基于靶向性深度测序的转基因盲检技术研究

发布时间：2023-05-22 02:26

　　转基因技术在农业领域的商业化应用加速了全球农业产出,彻底颠覆了当今世界农业格局,已逐步成为各国农业科技竞争的焦点。伴随转基因作物种植面积的激增与技术研发投入的日益扩大,关于转基因植物及其制品对人体健康和生态环境产生的潜在危害也引起了社会各界的广泛关注。为此,世界各国纷纷加强了对转基因产品的法制监管,同时对转基因检测提出了更为严格的要求。当前不同国家和地区的转基因标识制度、阈值范围和管理方式上存在较大差异,直接影响了转基因产品的进出口检验、国际贸易互认等问题。近年来,由于转基因农作物种植面积的激增,以及非法种植与基因横向漂移等问题,转基因检测需求日趋多样化、复杂化。然而,现有的以PCR为主的转基因检测技术效率低下、策略单一,存在多方面的技术局限性,很难满足农业转基因产业快速发展的需要。尤其是转基因盲检技术的缺失,严重限制了政府监管的能力,也制约了转基因技术的产业化发展。因此开发精准、高效、高通量的转基因盲检方法,对完善现有的转基因检测技术体系,促进农业转基因技术的健康发展,满足生物监管需求以及支撑转基因标识管理制度等方面意义重大。本研究以转基因大豆为研究对象,利用差减杂交策略富集外源转基...

【文章页数】：86 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 绪论
    1.1 转基因技术应用与转基因农作物发展概况
    1.2 转基因生物安全概述
        1.2.1 转基因农作物的育种优势
        1.2.2 转基因技术应用的潜在安全隐患
        1.2.3 转基因产品的标识管理制度
    1.3 转基因检测技术现状与展望
        1.3.1 基于核酸水平的检测
        1.3.2 基于蛋白水平的检测
        1.3.3 转基因检测相关数据库
        1.3.4 转基因检测领域现阶段面临的问题
    1.4 抑制性差减杂交
    1.5 高通量测序技术
    1.6 本研究的目的及意义
第二章 转基因盲检方法的初步建立
    2.1 实验材料与仪器
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验仪器
        2.1.3 试剂配制
        2.1.4 相关引物序列
    2.2 实验方法
        2.2.1 大豆基因组提取
        2.2.2 基因组DNA质量评价
        2.2.3 抑制性差减杂交
    2.3 结果与分析
        2.3.1 大豆基因组DNA纯度及完整性
        2.3.2 大豆基因组酶切
        2.3.3 接头连接效率检测
        2.3.4 巢式PCR扩增结果
        2.3.5 富集产物的灵敏度检测
    2.4 本章小结
第三章 多重转基因大豆的混样盲检
    3.1 实验材料与仪器
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 实验仪器
        3.1.3 相关引物序列
    3.2 实验方法
        3.2.1 转基因DNA序列数据库的建立
        3.2.2 大豆基因组DNA的提取
        3.2.3 基因组DNA质量评价
        3.2.4 抑制性差减杂交
    3.3 结果与分析
        3.3.1 转基因DNA序列数据库
        3.3.2 大豆基因组纯度及完整性分析
        3.3.3 大豆基因组酶切
        3.3.4 转基因大豆接头连接效率检测
        3.3.5 巢式PCR扩增结果
        3.3.6 富集产物的灵敏度检测
        3.3.7 基于PCR-free的高通量测序及生物信息学分析结果
    3.4 本章小结
第四章 转基因盲检技术参数的优化
    4.1 实验材料与仪器
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 实验仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 大豆基因组DNA的粗提与纯化
        4.2.2 基因组DNA质量评价
        4.2.3 抑制性差减杂交
        4.2.4 链酶亲和素磁珠对富集产物的捕获
    4.3 结果与分析
        4.3.1 基因组DNA质量评价
        4.3.2 酶切验证
        4.3.3 接头连接效率检测
        4.3.4 巢式PCR扩增
        4.3.5 高通量测序及生物信息学分析
全文总结
参考文献
附录
致谢
作者简介



本文编号：3821815