土壤中粘细菌的分离鉴定及其生物活性研究
发布时间：2023-04-02 15:11
粘细菌是变形菌纲下δ分支的一类单细胞革兰阴性细菌,营养细胞杆状,具有复杂的多细胞行为,可以滑行运动,在营养贫瘠的条件下,细胞开始聚集形成多细胞团,并逐渐形成含抗逆性强的粘孢子的子实体。粘细菌广泛分布于富含腐殖质的土壤表层、腐败的树木枯枝落叶、草食类动物的粪便等环境中,其次级代谢产物结构各异、种类多样、活性高效。粘细菌已经被认为是“活性微生物天然产物小工厂”,是筛选天然产物的重要资源,具有药物先导分子的研究开发价值。本文采用灭活大肠杆菌和滤纸片诱导子实体法,从我国广东、山东、及江西、湖南、湖北、山西等省市采集的32份土壤样品中进行粘细菌的分离筛选,对分离的粘细菌进行子实体和菌落形态观察、生理生化特征检测及分子生物学鉴定,以确定这些菌株的分类地位。本次研究共分离纯化出40株细菌。根据粘细菌菌落、子实体、营养细胞及粘孢子等形态学观察结果,初步鉴定这些粘细菌菌株分属于粘细菌的4个属,分别为:粘球菌属10株;珊瑚球菌属9株;侏囊菌属11株和纤维堆囊菌属10株。采用灭活大肠杆菌和滤纸片诱导子实体法纯化得到8株粘细菌,并对这8株粘细菌进行了深层鉴定与后续研究。经16S rDNA序列同源性分析可知,分...
【文章页数】：113 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
1.1 粘细菌的概述
1.1.1 粘细菌的发现
1.1.2 粘细菌的研究发展
1.1.3 粘细菌的最新研究进展
1.2 粘细菌的特征
1.2.1 粘细菌的生境
1.2.2 运动特性:
1.2.3 粘细菌的生物学特性
1.3 粘细菌的分离纯化
1.3.1 粘细菌分离与纯化障碍
1.3.2 克服障碍的方法
1.3.3 粘细菌的分类鉴定
1.4 粘细菌活性次级代谢产物的特点及在各领域的应用研究
1.4.1 粘细菌的次级代谢产物的特点
1.4.2 粘细菌生物活性物质作用机制
1.4.3 粘细菌活性次级代谢产物分离方法及手段
1.4.4 粘细菌生物活性物质的研究重点
1.5 当前研究存在的问题
1.6 本研究目的和意义
1.7 本研究思路
第二章 土壤中粘细菌的筛选分离
2.1 实验材料
2.1.1 样品的采集
2.1.2 培养基
2.1.3 仪器、材料与试剂
2.2 方法
2.2.1 样品预处理
2.2.2 土样中粘细菌的分离(子实体诱导方法)
2.3 结果
2.3.1 粘细菌的筛选分离
2.3.2 粘细菌的纯化
2.3.3 粘细菌的摇瓶发酵验纯
2.3.4 粘细菌营养细胞形态及粘孢子形态
2.4 讨论
第三章 粘细菌的鉴定及生物活性
3.1 实验材料
3.1.1 实验菌株
3.1.2 供试细胞株
3.1.3 供试昆虫
3.1.4 培养基
3.2 实验仪器及试剂
3.2.1 仪器
3.2.2 材料及试剂:
3.2.3 其他染色试剂
3.3 实验方法及步骤
3.3.1 生理生化特征
3.3.2 分离菌株生物活性检测
3.4 结果
3.4.1 粘细菌的形态特征:
3.4.2 粘细菌的生理生化特征
3.4.3 粘细菌的分子鉴定
3.4.4 粘细菌的生物活性检测
3.5 讨论
第四章 菌株S22的抗肿瘤活性物质分离
4.1 实验材料
4.1.1 实验菌株
4.1.2 供试细胞株
4.1.3 培养基
4.1.4 细胞培养基
4.1.5 试剂及器材
4.2 实验方法
4.1.1 菌株S22的活化
4.1.2 菌株S22的大规模发酵培养
4.1.3 菌株S22发酵上清液的粗分离
4.3 实验结果
4.3.1 菌株S22的在WAX板上的菌落及子实体形态
4.3.2 菌株S22的在MD1液体培养基中的生长形态
4.3.3 大孢珊瑚球菌细胞形态变化过程
4.3.4 S22发酵上清液的活性检测过程
4.3.5 菌株S22发酵上清液的经不同处理后的抗肿瘤活性
4.3.6 菌株S22活性物质的提取与分离:
4.4 讨论
第五章 小结与展望
参考文献
附件: 8株粘细菌16S rDNA测序图
缩略语表
论文发表情况
项目资助情况
致谢
本文编号：3779446
【文章页数】：113 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
1.1 粘细菌的概述
1.1.1 粘细菌的发现
1.1.2 粘细菌的研究发展
1.1.3 粘细菌的最新研究进展
1.2 粘细菌的特征
1.2.1 粘细菌的生境
1.2.2 运动特性:
1.2.3 粘细菌的生物学特性
1.3 粘细菌的分离纯化
1.3.1 粘细菌分离与纯化障碍
1.3.2 克服障碍的方法
1.3.3 粘细菌的分类鉴定
1.4 粘细菌活性次级代谢产物的特点及在各领域的应用研究
1.4.1 粘细菌的次级代谢产物的特点
1.4.2 粘细菌生物活性物质作用机制
1.4.3 粘细菌活性次级代谢产物分离方法及手段
1.4.4 粘细菌生物活性物质的研究重点
1.5 当前研究存在的问题
1.6 本研究目的和意义
1.7 本研究思路
第二章 土壤中粘细菌的筛选分离
2.1 实验材料
2.1.1 样品的采集
2.1.2 培养基
2.1.3 仪器、材料与试剂
2.2 方法
2.2.1 样品预处理
2.2.2 土样中粘细菌的分离(子实体诱导方法)
2.3 结果
2.3.1 粘细菌的筛选分离
2.3.2 粘细菌的纯化
2.3.3 粘细菌的摇瓶发酵验纯
2.3.4 粘细菌营养细胞形态及粘孢子形态
2.4 讨论
第三章 粘细菌的鉴定及生物活性
3.1 实验材料
3.1.1 实验菌株
3.1.2 供试细胞株
3.1.3 供试昆虫
3.1.4 培养基
3.2 实验仪器及试剂
3.2.1 仪器
3.2.2 材料及试剂:
3.2.3 其他染色试剂
3.3 实验方法及步骤
3.3.1 生理生化特征
3.3.2 分离菌株生物活性检测
3.4 结果
3.4.1 粘细菌的形态特征:
3.4.2 粘细菌的生理生化特征
3.4.3 粘细菌的分子鉴定
3.4.4 粘细菌的生物活性检测
3.5 讨论
第四章 菌株S22的抗肿瘤活性物质分离
4.1 实验材料
4.1.1 实验菌株
4.1.2 供试细胞株
4.1.3 培养基
4.1.4 细胞培养基
4.1.5 试剂及器材
4.2 实验方法
4.1.1 菌株S22的活化
4.1.2 菌株S22的大规模发酵培养
4.1.3 菌株S22发酵上清液的粗分离
4.3 实验结果
4.3.1 菌株S22的在WAX板上的菌落及子实体形态
4.3.2 菌株S22的在MD1液体培养基中的生长形态
4.3.3 大孢珊瑚球菌细胞形态变化过程
4.3.4 S22发酵上清液的活性检测过程
4.3.5 菌株S22发酵上清液的经不同处理后的抗肿瘤活性
4.3.6 菌株S22活性物质的提取与分离:
4.4 讨论
第五章 小结与展望
参考文献
附件: 8株粘细菌16S rDNA测序图
缩略语表
论文发表情况
项目资助情况
致谢
本文编号：3779446
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/nykj/3779446.html
