球孢白僵菌的退化与DNA甲基化关系的初步研究
发布时间：2022-01-09 19:23
球孢白僵菌Beauveria bassiana （以下简称白僵菌）具有侵染力强、分布广以及流行快的特点；同时也具有易于培养,不污染环境等优势。因此,作为重要的昆虫病原真菌,白僵菌目前已广泛应用于农林业害虫生物防治。然而,在实验室培养和工业生产过程中,白僵菌也普遍存在着菌体退化问题。白僵菌菌体退化对于其发酵生产及杀虫效果有着直接的负面影响。研究表明,DNA甲基化修饰普遍存在于生物生命过程中。它通过调节基因表达使生物体在生长发育过程中产生出不同的性状。因此,揭示球孢白僵菌在培养过程中菌体退化与其DNA甲基化的关系,可以为今后进一步研究白僵菌表观遗传学以及DNA甲基化在菌体生长发育机制中的具体功能提供基础材料和科学依据,同时也将为白僵菌的规模化发酵与产业化奠定更加坚实的理论基础。本研究采用RACE技术克隆出球孢白僵菌DNA甲基转移酶编码基因Dim-2全序列,并通过生物信息学方法,对该蛋白进行了同源序列比对与系统发育树分析。同时,本研究还利用Realtime-PCR技术和HPLC技术对球孢白僵菌在生长发育过程中Dim-2基因的转录表达以及基因组DNA中5-甲基胞嘧啶的含量进行了检测,分析了球孢...
【文章来源】：安徽农业大学安徽省
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
球抱白僵菌B620d5菌株菌落形态
４．２球抱白僵菌总民ＮＡ的提纯??用ＴＲＩｚｏｌ法提取球抱白僵菌总ＲＮＡ，在１．０％的琼脂糖凝胶电泳后观察了大小分??别为２８ＳｒＲＮＡ、ＩＳＳｒＲＮＡ和５Ｓｒ艮ＮＡ的清晰条带（图４－２）。各条带亮度强弱趋势大??致为２８Ｓ＞１８Ｓ＞Ｗ。用核酸测定仪检测ＲＮＡ样品的ＯＤ２６０／ＯＤ２８０数值位于１．８？２．０??之间。由此可知，提取的总ＲＮＡ质量很好，没有发生降解，可Ｗ进行下一步实验。??Ｉ??■??图４－３球巧白僵菌总ＲＮＡ检测??Ｆｉｇ．４－３?Ｐｒｏｆｉｌｅ?ｏｆ?ＲＮＡ?ｅｘｔｒａＵｅｄ?行ｏｍ?公．６口抓／打内口??４．３球抱白僵菌。／Ｗ－２基因ｃＤＮＡ的３Ｖ５’ＲＡＣＥ末端片段扩增??用ＣＬＯＴＥＣＨ公司的ＳＭＡＲＴ？民ａｃｅ证ＮＡ?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｋｉｔ试剂构建球抱白僵??菌３＇－ＲＡＣＥ库和５＇－ＲＡＣＥ库，并通过两轮ＰＣ民反应得到相关片段（图４－３）。经克??隆转化，挑取阳性克隆进行菌落ＰＣＲ验证（图４－４，图４－５），并进行测序。??Ｍ??４００ｂｐ?—??２００ｂｐ???图４－４?ＰＣＲ产物的检测??Ｆｉｇ．４－４?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ??２３??
┚?＃?鳎?不?颍悖模危列蛄腥?さ钠唇蛹胺治觯崳?将ＲＡＣＥ克隆得到的球抱白僵菌化Ｗ－２基因３＇端和５’端序列，与ＧｅｎＢａｎｋ中已??知的该基因部分序列进行拼接，最终获得了全长４０２化Ｐ的ｃＤＮＡ序列（图４－６）。分析??表明，球抱白僵菌。加－２基因开放式闽读框由３４２９个核昔酸组成，编码了?１１４２个氨??基酸。５＇非翻译区（５＇－ＵＴＲ）与３＇非翻译区（３＇－ＵＴＲ）分别为２８３个核昔酸和３０３??个核昔酸。白僵菌０／Ｗ－２编码蛋白的分子量１２８ｋＤ，理论等电点６．１３。１１４２个氨基??酸中含强碱氨基酸１２７个（Ｋ，?Ｒ），强酸氨基酸１４３个（Ｄ，Ｅ），疏水氨基酸３６７个??（Ａ，Ｉ，Ｌ，Ｆ，Ｗ，?Ｖ），极性氨基酸３０１个（Ｎ，Ｃ，?Ｑ，?Ｓ，Ｔ，Ｙ），分别占总氨基??酸的?１１．１２％，１２．５２〇／〇，３２．１３〇／〇和?２６．３６％。??数据统计显示，球抱白僵菌甲基转移酶基因在密码子的第Ｓ位碱基的使用概率分??别为Ｃ：２９．５％，Ｔ：２３．８％，Ｇ：２６．３％，Ａ：２０．４％。表明该基因在密码子的使用上，没有??显示出明显的偏爱性。??４．５球抱白僵菌。／Ｗ－２基因编码蛋白的结构分析??白僵菌ＤＩＭ－２蛋白结构域分析显示
【参考文献】：
期刊论文
[1]真菌杀虫剂的研究现状与展望[J]. 解娇,刘霞,张正坤,徐文静,李启云. 吉林农业科学. 2012(01)
[2]表观遗传学研究进展[J]. 李光雷,喻树迅,范术丽,宋美珍,庞朝友. 生物技术通报. 2011(01)
[3]虫生真菌多样性及其在害虫生物防治中的作用[J]. 王联德,尤民生,黄建,周然. 江西农业大学学报. 2010(05)
[4]球孢白僵菌单孢子分离株在继代培养过程中菌落局变的遗传分析[J]. 徐金柱,黄勃,李增智. 菌物学报. 2010(02)
[5]DNA甲基转移酶分类、功能及其研究进展[J]. 王志刚,吴建新. 遗传. 2009(09)
[6]真菌表观遗传学研究进展[J]. 邱立友,余翠,戚元成,高玉千,申进文. 细胞生物学杂志. 2009(02)
[7]表观遗传学及其相关研究进展[J]. 白丽荣,时丽冉. 安徽农业科学. 2007(20)
[8]真菌杀虫剂的研究进展与展望[J]. 张俊华. 安徽农学通报. 2007(12)
[9]表观遗传学及其研究进展[J]. 郭新红,刘文彬. 安徽农业科学. 2007(01)
[10]白僵菌对害虫致病性的研究进展[J]. 李春香,张淑红. 唐山师范学院学报. 2005(05)
博士论文
[1]金龟子绿僵菌侵染东亚飞蝗特异表达基因筛选与体内定殖阶段cDNA文库构建[D]. 张传博.重庆大学 2009
本文编号：3579300
【文章来源】：安徽农业大学安徽省
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
球抱白僵菌B620d5菌株菌落形态
４．２球抱白僵菌总民ＮＡ的提纯??用ＴＲＩｚｏｌ法提取球抱白僵菌总ＲＮＡ，在１．０％的琼脂糖凝胶电泳后观察了大小分??别为２８ＳｒＲＮＡ、ＩＳＳｒＲＮＡ和５Ｓｒ艮ＮＡ的清晰条带（图４－２）。各条带亮度强弱趋势大??致为２８Ｓ＞１８Ｓ＞Ｗ。用核酸测定仪检测ＲＮＡ样品的ＯＤ２６０／ＯＤ２８０数值位于１．８？２．０??之间。由此可知，提取的总ＲＮＡ质量很好，没有发生降解，可Ｗ进行下一步实验。??Ｉ??■??图４－３球巧白僵菌总ＲＮＡ检测??Ｆｉｇ．４－３?Ｐｒｏｆｉｌｅ?ｏｆ?ＲＮＡ?ｅｘｔｒａＵｅｄ?行ｏｍ?公．６口抓／打内口??４．３球抱白僵菌。／Ｗ－２基因ｃＤＮＡ的３Ｖ５’ＲＡＣＥ末端片段扩增??用ＣＬＯＴＥＣＨ公司的ＳＭＡＲＴ？民ａｃｅ证ＮＡ?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｋｉｔ试剂构建球抱白僵??菌３＇－ＲＡＣＥ库和５＇－ＲＡＣＥ库，并通过两轮ＰＣ民反应得到相关片段（图４－３）。经克??隆转化，挑取阳性克隆进行菌落ＰＣＲ验证（图４－４，图４－５），并进行测序。??Ｍ??４００ｂｐ?—??２００ｂｐ???图４－４?ＰＣＲ产物的检测??Ｆｉｇ．４－４?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ??２３??
┚?＃?鳎?不?颍悖模危列蛄腥?さ钠唇蛹胺治觯崳?将ＲＡＣＥ克隆得到的球抱白僵菌化Ｗ－２基因３＇端和５’端序列，与ＧｅｎＢａｎｋ中已??知的该基因部分序列进行拼接，最终获得了全长４０２化Ｐ的ｃＤＮＡ序列（图４－６）。分析??表明，球抱白僵菌。加－２基因开放式闽读框由３４２９个核昔酸组成，编码了?１１４２个氨??基酸。５＇非翻译区（５＇－ＵＴＲ）与３＇非翻译区（３＇－ＵＴＲ）分别为２８３个核昔酸和３０３??个核昔酸。白僵菌０／Ｗ－２编码蛋白的分子量１２８ｋＤ，理论等电点６．１３。１１４２个氨基??酸中含强碱氨基酸１２７个（Ｋ，?Ｒ），强酸氨基酸１４３个（Ｄ，Ｅ），疏水氨基酸３６７个??（Ａ，Ｉ，Ｌ，Ｆ，Ｗ，?Ｖ），极性氨基酸３０１个（Ｎ，Ｃ，?Ｑ，?Ｓ，Ｔ，Ｙ），分别占总氨基??酸的?１１．１２％，１２．５２〇／〇，３２．１３〇／〇和?２６．３６％。??数据统计显示，球抱白僵菌甲基转移酶基因在密码子的第Ｓ位碱基的使用概率分??别为Ｃ：２９．５％，Ｔ：２３．８％，Ｇ：２６．３％，Ａ：２０．４％。表明该基因在密码子的使用上，没有??显示出明显的偏爱性。??４．５球抱白僵菌。／Ｗ－２基因编码蛋白的结构分析??白僵菌ＤＩＭ－２蛋白结构域分析显示
【参考文献】：
期刊论文
[1]真菌杀虫剂的研究现状与展望[J]. 解娇,刘霞,张正坤,徐文静,李启云. 吉林农业科学. 2012(01)
[2]表观遗传学研究进展[J]. 李光雷,喻树迅,范术丽,宋美珍,庞朝友. 生物技术通报. 2011(01)
[3]虫生真菌多样性及其在害虫生物防治中的作用[J]. 王联德,尤民生,黄建,周然. 江西农业大学学报. 2010(05)
[4]球孢白僵菌单孢子分离株在继代培养过程中菌落局变的遗传分析[J]. 徐金柱,黄勃,李增智. 菌物学报. 2010(02)
[5]DNA甲基转移酶分类、功能及其研究进展[J]. 王志刚,吴建新. 遗传. 2009(09)
[6]真菌表观遗传学研究进展[J]. 邱立友,余翠,戚元成,高玉千,申进文. 细胞生物学杂志. 2009(02)
[7]表观遗传学及其相关研究进展[J]. 白丽荣,时丽冉. 安徽农业科学. 2007(20)
[8]真菌杀虫剂的研究进展与展望[J]. 张俊华. 安徽农学通报. 2007(12)
[9]表观遗传学及其研究进展[J]. 郭新红,刘文彬. 安徽农业科学. 2007(01)
[10]白僵菌对害虫致病性的研究进展[J]. 李春香,张淑红. 唐山师范学院学报. 2005(05)
博士论文
[1]金龟子绿僵菌侵染东亚飞蝗特异表达基因筛选与体内定殖阶段cDNA文库构建[D]. 张传博.重庆大学 2009
本文编号：3579300
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/nykj/3579300.html
