西维因对罗非鱼内分泌干扰效应非受体介导作用的影响及其遗传毒性研究

发布时间：2023-05-03 20:09

　　作为普遍使用的氨基甲酸酯类杀虫剂-西维因,由于地表径流和不规范使用,致使其广泛的残留与分布,威胁到生物体的生长发育与生态环境的平衡,造成的不良影响已不可忽视。西维因具有一定遗传毒性和雌激素效应。内分泌干扰效应的作用机制分为受体介导和非受体介导。受体介导作用是指外源性雌激素通过模仿或拮抗内源性激素,与内源性激素受体结合,引发生物学反应干扰机体正常内分泌系统。非受体介导作用是指西维因通过影响内分泌激素的合成、运输、转化和代谢等过程干扰机体的内分泌系统。本试验以雄性尼罗罗非鱼为研究对象,探讨不同浓度下西维因的暴露对罗非鱼血清中内分泌相关激素水平、组织的DNA损伤以及内分泌激素合成途径中相关基因表达水平的影响,为分析和评价西维因的内分泌干扰效应的非受体介导作用机制和遗传毒性提供科学依据。罗非鱼暴露于不同剂量下的西维因(0.16mg/L、0.8mg/L、2mg/L)为期29天,酶联免疫法测定血清中黄体生成素(LH),卵泡刺激素(FSH),三碘甲状腺原氨酸(T3),甲状腺素(T4),雌二醇(E2)、睾酮(T)、卵黄蛋白原(VTG)、皮质醇(COR)水平,结果显示：0.8mg/L剂量组各激素水平随暴...

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
符号及缩略语说明
第一章 综述
    1 引言
    2 西维因概述
        2.1 西维因的性质及来源
        2.2 西维因的毒性
    3 环境内分泌污染物的干扰效应
    4 西维因的环境内分泌干扰效应
    5 西维因内分泌干扰效应的非受体介导作用机制
        5.1 环境内分泌干扰效应的两种作用机制
        5.2 类固醇激素的合成途径
        5.3 西维因对类固醇激素合成途径的影响
    6 单细胞凝胶电泳(SCGE)概述
    7 本课题的立题依据及研究内容
第二章 西维因暴露对罗非鱼内分泌相关酶活性的影响
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料与试剂
        2.2 实验仪器
        2.3 实验设计
        2.4 ELISA法测定内分泌相关酶活性
            2.4.1 血清中黄体生成素(LH)水平和卵泡刺激素(FSH)水平的测定
            2.4.2 血清中三碘甲状腺原氨酸(T3)水平和甲状腺激素(T4)水平的测定
            2.4.3 血清中雌二醇(E2)水平和睾酮(T)水平的测定
            2.4.4 血清中卵黄蛋白原(VTG)水平和皮质醇(COR)水平的测定
        2.5 统计分析
    3 结果与分析
        3.1 LH和FSH水平变化趋势
        3.2 T3和T4水平变化趋势
        3.3 E2和T水平变化趋势
        3.4 VTG和COR水平变化趋势
    4 讨论
        4.1 西维因暴露与下丘脑-垂体-性腺轴相关酶水平变化的相关性
        4.2 西维因暴露与下丘脑-垂体-甲状腺轴相关酶水平变化的相关性
    5 小结
第三章 西维因对罗非鱼内分泌相关基因表达的影响
    前言
    第一节 西维因暴露对罗非鱼性腺组织中相关基因的表达影响
        1 材料与方法
            1.1 实验材料与试剂
            1.2 实验仪器
            1.3 实验设计
            1.4 实验方法
                1.4.1 样品采集
                1.4.2 总RNA提取
                1.4.3 RNA浓度与完整性的检测
                1.4.4 反转录
                1.4.5 引物设计
            1.5 实时荧光定量PCR
                1.5.1 RT-PCR的反应条件
                1.5.2 RT-PCR的计算法则
            1.6 统计分析
        2 结果与分析
            2.1 RT-PCR检测罗非鱼精巢组织中3β-HSD1的表达
            2.2 RT-PCR检测罗非鱼精巢组织中11β-HSD2的表达
            2.3 RT-PCR检测罗非鱼精巢组织中17β-HSD8的表达
            2.4 RT-PCR检测罗非鱼精巢组织中20β-HSD的表达
            2.5 RT-PCR检测罗非鱼精巢组织中CYP19a的表达
            2.6 RT-PCR检测罗非鱼精巢组织中CYP19b的表达
        3 讨论
    第二节 西维因暴露对罗非鱼肝脏组织中相关基因表达的影响
        1 材料与方法
        2 结果与分析
            2.1 RT-PCR检测罗非鱼肝脏组织中3β-HSD1的表达
            2.2 RT-PCR检测罗非鱼肝脏组织中11β-HSD2的表达
            2.3 RT-PCR检测罗非鱼肝脏组织中17β-HSD8的表达
            2.4 RT-PCR检测罗非鱼肝脏组织中20β-HSD的表达
            2.5 RT-PCR检测罗非鱼肝脏组织中CYP19a的表达
        3 讨论
        4 小结
第四章 西维因对罗非鱼精巢细胞DNA损伤的影响
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料与试剂
        2.2 实验仪器
        2.3 实验设计
        2.4 彗星试验
            2.4.1 制备单细胞悬浮液
            2.4.2 制片
            2.4.3 细胞裂解
            2.4.4 DNA解旋
            2.4.5 电泳
            2.4.6 中和
            2.4.7 固定
            2.4.8 染色
        2.5 统计分析
    3 结果与分析
        3.1 精巢细胞DNA受损状况
        3.2 西维因对精巢细胞DNA的损伤作用
    4 讨论
    5 小结
全文结论
参考文献
致谢
科研情况



本文编号：3807207