核盘菌存活因子基因SsSvf1功能研究
发布时间：2022-12-10 16:14
核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum（Lib.）de Bary）是一种世界性分布的重要死体营养型植物病原真菌,可侵染400多种植物,对农产品的品质和产量造成巨大损失。病原菌在侵染过程中需抵抗或耐受由于活性氧爆发而造成的寄主氧化压力,但到目前为止,对核盘菌抵抗氧化胁迫的机制知之甚少。本研究前期发现核盘菌基因SsSvf1（SS1G01919）在病原菌侵染寄主初期表达量显著升高,该基因编码一个酿酒酵母（Saccharomyes cerevisiae）存活因子1（Svf1,Survive factor 1）的同源蛋白,SVF1能帮助酿酒酵母应对氧化胁迫并维持细胞活性。为揭示核盘菌抵御氧化压力及致病机理,本研究对核盘菌SsSvf1基因的功能进行了深入研究。利用生物信息学技术对SsSvf1基因进行分析,结果表明SsSvf1基因编码区全长1146bp,编码381个氨基酸,保守结构域分析表明其C端为存活因子1结构域（Survival factor 1,Svf1）,通过构建系统进化树发现SsSvf1和灰霉（Botrytis cinerea）XP0
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 文献综述
1 核盘菌的研究进展
1.1 核盘菌及其危害
1.2 菌核病的防治
1.3 植物病原菌与寄主植物的互作
1.4 核盘菌的致病机理
1.5 SVF1 基因研究进展
2 本研究的目的与意义
第2章 核盘菌SsSvf1 基因基本特性研究
1 试验材料
1.1 供试菌株
1.2 试验相关培养基
1.3 试验试剂及仪器
2 试验方法
2.1 核盘菌SsSvf1 基因结构预测
2.2 核盘菌SsSvf1 基因在生长发育时期的表达
2.3 核盘菌SsSvf1 基因在氧化胁迫下的表达
2.4 核盘菌SsSvf1 基因在致病过程中的表达
3 结果与分析
3.1 SsSvf1 蛋白结构分析
3.2 核盘菌SsSvf1 基因在生长发育阶段的表达
3.3 核盘菌SsSvf1 基因在氧化胁迫下的表达
3.4 核盘菌SsSvf1 基因在致病过程中的表达
4 讨论
第3章 核盘菌Ss Svf1 基因功能研究
1 材料
1.1 材料
2 方法
2.1 SsSvf1 基因沉默载体的构建
2.2 核盘菌原生质体的制备
2.3 PEG介导核盘菌原生质体转化
2.4 SsSvf1 沉默转化子的筛选
2.5 SsSvf1 基因沉默转化子菌丝、菌落形态及菌核形成
2.6 SsSvf1 基因沉默转化子抵抗高渗胁迫能力分析
2.7 SsSvf1 基因沉默转化子在氧化胁迫下的敏感性测定
2.8 SsSvf1 基因沉默转化子的致病力测定
2.9 SsSvf1 基因沉默转化子侵染垫形成观察
2.10 SsSvf1 基因沉默转化子分泌草酸定量分析
2.11 SsSvf1 基因沉默转化子细胞壁完整性测定
2.12 SsSvf1 基因沉默转化子ROS染色
2.13 抑制植物ROS产生对SsSvf1 基因沉默转化子致病力的影响
3 结果与分析
3.1 SsSvf1 基因沉默转化子的获得
3.2 SsSvf1 基因沉默转化子菌丝、菌落形态及菌核形成数量分析
3.3 SsSvf1 基因沉默转化子在氧化胁迫下的敏感性测定
3.4 SsSvf1 基因沉默转化子致病力测定
3.5 SsSvf1 基因沉默转化子侵染垫形成
3.6 SsSvf1 基因沉默转化子草酸形成测定
3.7 SsSvf1 基因沉默转化子细胞壁完整性测定
3.8 SsSvf1 基因沉默转化子抵抗高渗能力分析
3.9 SsSvf1 基因沉默转化子产生ROS比较
3.10 抑制植物ROS产生后SsSvf1 基因沉默转化子的致病力测定
4 讨论
第4章 SsSvf1 调控核盘菌致病性机理研究
1 材料
1.1 主要材料
1.2 仪器
2 方法
2.1 SsSvf1 融合FLAG标签表达载体的构建
2.2 SsSvf1 融合FLAG蛋白转化子的获取
2.3 SsSvf1-FLAG融合蛋白转化子的RNA水平表达鉴定
2.4 SsSvf1-FLAG融合蛋白转化子菌株的总蛋白的提取
2.5 SDS-PAGE电泳
2.6 SsSvf1-FLAG融合蛋白转化子的蛋白水平表达鉴定
2.7 CO-IP获取互作蛋白
2.8 酵母双杂交验证SsSvf1 互作蛋白
3 结果与分析
3.1 RT-PCR验证SsSvf1 融合FLAG标签蛋白的表达
3.2 Western blot分析SsSvf1 融合FLAG标签蛋白在蛋白水平的表达
3.3 CO-IP获取互作蛋白
3.4 酵母双杂交验证SsSvf1 互作蛋白
4 讨论
第5章 结论与展望
1 结论
2 展望
参考文献
附录A 本论文中所用术语缩写与中英文对照
致谢
硕士期间发表论文情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]菌核菌及油菜菌核病相关研究进展[J]. 赵丹丹,臧新,田保明,顾建伟. 河南农业科学. 2010(02)
[2]油菜菌核病的发生规律与防治对策[J]. 尹维平. 农技服务. 2008(01)
[3]大豆菌核病的防治适期与防治指标[J]. 潘洪玉,席景会,刘伟成,王千,李宏宇. 植物保护学报. 2001(04)
[4]油菜菌核病发生规律、影响因子和油菜损失率测定[J]. 冯兰萍,张谷丰,张夕林,薛智华,王东华. 植物保护. 1999(01)
[5]油菜菌核病危害损失的初步研究[J]. 檀根甲,倪守延,季近,杨文翠,方煜文,赵青,汪顺生. 生物数学学报. 1994(03)
[6]油菜菌核病为害损失的研究[J]. 常彭阳. 江西植保. 1991(S1)
[7]油菜菌核病（Sclerotinia sclerotiorum）在我国的寄主范围及生态特性的調查研究[J]. 楊新美. 植物病理学报. 1959(02)
博士论文
[1]乳酸菌抗氧胁迫及有氧生长的研究[D]. 付龙云.山东大学 2013
硕士论文
[1]生防菌盾壳霉LaeA基因的克隆与功能研究[D]. 郝艳飞.华中农业大学 2015
[2]草酸在核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）与寄主植物互作中的生物学作用[D]. 李双胜.浙江大学 2013
[3]核盘菌致病机制的关键因子分析[D]. 黄娟.华中农业大学 2006
本文编号：3717080
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 文献综述
1 核盘菌的研究进展
1.1 核盘菌及其危害
1.2 菌核病的防治
1.3 植物病原菌与寄主植物的互作
1.4 核盘菌的致病机理
1.5 SVF1 基因研究进展
2 本研究的目的与意义
第2章 核盘菌SsSvf1 基因基本特性研究
1 试验材料
1.1 供试菌株
1.2 试验相关培养基
1.3 试验试剂及仪器
2 试验方法
2.1 核盘菌SsSvf1 基因结构预测
2.2 核盘菌SsSvf1 基因在生长发育时期的表达
2.3 核盘菌SsSvf1 基因在氧化胁迫下的表达
2.4 核盘菌SsSvf1 基因在致病过程中的表达
3 结果与分析
3.1 SsSvf1 蛋白结构分析
3.2 核盘菌SsSvf1 基因在生长发育阶段的表达
3.3 核盘菌SsSvf1 基因在氧化胁迫下的表达
3.4 核盘菌SsSvf1 基因在致病过程中的表达
4 讨论
第3章 核盘菌Ss Svf1 基因功能研究
1 材料
1.1 材料
2 方法
2.1 SsSvf1 基因沉默载体的构建
2.2 核盘菌原生质体的制备
2.3 PEG介导核盘菌原生质体转化
2.4 SsSvf1 沉默转化子的筛选
2.5 SsSvf1 基因沉默转化子菌丝、菌落形态及菌核形成
2.6 SsSvf1 基因沉默转化子抵抗高渗胁迫能力分析
2.7 SsSvf1 基因沉默转化子在氧化胁迫下的敏感性测定
2.8 SsSvf1 基因沉默转化子的致病力测定
2.9 SsSvf1 基因沉默转化子侵染垫形成观察
2.10 SsSvf1 基因沉默转化子分泌草酸定量分析
2.11 SsSvf1 基因沉默转化子细胞壁完整性测定
2.12 SsSvf1 基因沉默转化子ROS染色
2.13 抑制植物ROS产生对SsSvf1 基因沉默转化子致病力的影响
3 结果与分析
3.1 SsSvf1 基因沉默转化子的获得
3.2 SsSvf1 基因沉默转化子菌丝、菌落形态及菌核形成数量分析
3.3 SsSvf1 基因沉默转化子在氧化胁迫下的敏感性测定
3.4 SsSvf1 基因沉默转化子致病力测定
3.5 SsSvf1 基因沉默转化子侵染垫形成
3.6 SsSvf1 基因沉默转化子草酸形成测定
3.7 SsSvf1 基因沉默转化子细胞壁完整性测定
3.8 SsSvf1 基因沉默转化子抵抗高渗能力分析
3.9 SsSvf1 基因沉默转化子产生ROS比较
3.10 抑制植物ROS产生后SsSvf1 基因沉默转化子的致病力测定
4 讨论
第4章 SsSvf1 调控核盘菌致病性机理研究
1 材料
1.1 主要材料
1.2 仪器
2 方法
2.1 SsSvf1 融合FLAG标签表达载体的构建
2.2 SsSvf1 融合FLAG蛋白转化子的获取
2.3 SsSvf1-FLAG融合蛋白转化子的RNA水平表达鉴定
2.4 SsSvf1-FLAG融合蛋白转化子菌株的总蛋白的提取
2.5 SDS-PAGE电泳
2.6 SsSvf1-FLAG融合蛋白转化子的蛋白水平表达鉴定
2.7 CO-IP获取互作蛋白
2.8 酵母双杂交验证SsSvf1 互作蛋白
3 结果与分析
3.1 RT-PCR验证SsSvf1 融合FLAG标签蛋白的表达
3.2 Western blot分析SsSvf1 融合FLAG标签蛋白在蛋白水平的表达
3.3 CO-IP获取互作蛋白
3.4 酵母双杂交验证SsSvf1 互作蛋白
4 讨论
第5章 结论与展望
1 结论
2 展望
参考文献
附录A 本论文中所用术语缩写与中英文对照
致谢
硕士期间发表论文情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]菌核菌及油菜菌核病相关研究进展[J]. 赵丹丹,臧新,田保明,顾建伟. 河南农业科学. 2010(02)
[2]油菜菌核病的发生规律与防治对策[J]. 尹维平. 农技服务. 2008(01)
[3]大豆菌核病的防治适期与防治指标[J]. 潘洪玉,席景会,刘伟成,王千,李宏宇. 植物保护学报. 2001(04)
[4]油菜菌核病发生规律、影响因子和油菜损失率测定[J]. 冯兰萍,张谷丰,张夕林,薛智华,王东华. 植物保护. 1999(01)
[5]油菜菌核病危害损失的初步研究[J]. 檀根甲,倪守延,季近,杨文翠,方煜文,赵青,汪顺生. 生物数学学报. 1994(03)
[6]油菜菌核病为害损失的研究[J]. 常彭阳. 江西植保. 1991(S1)
[7]油菜菌核病（Sclerotinia sclerotiorum）在我国的寄主范围及生态特性的調查研究[J]. 楊新美. 植物病理学报. 1959(02)
博士论文
[1]乳酸菌抗氧胁迫及有氧生长的研究[D]. 付龙云.山东大学 2013
硕士论文
[1]生防菌盾壳霉LaeA基因的克隆与功能研究[D]. 郝艳飞.华中农业大学 2015
[2]草酸在核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）与寄主植物互作中的生物学作用[D]. 李双胜.浙江大学 2013
[3]核盘菌致病机制的关键因子分析[D]. 黄娟.华中农业大学 2006
本文编号：3717080
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/nykj/3717080.html
