GSTe1和GSTe10参与桔小实蝇卵巢发育的生理功能

发布时间：2023-04-01 01:24

　　桔小实蝇Bactrocera dorsalis(Hendel)隶属于双翅目Diptera,实蝇科Tephritidae,果实蝇属Bactrocera,是重要的世界性检疫害虫。桔小实蝇繁殖能力强,成虫产卵产于果实内部,幼虫孵化后取食果实,造成烂果及落果,严重影响果实的食用价值和经济价值。卵巢作为昆虫雌性生殖系统的重要组织,与昆虫的繁衍有着直接关系,相关研究一直是昆虫发育领域的研究热点,是探索防控害虫新方法的重要切入点。谷胱甘肽硫转移酶(Glutathione S-transferases,GSTs)是一类重要的超基因家族,目前对昆虫GSTs研究主要集中在参与解毒代谢介导抗性形成方面,对其它生理功能的研究较少。本学位论文基于桔小实蝇基因组和转录组数据,鉴定桔小实蝇GST基因;利用组织表达谱筛选到两个在卵巢高表达的GST(BdGSTe1和BdGSTe10);克隆获得了它们的开放阅读框序列并进行序列分析;通过构建p ET-28a(+)原核表达载体,表达了BdGSTe1和BdGSTe10的重组蛋白;利用RT-qPCR技术解析了BdGSTe1和BdGSTe10的时空表达模式;最后通过RNAi技术探...

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1 谷胱甘肽硫转移酶
        1.1 谷胱甘肽硫转移酶分类及命名
        1.2 谷胱甘肽硫转移酶的功能
        1.3 谷胱甘肽硫转移酶在昆虫学中的研究现状
    2 昆虫卵巢发育的研究进展
        2.1 昆虫卵巢简介
        2.2 昆虫卵子的发生
        2.3 卵巢发育过程中卵黄形成
        2.4 昆虫卵巢发育及其影响因子
    3 学位论文的研究意义
第二章 桔小实蝇BdGSTe1和BdGSTe10的筛选和鉴定
    1 材料和方法
        1.1 供试昆虫
        1.2 主要试剂和仪器
        1.3 桔小实蝇GSTs鉴定及系统发育分析
        1.4 样品收集及总RNA提取
        1.5 基因组DNA去除及cDNA合成
        1.6 荧光定量PCR
    2 结果与分析
        2.1 桔小实蝇GSTs鉴定及系统发育分析
        2.2 桔小实蝇BdGSTs在第5日龄成虫不同组织的表达模式
    3 讨论
第三章 桔小实蝇BdGSTe1和BdGSTe10的克隆及原核表达
    1 材料和方法
        1.1 供试昆虫
        1.2 主要试剂和仪器
        1.3 BdGSTe10的克隆及测序
        1.4 序列比对及分析
        1.5 表达产物构建
        1.6 原核诱导表达
        1.7 重组蛋白纯化
    2 结果与分析
        2.1 桔小实蝇BdGSTe1和BdGSTe10序列分析
        2.2 桔小实蝇BdGSTe1-pET-28a (+)和BdGSTe10-pET-28a (+)表达载体构建
        2.3 纯化后的重组蛋白SDS-PAGE电泳及活性检测
    3 讨论
第四章 桔小实蝇BdGSTe1和BdGSTe10时空表达模式解析
    1 材料和方法
        1.1 供试昆虫
        1.2 主要试剂和仪器
        1.3 样品准备
        1.4 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)
        1.5 数据处理与分析
    2 结果与分析
        2.1 BdGSTe1和BdGSTe10在桔小实蝇不同发育阶段的表达模式
        2.2 BdGSTe1和BdGSTe10在桔小实蝇胚胎发育期的表达模式
        2.3 BdGSTe1和BdGSTe10在桔小实蝇不同日龄雌成虫的表达模式
    3 讨论
第五章 BdGSTe1和BdGSTe10参与桔小实蝇卵巢发育
    1 材料和方法
        1.1 供试昆虫
        1.2 主要试剂和仪器
        1.3 RNAi
        1.4 表型观察
        1.5 数据处理与分析
    2 结果与分析
        2.1 沉默效率检测
        2.2 干扰BdGSTe1和BdGSTe10对桔小实蝇卵巢发育的影响
        2.3 干扰BdGSTe1和BdGSTe10对桔小实蝇产卵量的影响
        2.4 干扰BdGSTe1和BdGSTe10后卵巢活性氧水平变化
    3 讨论
第六章 主要结果及研究展望
    1 主要结果
    2 研究展望
参考文献
在读期间发表论文
致谢



本文编号：3776177