枯草芽孢杆菌EDR4突变体库的构建及拮抗相关基因的检测

发布时间：2022-02-26 08:11

　　为筛选枯草芽孢杆菌EDR4拮抗相关基因,利用转座子TnYLB-1构建了该菌株的插入突变体库。通过对种子液OD₆₀₀值、转接培养液一继续培养OD₆₀₀值及转接培养液二后的孵育时间3个因素设计正交试验,转化过程中加入pMarA质粒的不同量及质粒与感受态细胞共培养的不同时间研究了两种因素对转化效率的影响,确定了pMarA对EDR4的转化体系。通过50℃高温诱导培养产生了EDR4的插入突变体,挑取单菌落2 756个,构建了EDR4的插入突变体库,随机挑选14株突变体经PCR检测转座子TnYLB-1序列,发现转座子已成功插入到EDR4基因组中,进一步通过Southern杂交验证,发现转座子TnYLB-1主要以单拷贝形式随机插入,也有部分多拷贝插入。以油菜菌核病菌为靶标菌,从640株突变菌株中筛选出两株抑菌活性明显下降的突变株,分别为EDR4-T1272和EDR4-T1473,通过生物学特性观察发现转座子的插入未对EDR4生物学特性产生影响,通过PCR验证转座子序列发现转座子可以在突变体中稳定遗传。经过反向PCR扩增出EDR4-T1272、EDR4-T1... 

【文章来源】：中国植物病理学会2014年学术年会论文集中国植物病理学会会议论文集

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本文编号：3644275