转基因产品核酸成分标准物质研制关键技术研究
发布时间：2022-04-23 13:13
标准物质是分析测试的“砝码”,为检测结果的可比性、有效性和可溯源性提供重要保障。在转基因检测领域,标准物质对于转基因食品、饲料中转基因成分及其含量的准确分析至关重要,而标准物质研究在此领域目前处于起步阶段,定值、制备及测量不确定度评定等方面亟待提高与完善。本文以孟山都公司开发的转基因大豆MON87751为研究对象,围绕标准物质研究领域的现存问题,开展如下三个方面研究:1.建立了标准物质的双重微滴式数字PCR（droplet digital PCR,ddPCR）的绝对定量方法。目前,MON87751大豆在国际上主要采用实时荧光定量PCR（qPCR）进行定量测量,尚无采用ddPCR进行绝对定量分析的报道,且国内也没有该转化体的检测方法发布。针对此问题,本研究基于ddPCR核酸绝对定量技术平台,建立了转基因大豆MON87751双重ddPCR方法。研究内容涵盖了ddPCR的特异性、重复性、线性动力学范围、检出限和定量限,以此确定了反应体系和反应条件。以10组10%的MON87751大豆样品作为分析对象,结果表明重复性的相对标准偏差（RSD）在0.10%～0.71%之间。当模板DNA浓度低至4 ...
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 绪论
1.1 国内外转基因作物研究现状
1.1.1 国外转基因作物的研究与种植现状
1.1.2 我国转基因作物的研究与种植现状
1.2 转基因作物及其产品的安全管理
1.2.1 转基因的安全性问题
1.2.2 国内外转基因生物及其产品的管理要求
1.3 转基因作物检测方法
1.3.1 蛋白质水平上的检测技术
1.3.2 核酸水平上的检测技术
1.4 转基因检测标准物质
1.4.1 转基因产品标准物质的定义
1.4.2 转基因产品标准物质的分类
1.4.3 转基因产品标准物质的制备工艺
1.4.4 转基因产品标准物质的研究进展
1.5 本课题研究内容
1.6 本课题研究目的及意义
第2章 微滴式数字PCR定量方法的建立
2.1 实验材料、试剂及仪器
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验试剂
2.1.3 实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 DNA提取方法
2.2.2 反应体系和反应条件
2.2.3 退火温度
2.2.4 检测方法的特异性
2.2.5 检测方法的重复性
2.2.6 检测方法的线性动力学范围
2.2.7 检测方法的定量检测限
2.3 结果与讨论
2.3.1 引物探针的优化
2.3.2 退火温度的优化
2.3.3 方法的特异性
2.3.4 方法的重复性
2.3.5 方法的线性动力学范围
2.3.6 方法的检测极限和定量极限
2.4 本章小结
第3章 MON87751基体标准物质的研制
3.1 实验材料、试剂及仪器
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验试剂
3.1.3 实验仪器
3.2 实验方法
3.2.1 制备策略
3.2.2 原材料鉴定
3.2.3 原材料的处理
3.3 实验结果与讨论
3.3.1 原材料的鉴定
3.3.2 原材料的处理
3.3.3 均匀性初检
3.4 本章小结
第4章 MON87751基体标准物质不确定度的评估
4.1 实验方法
4.1.1 均匀性检测分析
4.1.2 稳定性检测分析
4.2 结果与讨论
4.2.1 均匀性检验
4.2.2 稳定性检验
4.2.3 量值分析
4.2.4 拷贝数定值分析
4.3 本章小结
第5章 结论和展望
5.1 结论
5.2 展望
参考文献
攻读硕士学位期间发表的论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]全球转基因作物商业化的发展态势与启示[J]. 徐若梅. 安徽农业大学学报(社会科学版). 2018(04)
[2]转基因作物研发现状及展望[J]. 孙卓婧,张安红,叶纪明. 中国农业科技导报. 2018(07)
[3]2017年全球生物技术/转基因作物商业化发展态势[J]. International Service for the Acquisition of Agri-biotech Applications;. 中国生物工程杂志. 2018(06)
[4]蓖麻种子蛋白质双向电泳优化体系的建立[J]. 常如慧,张冬丽,杨丽凤,赵永,姜桐桐,孙洪玲,隋久香,狄建军,陈宇杰,黄凤兰. 分子植物育种. 2018(17)
[5]转基因水稻品系‘Bt汕优63’微滴式数字PCR定量检测方法的建立[J]. 陈雪娇,宗凯,孙娟娟,李云飞,郑海松,姚剑. 中国农学通报. 2018(06)
[6]微滴式数字PCR定量检测转基因玉米品系VCO-01981-5[J]. 张佳玲,潘广,章桂明,程颖慧,向才玉,陈枝楠,谢忠稳,凌杏园. 食品科学. 2017(12)
[7]转基因作物发展及应用概述[J]. 沈平,武玉花,梁晋刚,卢新,章秋艳,王颢潜,刘鹏程. 中国生物工程杂志. 2017(01)
[8]数字聚合酶链式反应技术在食品安全检测领域的研究应用进展[J]. 刘津,刘二龙,谢力,李志勇,相大鹏,高东微. 食品科学. 2016(17)
[9]我国转基因主粮作物产业化进展、存在问题及对策[J]. 杜建中,郝曜山,王亦学,张欢欢,孙毅,石红卫. 生物技术进展. 2016(03)
[10]转基因大豆质粒DNA标准物质的研制[J]. 梁文,许丽,李兰英,李妍,闻艳丽,徐勤,任淑贞,刘刚. 实验室研究与探索. 2016(05)
博士论文
[1]转基因产品检测标准物质研究[D]. 张丽.中国农业科学院 2012
[2]转基因植物及产品核酸检测新技术研究[D]. 郭金超.上海交通大学 2011
硕士论文
[1]七种转基因水稻质粒DNA标准物质研制[D]. 郑兰.上海交通大学 2017
[2]重组酶介导的等温扩增技术在转基因检测中的应用[D]. 徐潮.中国农业科学院 2014
[3]转基因产品快速、高通量检测方法研究[D]. 张苗.上海交通大学 2013
[4]转基因作物检测阳性质粒分子的研制及应用[D]. 李俊.中南民族大学 2012
[5]利用转基因技术培育抗病番茄新品系[D]. 李玮.山东师范大学 2010
本文编号：3647247
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【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 绪论
1.1 国内外转基因作物研究现状
1.1.1 国外转基因作物的研究与种植现状
1.1.2 我国转基因作物的研究与种植现状
1.2 转基因作物及其产品的安全管理
1.2.1 转基因的安全性问题
1.2.2 国内外转基因生物及其产品的管理要求
1.3 转基因作物检测方法
1.3.1 蛋白质水平上的检测技术
1.3.2 核酸水平上的检测技术
1.4 转基因检测标准物质
1.4.1 转基因产品标准物质的定义
1.4.2 转基因产品标准物质的分类
1.4.3 转基因产品标准物质的制备工艺
1.4.4 转基因产品标准物质的研究进展
1.5 本课题研究内容
1.6 本课题研究目的及意义
第2章 微滴式数字PCR定量方法的建立
2.1 实验材料、试剂及仪器
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验试剂
2.1.3 实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 DNA提取方法
2.2.2 反应体系和反应条件
2.2.3 退火温度
2.2.4 检测方法的特异性
2.2.5 检测方法的重复性
2.2.6 检测方法的线性动力学范围
2.2.7 检测方法的定量检测限
2.3 结果与讨论
2.3.1 引物探针的优化
2.3.2 退火温度的优化
2.3.3 方法的特异性
2.3.4 方法的重复性
2.3.5 方法的线性动力学范围
2.3.6 方法的检测极限和定量极限
2.4 本章小结
第3章 MON87751基体标准物质的研制
3.1 实验材料、试剂及仪器
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验试剂
3.1.3 实验仪器
3.2 实验方法
3.2.1 制备策略
3.2.2 原材料鉴定
3.2.3 原材料的处理
3.3 实验结果与讨论
3.3.1 原材料的鉴定
3.3.2 原材料的处理
3.3.3 均匀性初检
3.4 本章小结
第4章 MON87751基体标准物质不确定度的评估
4.1 实验方法
4.1.1 均匀性检测分析
4.1.2 稳定性检测分析
4.2 结果与讨论
4.2.1 均匀性检验
4.2.2 稳定性检验
4.2.3 量值分析
4.2.4 拷贝数定值分析
4.3 本章小结
第5章 结论和展望
5.1 结论
5.2 展望
参考文献
攻读硕士学位期间发表的论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]全球转基因作物商业化的发展态势与启示[J]. 徐若梅. 安徽农业大学学报(社会科学版). 2018(04)
[2]转基因作物研发现状及展望[J]. 孙卓婧,张安红,叶纪明. 中国农业科技导报. 2018(07)
[3]2017年全球生物技术/转基因作物商业化发展态势[J]. International Service for the Acquisition of Agri-biotech Applications;. 中国生物工程杂志. 2018(06)
[4]蓖麻种子蛋白质双向电泳优化体系的建立[J]. 常如慧,张冬丽,杨丽凤,赵永,姜桐桐,孙洪玲,隋久香,狄建军,陈宇杰,黄凤兰. 分子植物育种. 2018(17)
[5]转基因水稻品系‘Bt汕优63’微滴式数字PCR定量检测方法的建立[J]. 陈雪娇,宗凯,孙娟娟,李云飞,郑海松,姚剑. 中国农学通报. 2018(06)
[6]微滴式数字PCR定量检测转基因玉米品系VCO-01981-5[J]. 张佳玲,潘广,章桂明,程颖慧,向才玉,陈枝楠,谢忠稳,凌杏园. 食品科学. 2017(12)
[7]转基因作物发展及应用概述[J]. 沈平,武玉花,梁晋刚,卢新,章秋艳,王颢潜,刘鹏程. 中国生物工程杂志. 2017(01)
[8]数字聚合酶链式反应技术在食品安全检测领域的研究应用进展[J]. 刘津,刘二龙,谢力,李志勇,相大鹏,高东微. 食品科学. 2016(17)
[9]我国转基因主粮作物产业化进展、存在问题及对策[J]. 杜建中,郝曜山,王亦学,张欢欢,孙毅,石红卫. 生物技术进展. 2016(03)
[10]转基因大豆质粒DNA标准物质的研制[J]. 梁文,许丽,李兰英,李妍,闻艳丽,徐勤,任淑贞,刘刚. 实验室研究与探索. 2016(05)
博士论文
[1]转基因产品检测标准物质研究[D]. 张丽.中国农业科学院 2012
[2]转基因植物及产品核酸检测新技术研究[D]. 郭金超.上海交通大学 2011
硕士论文
[1]七种转基因水稻质粒DNA标准物质研制[D]. 郑兰.上海交通大学 2017
[2]重组酶介导的等温扩增技术在转基因检测中的应用[D]. 徐潮.中国农业科学院 2014
[3]转基因产品快速、高通量检测方法研究[D]. 张苗.上海交通大学 2013
[4]转基因作物检测阳性质粒分子的研制及应用[D]. 李俊.中南民族大学 2012
[5]利用转基因技术培育抗病番茄新品系[D]. 李玮.山东师范大学 2010
本文编号：3647247
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