亚洲玉米螟漆酶-1和漆酶-2的基因克

发布时间：2022-02-19 03:23

　　漆酶（Laccase）属于多铜氧化酶家族。昆虫漆酶催化儿茶酚类氧化生成醌类,使其与表皮中的蛋白质亲核侧链形成共价交联反应,或发生聚合使表皮脱水,从而坚固和稳定表皮结构,对昆虫的生长发育十分重要。因此,漆酶可作为潜在的杀虫剂靶标。目前,对昆虫漆酶全部组织和发育阶段的表达模式研究较少。本文以农药害虫亚洲玉米螟为研究对象,克隆了亚洲玉米螟漆酶-1和漆酶-2基因,并对它们的表达模式和生理功能进行了研究,主要研究内容如下：（1）通过PCR及RACE克隆获得亚洲玉米螟漆酶-1（OfLacl）的cDNA序列,其全长为3065bp,开放阅读框2403bp,编码800个氨基酸,理论分子量为90.6kDa,等电点为5.34。氨基酸序列比对结果表明：亚洲玉米螟OfLacl与家蚕BmMCO1和烟草天蛾MsLacl的一致性较高,达到70%以上；而与黑腹果蝇DmMCO1、冈比亚按蚊AgMCO1和赤拟谷盗TcLacl的一致性较低,在50%以下。运用半定量PCR分析了OfLacl在不同组织中的基因转录水平,利用实时荧光定量PCR研究了OfLacl在不同发育时期和蜕皮激素诱导下的转录水平。结果表明,OfLacl在中肠和... 

【文章来源】：大连理工大学辽宁省211工程院校985工程院校教育部直属院校

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
1 文献综述
    1.1 漆酶的基本特性
        1.1.1 漆酶
        1.1.2 漆酶的结构
        1.1.3 漆酶的催化机制
        1.1.4 漆酶的应用
    1.2 昆虫漆酶的研究进展
        1.2.1 昆虫漆酶
        1.2.2 昆虫漆酶的分类
        1.2.3 昆虫漆酶的理化性质
        1.2.4 昆虫漆酶的功能
    1.3 本论文的选题依据和研究内容
        1.3.1 选题依据
        1.3.2 研究内容
2 亚洲玉米螟漆酶-1基因的克隆和表达分析
    2.1 引言
    2.2 实验材料与方法
        2.2.1 供试昆虫
        2.2.2 试剂和试剂盒
        2.2.3 总RNA提取及cDNA合成
        2.2.4 亚洲玉米螟漆酶-1基因的克隆
        2.2.5 生物信息学分析
        2.2.6 组织表达特性检测
        2.2.7 发育表达特性检测
        2.2.8 注射蜕皮激素后OfLac1的转录水平分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 亚洲玉米螟白蛹总RNA的提取
        2.3.2 亚洲玉米螟漆酶-1(OfLac1)基因的克隆
        2.3.3 洲玉米螟漆酶-1(OfLac1)基因的生物信息学分析
        2.3.4 OfLac1在不同组织中的表达模式
        2.3.5 OfLac1在不同生长发育时期的表达模式
        2.3.6 注射蜕皮激素(20E)后OfLacl的表达分析
    2.4 分析讨论
    2.5 小结
3 亚洲玉米螟漆酶-2基因的克隆、表达分析及生理功能研究
    3.1 引言
    3.2 实验材料与方法
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 亚洲玉米螟漆酶-2基因的克隆
        3.2.3 亚洲玉米螟OfLac2基因的生物信息学分析
        3.2.4 组织表达特性检测
        3.2.5 发育表达特性检测
        3.2.6 注射蜕皮激素后OfLac2的表达分析
        3.2.7 亚洲玉米螟OfLac2 RNA干扰后表型分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 亚洲玉米螟漆酶-2(OfLac2)基因的克隆
        3.3.2 OfLac2的生物信息学分析
        3.3.3 OfLac2在不同组织中的表达模式
        3.3.4 OfLac2在不同生长发育时期的表达模式
        3.3.5 注射蜕皮激素后OfLac2的表达分析
        3.3.6 亚洲玉米螟OfLac2 RNA干扰后表型分析
    3.4 分析讨论
    3.5 小结
4 亚洲玉米螟漆酶-2的重组表达
    4.1 引言
    4.2 实验材料与方法
        4.2.1 实验材料
        4.2.2 重组质粒的构建
        4.2.3 重组质粒转化毕赤酵母GS115
        4.2.4 重组毕赤酵母的诱导表达
        4.2.5 重组OfLac2的分离纯化
        4.2.6 SDS-PAGE及Western Blot
    4.3 实验结果
        4.3.1 重组质粒的构建
        4.3.2 OfLac2在毕赤酵母中的表达
    4.4 分析讨论
    4.5 小结
结论
参考文献
附录A OfLac1的cDNA序列与编码的氨基酸序列
附录B OfLac2的cDNA序列与编码的氨基酸序列
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]漆酶的结构与催化反应机理[J]. 靳蓉,张飞龙.  中国生漆. 2012(04)
[2]漆酶空间结构、反应机理及应用[J]. 葛宏华,武赟,肖亚中.  生物工程学报. 2011(02)
[3]亚洲玉米螟的种群动态及危害[J]. 余金咏,于泉林,周印富,陈东芳.  河北科技师范学院学报. 2010(03)
[4]漆酶的分子生物学研究及其应用[J]. 宋安东,王艳婕,王松江,戚元成,吴坤.  信阳师范学院学报(自然科学版). 2004(02)
[5]漆酶的性质、功能、催化机理和应用[J]. 王国栋,陈晓亚.  植物学通报. 2003(04)
[6]漆酶的最新研究进展[J]. 缪静,姜竹茂.  烟台师范学院学报(自然科学版). 2001(02)
[7]漆酶催化活性中心结构及应用的研究进展[J]. 李光日,余惠生,付时雨,秦文娟.  纤维素科学与技术. 2000(02)
[8]漆酶的结构、功能及其应用[J]. 季立才,胡培植.  氨基酸和生物资源. 1996(01)

博士论文
[1]亚洲玉米螟几丁质合酶基因表达与生理功能研究[D]. 屈明博.大连理工大学 2012
[2]鸡枞菌与淡色库蚊及家蝇中漆酶编码基因的克隆与表达[D]. 潘程远.浙江大学 2009

硕士论文
[1]飞蝗漆酶基因mRNA表达及功能研究[D]. 余志涛.山西大学 2012
[2]漆酶基因在毕赤酵母中高效表达[D]. 李剑凤.安徽大学 2006
[3]亚洲玉米螟不同地理种群生态适应性和种群遗传结构的RAPD分析[D]. 刘宁.中国农业科学院 2003



本文编号：3632116