甜菜夜蛾2个气味结合蛋白基因的克

发布时间：2023-02-10 21:24

　　在长期的进化过程中,昆虫形成了复杂而敏锐的嗅觉系统,藉此感受环境中大量的化学信息,并做出相应的生理和行为反应,如取食、交配和产卵。大量研究证实,气味结合蛋白(Odorant binding protein,OBP)是高浓度存在于昆虫触角感器腔内的一类水溶性小分子蛋白,起到将外来脂溶性气味物质结合并运输到感受神经膜上的气味受体的作用。甜菜夜蛾Spodoptera exigua属鳞翅目、夜蛾科,是一种重要的多食性农业害虫,对其OBP的研究,不仅有助于深入了解甜菜夜蛾的嗅觉机制,而且可以为开发基于嗅觉调控的新型防治技术提供靶标,具有非常重要的意义。本研究通过对甜菜夜蛾转录组数据的分析,结合分子生物学技术,从甜菜夜蛾中克隆了2个气味结合蛋白OBP基因,测定了它们的组织及时间表达动态,然后利用体外表达实验、荧光竞争结合实验及行为学实验对其生理功能进行了探索。主要结果如下：1甜菜夜蛾2个OBP基因的克隆及序列分析通过转录组数据分析获得了2个OBP基因的cDNA片段,然后利用RACE技术,进一步克隆了其cDNA全长序列。其中一个基因命名为SexiOBP13,GenBank登录号KC817145；另一...

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1 昆虫嗅觉感受机制
    2 昆虫气味结合蛋白的概述
        2.1 昆虫气味结合蛋白的特征与结构
        2.2 昆虫气味结合蛋白的分类和分布
        2.3 昆虫气味结合蛋白的生理功能研究
    3 甜菜夜蛾的相关研究进展
        3.1 甜菜夜蛾的为害特点
        3.2 甜菜夜蛾的防治策略
        3.3 甜菜夜蛾气味结合蛋白的研究
    4 本研究的目的及意义
第二章 甜菜夜蛾气味结合蛋白的基因克隆和序列分析
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 供试昆虫
        1.2 主要试剂及仪器设备
        1.3 昆虫总RNA的提取
        1.4 cDNA模板的合成
        1.5 PCR引物设计、反应体系及程序
        1.6 PCR产物纯化、克隆、测序和序列分析
    2 结果与分析
        2.1 甜菜夜蛾RNA的提取
        2.2 cDNA片段的克隆
        2.3 测序结果分析
        2.4 甜菜夜蛾气味结合蛋白全长克隆与分析
    3 讨论
第三章 甜菜夜蛾两个气味结合蛋白的组织分布
    摘要
    1 材料和方法
        1.1 供试昆虫及组织收集
        1.2 主要试剂和仪器设备
        1.3 甜菜夜蛾不同组织、龄期、日龄总RNA提取
        1.4 cDNA模板的合成
        1.5 PCR引物设计
        1.6 实时定量PCR反应
    2 结果与分析
        2.1 甜菜夜蛾成虫及幼虫组织中气味结合蛋白的表达量比较
        2.2 SexiOBP7在甜菜夜蛾成虫及SexiOBP13在幼虫中的时动态表达
    3 讨论
第四章 甜菜夜蛾两个气味结合蛋白的原核表达及配体结合能力分析
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 质粒和菌株
        1.2 主要试剂和仪器设备
        1.3 昆虫总RNA的提取
        1.4 cDNA第一链的合成
        1.5 引物设计及PCR扩增
        1.6 PCR产物纯化、连接、转化和测序
        1.7 原核表达载体的构建
        1.8 蛋白SexiOBP的纯化
        1.9 表达蛋白的荧光测定及配体结合实验
    2 结果与分析
        2.1 原核表达载体的构建和鉴定
        2.2 重组质粒在大肠杆菌中表达及可溶性分析
        2.3 1-NPN与甜菜夜蛾气味结合蛋白结合曲线的测定
        2.4 SexiOBP7和SexiOBP13与气味物质结合能力的测定
    3 讨论
第五章 甜菜夜蛾幼虫对性信息素主组分的趋向反应
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 供试昆虫
        1.2 主要试剂及仪器设备
        1.3 气味物质的配制
        1.4 选择性实验
    2. 结果与分析
    3. 讨论
全文总结
参考文献
攻读硕士学位期间学术论文的发表情况
致谢



本文编号：3739939