植物病原密执安棒状杆菌CPA分子检测方法研究

发布时间：2022-11-05 09:28

　　根据寄主植物的不同将密执安棒状杆菌分为五个亚种：番茄细菌性溃疡病菌（Cmm）,侵染引起番茄溃疡病；马铃薯环腐病菌（Cms）,侵染引起马铃薯环腐病；苜蓿细菌性萎蔫病菌（Cmi）,侵染引起苜蓿细菌性萎蔫病；玉米萎蔫病菌（Cmn）,侵染引起玉米内州萎蔫病；小麦细菌性花叶病菌（Cmt）,侵染引起小麦细菌性花叶病。这些病害常造成巨大的经济损失,其中番茄细菌性溃疡病菌、苜蓿细菌性萎蔫病菌、玉米内州萎蔫病菌为我国进境检疫性有害生物。目前,针对密执安棒状杆菌植物病菌还没有快速可行的检测方法,严重影响了口岸检疫的效率。因此,针对该种植物病菌建立快速、灵敏的检测方法对防止病害的发生、传播与流行具有重要的意义。 本文针对密执安棒状杆菌（Clavibacter michiganensis）种内五个病菌建立了交叉引物恒温扩增（Cross Priming Amplification, CPA）检测体系,并通过结合可视性胶体金检测试纸条,建立了一种具有简单、快捷、灵敏特异、不需要昂贵仪器等优点的新型检测方法,可用于细菌性植物病害的快速筛查和检测。 针对密执安棒状杆菌（Clavibacter michig... 

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 前言
    1.1 密执安棒状杆菌植物病菌概述
    1.2 主要检测及鉴定方法
        1.2.1 血清学检测技术
        1.2.2 分子生物学检测技术
        1.2.3 免疫捕捉PCR
        1.2.4 实时荧光PCR技术
        1.2.5 Rep-PCR分析法
        1.2.6 核酸分子杂交技术
        1.2.7 基因芯片技术
        1.2.8 其它检测分类技术
    1.3 恒温扩增技术
        1.3.1 交叉引物恒温扩增技术原理
        1.3.2 CPA扩增检测技术应用前景
    1.4 密执安棒状杆菌种内五个亚种介绍
        1.4.1 番茄细菌性溃疡病菌
        1.4.2 玉米内州萎蔫病菌
        1.4.3 马铃薯环腐病菌
        1.4.4 苜蓿细菌性萎蔫病菌
        1.4.5 小麦细菌性花叶病菌
    1.5 本研究目的及意义
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 参试菌株
        2.1.2 植物种子及材料
        2.1.3 培养基和主要试剂
        2.1.4 主要仪器
    2.2 方法
        2.2.1 密执安棒状杆菌种植物病菌CPA法检测体系的建立
        2.2.2 CPA法特异性检测试验
        2.2.3 CPA法灵敏度检测试验
        2.2.4 CPA检测接种密执安棒状杆菌的植株
        2.2.5 实时荧光定量PCR灵敏度检测实验
        2.2.6 普通PCR灵敏度检测实验
        2.2.7 普通PCR结果判定
        2.2.8 CPA法检测种子样品
3 结果与分析
    3.1 CPA法检测密执安棒状杆菌(Cl.michiganensis)植物病菌
    3.2 CPA检测接种密执安棒状杆菌的植株
    3.3 普通PCR灵敏度检测试验
    3.4 实时荧光PCR灵敏度检测试验
    3.5 CPA法检测带菌种子样品
4 全文结论与讨论
    4.1 结论
        4.1.1 CPA法检测番茄细菌性溃疡病菌(Cmm)
        4.1.2 CPA法检测玉米内州萎蔫病菌(Cmn)
        4.1.3 CPA法检测苜蓿细菌性萎蔫病菌(Cmi)
        4.1.4 CPA法检测小麦细菌性花叶病菌(Cmt)
        4.1.5 CPA法检测马铃薯环腐病菌(Cms)
        4.1.6 CPA法检测种子样品
    4.2 讨论
        4.2.1 CPA法检测密执安棒状杆菌植物病菌
        4.2.2 CPA法检测带菌种子样品
        4.2.3 CPA法在植物病菌检测领域应用前景
参考文献
缩略词表
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]番茄溃疡病菌检测技术研究进展[J]. 徐霞,牟海青,田茜,廖晓兰.  安徽农业科学. 2013(29)
[2]Nested-PCR检测种传番茄细菌性溃疡病菌[J]. 闵现华,刘箐,韩跃武,文朝慧,王军平,刘姝彤,刘雅莉,宋蕤,施颖波.  西北农业学报. 2011(07)
[3]核酸试纸条在检测转EPSPS基因作物中的应用[J]. 汪琳,罗英,周琦,赖平安,张向东,柏亚铎.  生物技术通讯. 2011(02)
[4]种传番茄溃疡病菌直接PCR和免疫捕捉PCR检测方法之比较[J]. 闵现华,韩跃武,刘箐,王军平,刘雅莉,文朝慧,刘姝彤,宋蕤,施颖波.  植物检疫. 2010(04)
[5]CPA恒温扩增技术在口岸蚊媒携带登革病毒检测中的应用[J]. 宋凌浩,符丽媛,赵志田,狄彪,尤其敏.  西南林学院学报. 2010(S1)
[6]核酸恒温扩增技术的原理及其应用[J]. 陈云芳,詹国辉,高渊.  西南林学院学报. 2010(S1)
[7]超分枝滚环扩增技术结合试纸法检测食品中多种转基因组分[J]. 郝振明,赵鑫,吴孝槐.  食品科学. 2010(06)
[8]PCR技术快速检测玉米内州萎蔫病菌研究[J]. 周琦,陈寔,高文娜,汪万春,李建光,陈洪俊,李健强.  植物检疫. 2010(02)
[9]交叉引物扩增技术快速检测结核分枝杆菌[J]. 周静宇,徐生梅.  临床检验杂志. 2010(01)
[10]转基因玉米转化体特异性寡核苷酸芯片检测方法的研制[J]. 路兴波,武海斌,王敏,李宝笃,杨崇良,孙红炜.  作物学报. 2009(08)

硕士论文
[1]双重PCR和竞争性PCR检测马铃薯环腐病菌和黑胫病菌技术体系建立[D]. 韩广涛.河北农业大学 2011
[2]玉米检疫性种传细菌免疫学及基因芯片检测方法的研究[D]. 吴晓巍.河北农业大学 2010



本文编号：3702349