8]根际微生物促进水稻氮利用的机制[J]. 王孝林,王二涛. 植物学报. 2019(03)
[9]基于高通量测序分析大豆和油菜根际微生物群落结构的差异[J]. 杨潇湘,张蕾,黄小琴,伍文宪,周西全,杜磊,黎怀忠,刘勇. 应用生态学报. 2019(07)
[10]桑树根际土壤微生物对间作和施氮的响应[J]. 许振羽,李学鹏,杜宇,许博涛,张秀丽. 应用生态学报. 2019(06)
博士论文
[1]饲用燕麦和小麦根际促生菌特性研究及其生物菌肥的初步研制[D]. 姚拓.甘肃农业大学 2002
硕士论文
[1]小麦赤霉病菌拮抗内生菌的分离筛选及抑菌活性研究[D]. 周苗苗.四川农业大学 2015
[2]短花针茅根际真菌的分离及其对小麦的促生作用[D]. 占瑞琪.内蒙古农业大学 2014
[3]不同植物根际促生菌对小麦、水稻、棉花的促生效果评价[D]. 李冰.安徽农业大学 2014
[4]铁皮石斛的内生细菌多态性与优势种群分析[D]. 俞婕.浙江理工大学 2013
[5]鹅观草属十二个物种的核型分析及硬秆仲彬草天然杂种研究[D]. 曹刚.四川农业大学 2006
本文编号：3575841
【文章来源】：西华师范大学四川省
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
实验技术路线
第二章材料与方法9第二章材料与方法2.1试验材料2.1.1样品采集材料“川草2号”老芒麦，“阿坝”垂穗披碱草和“川西”肃草来自四川省阿坝藏族羌族自治州红原县（如图2-1），由四川省草原科学研究院提供（海拔3472m）。样品采集方式采取连根拔起的方式。样品采集地点的海拔高度及经纬度如表2-1所示。图2-1材料采集点Figure.2-1Collectionpointsofplantmaterialsusedinthisstudy表2-1牧草样品采集地点Table.2-1Thelocationofthesamplingpoints牧草海拔/m经度/E纬度/N“川草2号”老芒麦3475102.5453°32.7775°“川西”肃草3470102.5454°32.7776°“阿坝”垂穗披碱草3472102.5456°32.7776°2.1.2实验主要试剂本实验主要采用蛋白胨、NaCl、琼脂粉、葡萄糖、酵母膏、牛肉膏、酪蛋白、胰蛋白胨、MgSO4·7H2O、麦芽浸膏、萘啶酮酸、放线菌酮、铬天青、FeCl3、Na2HPO4、KH2PO4、NH4Cl、哌嗪二乙磺酸等试剂。
块CAS检测培养基上点种菌饼，重复3次。分别置于30℃下恒温培养箱培养细菌3d；28℃下培养真菌7d。菌落周围穿线黄色晕圈为阳性，无黄色晕圈则为阴性，测定并记录水解圈大校2.2.5微生物抑菌效果采用平板对峙培养[123]。菌株培养及菌饼制备参照2.2.4.3），将菌饼（6mm）接种到中部接种了赤霉病病原菌菌饼(6mm)且培养了的PDA培养基（80mm）。进行对峙培养7d。以未加细菌的的接种了赤霉病原菌的培养基作为空白对照。对有抑菌效果的细菌测定其抑菌效果，抑菌效率=（对照组病原菌直径-实验组病原菌直径）/对照组病原菌直径。图2-2离体拮抗实验Figure.2-2Thediagramofantagonisticinvitro2.2.6目标菌株系统发育地位分析2.2.6.1细菌DNA提取取3mL培养菌液，10000xg离心2min。倒掉上清液，加入180μLTE缓冲液，18μL50mg/mL溶菌酶、5μLRNA酶（20mg/L），30℃水浴30min。5000xg离心5min，取10μL上清液。加入25mgGlassBeads和200μLBufferTL，涡旋5min，静置，取上清至1.5mL离心管。加25uL蛋白酶K，涡旋10s，瞬时离心。50℃水浴30min，每隔3min涡旋一次。10000xg离心2min，取上清至新离心管。加220uLBufferBL，混匀后于65℃水浴10min。加入220μL无水乙醇，涡旋20s。转移混合液于吸附柱，10000xg离心1min。将吸附柱放入另一收集管，加500μLBufferKB，10000xg离心1min，倒掉废液。加入650μLDNAWashBuffer，10000xg离心1min，倒掉废液。加450μLDNAWashBuffer，
【参考文献】：
期刊论文
[1]两株灰黄霉素产生菌的18S rDNA和ITS序列测定与分析[J]. 陆娇娇,畅瑛,李波,施碧红. 福建农业科技. 2019(10)
[2]施用腐植酸对植物根际和内生微生物的影响[J]. 王若楠,邱小倩,刘亮,杨金水,李宝珍,袁红莉. 腐植酸. 2019(04)
[3]海南广藿香内生真菌分离鉴定及拮抗菌株筛选[J]. 易天凤,吴友根,于靖,张军锋,杨东梅. 热带作物学报. 2019(08)
[4]羊源芽孢纤维素降解菌的筛选与H-7菌株鉴定[J]. 高双喜,王萱,任菁,李妍,周国玺,郝庆红,李玘,郭云霞. 饲料工业. 2019(14)
[5]药用植物中具有抗真菌活性的内生真菌及其次级代谢产物的研究[J]. 武艳霜,陆悦,朱作斌,陈莹,李颖. 国外医药(抗生素分册). 2019(04)
[6]甘蔗内生菌分离鉴定及功能多样性研究[J]. 刘鲁峰,寸海春,何鹏飞,狄义宁,吴毅歆,何丽莲,李富生,何月秋. 热带作物学报. 2019(06)
[7]复合微生物菌剂对棉花生理特性及根际土壤微生物和化学性质的影响[J]. 宋以玲,于建,陈士更,肖承泽,李玉环,苏秀荣,丁方军. 土壤. 2019(03)
[8]根际微生物促进水稻氮利用的机制[J]. 王孝林,王二涛. 植物学报. 2019(03)
[9]基于高通量测序分析大豆和油菜根际微生物群落结构的差异[J]. 杨潇湘,张蕾,黄小琴,伍文宪,周西全,杜磊,黎怀忠,刘勇. 应用生态学报. 2019(07)
[10]桑树根际土壤微生物对间作和施氮的响应[J]. 许振羽,李学鹏,杜宇,许博涛,张秀丽. 应用生态学报. 2019(06)
博士论文
[1]饲用燕麦和小麦根际促生菌特性研究及其生物菌肥的初步研制[D]. 姚拓.甘肃农业大学 2002
硕士论文
[1]小麦赤霉病菌拮抗内生菌的分离筛选及抑菌活性研究[D]. 周苗苗.四川农业大学 2015
[2]短花针茅根际真菌的分离及其对小麦的促生作用[D]. 占瑞琪.内蒙古农业大学 2014
[3]不同植物根际促生菌对小麦、水稻、棉花的促生效果评价[D]. 李冰.安徽农业大学 2014
[4]铁皮石斛的内生细菌多态性与优势种群分析[D]. 俞婕.浙江理工大学 2013
[5]鹅观草属十二个物种的核型分析及硬秆仲彬草天然杂种研究[D]. 曹刚.四川农业大学 2006
本文编号：3575841
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