转基因产品快速检测技术的研究
发布时间：2022-09-17 12:29
随着转基因技术的快速发展，转基因作物的种类和数量也急剧增加。由于越来越多的外源插入元件被转入的作物中，直接检测某种插入元件或特异性转化事件变得费时、费力并且成本较高。所以国外许多转基因产品检测机构逐步建立转基因产品的快速筛选技术，并与矩阵方法相结合大大提高了转基因产品的检测效率，这种快速筛选技术在我国还没有相关的报道。由于不同国家对转基因产品的管理存在差异，所以这种快速筛选检测技术的方法以及所选用的筛选元件也不尽相同。本研究依据我国进出口转基因产品的外源基因、调控元件、标记基因和T-DNA通用序列信息建立了适合国内的转基因产品快速检测的方法。主要研究如下： 1、pCaMV35S和tNOS在转基因生物及其制品检测中的适用性研究：pCaMV35S和tNOS是转基因产品筛选检测中的首选参数，日常检测中发现，个别标准中的引物存在非特异性扩增和灵敏度差的问题。本实验收集了国内外标准中常用的扩增片段分别为195bp、165bp、147bp、123bp的pCaMV35S和扩增片段分别为180bp、172bp、165bp、118bp的tNOS各四对引物，应用普通PCR和实时荧光（Real-tim...
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 全球转基因作物的发展现状和发展趋势
1.1.1 全球转基因作物发展现状
1.1.2 全球转基因作物发展趋势
1.2 转基因产品的检测方法
1.2.1 基于 DNA 序列的检测方法
1.2.2 基于表达产物蛋白质的检测方法
1.2.3 转基因产品检测数据库
1.2.4 未授权转基因产品的检测
1.3 转基因产品的安全评价与管理
1.3.1 主要国家对转基因产品的安全管理
1.3.2 主要国国际组织对转基因产品的安全管理
1.4 本论文的研究目的、意义和主要研究内容
1.4.1 研究目的和意义
1.4.2 研究内容
第二章 PCAMV35S 和 TNOS 在转基因生物及其制品检测中的适用性研究
2.1 实验材料
2.1.1 材料
2.1.2 PCAMV35S 和 TNOS 基因扩增引物各 4 对
2.1.3 试剂
2.1.4 主要仪器与设备
2.2 方法
2.2.1 样品的加工制备
2.2.2 DNA 的提取
2.2.3 PCR 扩增
2.3 结果与分析
2.3.1 PCAMV35S 和 TNOS 引物的普通 PCR 特异性扩增
2.3.2 PCAMV35S 和 TNOS 引物的 REAL-TIME PCR 特异性扩增
2.3.3 PCAMV35S 和 TNOS 引物的灵敏度实验
2.3.4 PCAMV35S 和 TNOS 引物的 REAL-TIME PCR 灵敏度实验
2.3.5 加工品中 PCAMV35S 和 TNOS 引物的普通 PCR 测试
2.3.6 加工品中 PCAMV35S 和 TNOS 引物的 REAL-TIME PCR 测试
2.4 讨论
2.4.1 评价方法的选择
2.4.2 高质量引物对筛选检测的重要性
2.5 结论
第三章 基于 SYBR GREEN I 同时检测转基因产品 16 种元件的快速检测技术的研究
3.1 实验材料
3.1.1 材料
3.1.2 试剂
3.1.3 主要仪器设备
3.2 实验方法
3.2.1 DNA 提取
3.2.2 基因组 DNA 浓度和纯度的测定
3.2.3 转基因产品检测元件序列的选择
3.2.4 实时荧光 PCR 反应体系和反应条件
3.2.5 特异性扩增
3.2.6 灵敏度实验
3.3 结果与分析
3.3.1 特异性扩增结果
3.3.2 不同浓度 DNA 模板拷贝数计算
3.3.3 灵敏度实验结果
3.4 讨论
第四章 基于转录组测序技术对转基因水稻中 BT 基因和其他非预期基因表达的研究
4.1 实验方法
4.1.1 水稻培养
4.1.2 水稻 RNA 提取
4.1.3 RNA 提取与纯化
4.1.4 CDNA 合成
4.1.5 CDNA 测序
4.1.6 差异表达基因分析
4.2 结果分析
4.2.1 CDNA 测序结果分析
4.2.2 测序饱和度分析
4.2.3 BT 基因表达量分析
4.2.4 样品的差异表达分析
4.2.5 差异表达基因的 GO（GENE ONTOLOGY）功能分析
4.2.6 GO 功能显著性富集分析
4.2.7 差异表达基因的 KEGG PATHWAY 分析
4.2.8 差异表达基因的 KEGG PATHWAY 显著性富集分析
4.3 讨论
全文结论
参考文献
个人简历
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]2012年全球生物技术/转基因作物商业化发展态势[J]. Clive James. 中国生物工程杂志. 2013(02)
[2]巢式PCR和SYBR Green Ⅰ实时PCR检测转基因大豆方法的研究[J]. 彭新凯,宋涛平,谭舸,陈娜,胡朝晖,杨丽霞. 中国农学通报. 2012(15)
[3]转基因作物检测新技术研究进展[J]. 苏锐,熊嫣,庆宏,邓玉林. 化学通报. 2012(02)
[4]转Cry1Ab基因水稻分子特征及其特异性PCR检测方法[J]. 汪小福,陈笑芸,张小明,周育,张焕春,缪青梅,方敬,徐俊锋. 遗传. 2012(02)
[5]利用SYBR Green实时定量PCR法检测转基因植物外源基因的拷贝数[J]. 裘劼人,许颖,喻富根. 安徽农业科学. 2011(21)
[6]转基因产品检测方法研究进展[J]. 王荣谈,张建中,刘冬儿,张大兵,杨立桃. 上海农业学报. 2010(01)
[7]转基因植物检测技术的研究进展[J]. 郭斌,祁洋,尉亚辉. 中国生物工程杂志. 2010(02)
[8]转基因技术应用及转基因产品安全性研究进展[J]. 姜先荣,杨杰,周衍茂. 合肥师范学院学报. 2008(03)
[9]国内外转基因作物产业化的比较[J]. 王旭静,贾士荣. 生物工程学报. 2008(04)
[10]GoPipe:批量序列的Gene Ontology注释和统计分析（英文）[J]. 陈作舟,薛成海,朱晟,周丰丰,XUEFENG BRUCE LING,刘国平,陈良标. 生物化学与生物物理进展. 2005(02)
博士论文
[1]适合转基因抗虫水稻和棉花PCR检测标准质粒的构建及试用[D]. 苏长青.中国农业科学院 2011
硕士论文
[1]转Cry1Ab基因水稻侧翼序列的扩增和转化体特异事件检测[D]. 张焕春.沈阳师范大学 2012
本文编号：3679224
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 全球转基因作物的发展现状和发展趋势
1.1.1 全球转基因作物发展现状
1.1.2 全球转基因作物发展趋势
1.2 转基因产品的检测方法
1.2.1 基于 DNA 序列的检测方法
1.2.2 基于表达产物蛋白质的检测方法
1.2.3 转基因产品检测数据库
1.2.4 未授权转基因产品的检测
1.3 转基因产品的安全评价与管理
1.3.1 主要国家对转基因产品的安全管理
1.3.2 主要国国际组织对转基因产品的安全管理
1.4 本论文的研究目的、意义和主要研究内容
1.4.1 研究目的和意义
1.4.2 研究内容
第二章 PCAMV35S 和 TNOS 在转基因生物及其制品检测中的适用性研究
2.1 实验材料
2.1.1 材料
2.1.2 PCAMV35S 和 TNOS 基因扩增引物各 4 对
2.1.3 试剂
2.1.4 主要仪器与设备
2.2 方法
2.2.1 样品的加工制备
2.2.2 DNA 的提取
2.2.3 PCR 扩增
2.3 结果与分析
2.3.1 PCAMV35S 和 TNOS 引物的普通 PCR 特异性扩增
2.3.2 PCAMV35S 和 TNOS 引物的 REAL-TIME PCR 特异性扩增
2.3.3 PCAMV35S 和 TNOS 引物的灵敏度实验
2.3.4 PCAMV35S 和 TNOS 引物的 REAL-TIME PCR 灵敏度实验
2.3.5 加工品中 PCAMV35S 和 TNOS 引物的普通 PCR 测试
2.3.6 加工品中 PCAMV35S 和 TNOS 引物的 REAL-TIME PCR 测试
2.4 讨论
2.4.1 评价方法的选择
2.4.2 高质量引物对筛选检测的重要性
2.5 结论
第三章 基于 SYBR GREEN I 同时检测转基因产品 16 种元件的快速检测技术的研究
3.1 实验材料
3.1.1 材料
3.1.2 试剂
3.1.3 主要仪器设备
3.2 实验方法
3.2.1 DNA 提取
3.2.2 基因组 DNA 浓度和纯度的测定
3.2.3 转基因产品检测元件序列的选择
3.2.4 实时荧光 PCR 反应体系和反应条件
3.2.5 特异性扩增
3.2.6 灵敏度实验
3.3 结果与分析
3.3.1 特异性扩增结果
3.3.2 不同浓度 DNA 模板拷贝数计算
3.3.3 灵敏度实验结果
3.4 讨论
第四章 基于转录组测序技术对转基因水稻中 BT 基因和其他非预期基因表达的研究
4.1 实验方法
4.1.1 水稻培养
4.1.2 水稻 RNA 提取
4.1.3 RNA 提取与纯化
4.1.4 CDNA 合成
4.1.5 CDNA 测序
4.1.6 差异表达基因分析
4.2 结果分析
4.2.1 CDNA 测序结果分析
4.2.2 测序饱和度分析
4.2.3 BT 基因表达量分析
4.2.4 样品的差异表达分析
4.2.5 差异表达基因的 GO（GENE ONTOLOGY）功能分析
4.2.6 GO 功能显著性富集分析
4.2.7 差异表达基因的 KEGG PATHWAY 分析
4.2.8 差异表达基因的 KEGG PATHWAY 显著性富集分析
4.3 讨论
全文结论
参考文献
个人简历
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]2012年全球生物技术/转基因作物商业化发展态势[J]. Clive James. 中国生物工程杂志. 2013(02)
[2]巢式PCR和SYBR Green Ⅰ实时PCR检测转基因大豆方法的研究[J]. 彭新凯,宋涛平,谭舸,陈娜,胡朝晖,杨丽霞. 中国农学通报. 2012(15)
[3]转基因作物检测新技术研究进展[J]. 苏锐,熊嫣,庆宏,邓玉林. 化学通报. 2012(02)
[4]转Cry1Ab基因水稻分子特征及其特异性PCR检测方法[J]. 汪小福,陈笑芸,张小明,周育,张焕春,缪青梅,方敬,徐俊锋. 遗传. 2012(02)
[5]利用SYBR Green实时定量PCR法检测转基因植物外源基因的拷贝数[J]. 裘劼人,许颖,喻富根. 安徽农业科学. 2011(21)
[6]转基因产品检测方法研究进展[J]. 王荣谈,张建中,刘冬儿,张大兵,杨立桃. 上海农业学报. 2010(01)
[7]转基因植物检测技术的研究进展[J]. 郭斌,祁洋,尉亚辉. 中国生物工程杂志. 2010(02)
[8]转基因技术应用及转基因产品安全性研究进展[J]. 姜先荣,杨杰,周衍茂. 合肥师范学院学报. 2008(03)
[9]国内外转基因作物产业化的比较[J]. 王旭静,贾士荣. 生物工程学报. 2008(04)
[10]GoPipe:批量序列的Gene Ontology注释和统计分析（英文）[J]. 陈作舟,薛成海,朱晟,周丰丰,XUEFENG BRUCE LING,刘国平,陈良标. 生物化学与生物物理进展. 2005(02)
博士论文
[1]适合转基因抗虫水稻和棉花PCR检测标准质粒的构建及试用[D]. 苏长青.中国农业科学院 2011
硕士论文
[1]转Cry1Ab基因水稻侧翼序列的扩增和转化体特异事件检测[D]. 张焕春.沈阳师范大学 2012
本文编号：3679224
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