舞毒蛾PBPs的免疫定位及与配体互作的关键位点

发布时间：2023-04-28 18:33

　　舞毒蛾Lymantria dispar L是一种危害性很大的世界性农林害虫。亚洲型舞毒蛾(Asian gypsy moth)由于雌成虫能飞行扩散、危害寄主更加广泛的特点,已成为国际检疫性害虫,对国际贸易产生很大影响。昆虫的嗅觉在行为中发挥重要作用,目前舞毒蛾的嗅觉传导机制尚未完全清楚,为了更好地研究舞毒蛾的监测和防控技术,了解舞毒蛾触角化学感器及信息素结合蛋白(Pheromone binding proteins, PBPs)的功能,我们利用扫描和透射电子显微镜系统观察了触角化学感器的分布与超微结构；采用免疫组织化学方法研究了LdisPBP1和LdisPBP2在触角化学感器中的表达定位；通过生物信息学技术预钡LdisPBPl和LdisPBP2的三维结构模型与配体互作的可能位点；并在此基础上通过定点突变和荧光竞争结合试验验证了LdisPBP1和LdisPBP2与配体互作的关键位点。主要研究结果如下： 1、舞毒蛾触角化学感器的分布与超微结构 通过扫描电镜和透射电镜的观察,明确了舞毒蛾雌、雄蛾触角上化学感器的分布与超微结构。结果表明雌雄两性成虫的触角上均有4种类型的化学感器,分别为毛形感器、...

【文章页数】：99 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
英文縮略词简表
名词解释
摘要
ABSTRACT
1 引言
    1.1 舞毒蛾的概况及重要检疫意义
        1.1.1 舞毒蛾的分类
        1.1.2 舞毒蛾的寄主范围
        1.1.3 舞毒蛾的地理分布
        1.1.4 舞毒蛾的经济重要性
        1.1.5 舞毒蛾的检疫重要性
    1.2 昆虫的化学通讯
        1.2.1 昆虫的化学通讯信号
        1.2.2 昆虫的化学感器
        1.2.3 昆虫的化学——电信号传导
    1.3 昆虫参与化学通讯的主要蛋白
        1.3.1 气味分子结合蛋白(OBPs)
        1.3.2 嗅觉受体蛋白(ORs)
        1.3.3 化学感受蛋白(CSPs)
        1.3.4 舞毒蛾化学通讯相关蛋白的研究进展
    1.4 研究目的与意义
    1.5 技术路线
2 舞毒蛾触角化学感器的分布与超微结构
    2.1 材料与方法
        2.1.1 实验材料与仪器
        2.1.2 实验方法
    2.2 结果与分析
        2.2.1 锥形感器
        2.2.2 毛形感器
        2.2.3 腔锥形感器
        2.2.4 刺形感器
    2.3 讨论
3 舞毒蛾PBPs在触角化学感器中的免疫定位
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验材料与仪器
        3.1.2 实验方法
    3.2 结果与分析
        3.2.1 LdisPBP1在雌、雄蛾触角中的免疫定位
        3.2.2 LdisPBP2在雌、雄蛾触角中的免疫定位
    3.3 讨论
4 舞毒PBPs三维结构模型与配体互作位点的预测
    4.1 实验方法
        4.1.1 生物信息学软件
        4.1.2 LdisPBP1、LdisPBP2的模拟定点突变
    4.2 结果与分析
        4.2.1 基于模拟定点突变的互作位点预测
        4.2.2 基于模拟分子对接的互作位点预测
    4.3 讨论
5 舞毒蛾PBPs与配体互作的关键位点验证
    5.1 材料与方法
        5.1.1 实验材料与仪器
        5.1.2 LdisPBPs基因的克隆和载体连接
        5.1.3 LdisPBPs基因的定点突变和克隆
        5.1.4 LdisPBPs点突变蛋白的原核表达与纯化
        5.1.5 LdisPBPs野生型蛋白与突变体蛋白的圆二色光谱
        5.1.6 突变体蛋白与配体化合物的荧光结合实验
    5.2 结果与分析
        5.2.1 LdisPBPs基因的克隆和点突变
        5.2.2 LdisPBPs重组突变体蛋白的原核表达纯化
        5.2.3 LdisPBPs突变体蛋白的结构鉴定
        5.2.4 LdisPBPs突变体蛋白与荧光探针1-NPN的结合常数
        5.2.5 LdisPBPs突变体蛋白的结合特性
    5.3 讨论
6 结论与展望
    6.1 主要结论
    6.2 展望
参考文献
个人简介
导师简介
获得成果目录清单
致谢



本文编号：3804245