Rab3基因在棉铃虫细胞免疫中的功能研究

发布时间：2023-10-12 04:35

　　Rab蛋白属于小G蛋白(small GTPase)超家族的一个亚家族,在细胞内膜运输等生理过程中起着重要的作用。近年来在果蝇和虾等无脊椎动物中的研究表明一些Rab蛋白参与了吞噬作用等细胞免疫反应。本课题组在分析棉铃虫(Helicoverpa armigera)的血细胞转录组时鉴定到一个Rab基因一Rab3,命名为Ha-Rab3。Rab3在突触囊泡的运输过程中起着重要的作用。最近在中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)中的一项研究表明Rab3可能也参与先天免疫反应的调控。本试验运用了RNAi等方法研究了Ha-Rab3基因在棉铃虫先天免疫中的功能。实验结果如下： 1、棉铃虫Ha-Rab3基因的克隆及序列分析 从棉铃虫血细胞中克隆到Ha-Rab3基因的全长序列。该序列长678bp,其开放阅读框长657bp,编码218个氨基酸残基。序列比对发现Rab3在不同物种中高度保守,Ha-Rab3与家蚕(Bombyx mori) Rab3相似性最高,达到96%,与哺乳动物小鼠(Mus musculus) Rab3C的相似性也高达81%。结构域预测表明该蛋白无信号肽序列,含有一个Rab结构域(...

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摘要
Abstract
1. 前言
    1.1 昆虫的免疫
        1.1.1 体液免疫
        1.1.2 细胞免疫
    1.2 小G蛋白(small GTP-binding proteins)
        1.2.1 小G蛋白的简介
        1.2.2 小G蛋白与免疫
    1.3 本研究的背景及意义
2. 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 试虫
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 引物序列
        2.1.4 试验仪器
        2.1.5 溶液和培养基的配制
    2.2 试验方法
        2.2.1 Ha-Rab3基因的克隆
        2.2.2 序列分析
        2.2.3 组织特异表达
        2.2.4 免疫刺激后棉铃虫血细胞中Ha-Rab3基因表达量的变化
        2.2.5 dsRNA的合成
        2.2.6 注射dsRNA
        2.2.7 敲降效果的检验
        2.2.8 吞噬率及吞噬指数的测定
        2.2.9 菌载量的测定
        2.2.10 结节的测定
        2.2.11 浆细胞延展率的测定
        2.2.12 包囊指数的测定
3. 结果与分析
    3.1 Ha-Rab3基因的克隆
    3.2 Ha-Rab3基因的同源序列比对及分析
    3.3 Ha-Rab3基因的组织特异表达分析
    3.4 免疫刺激后棉铃虫血细胞中Ha-Rab3基因表达量的变化
        3.4.1 大肠杆菌刺激对血细胞中Ha-Rab3表达量的影响
        3.4.2 金黄色葡萄球菌刺激对血细胞中Ha-Rab3表达量的影响
        3.4.3 凝胶珠刺激对血细胞中Ha-Rab3表达量的影响
    3.5 RNAi分析
        3.5.1 干扰效果的检验
        3.5.2 敲降Ha-Rab3对棉铃虫血细胞吞噬能力的影响
        3.5.3 敲降Ha-Rab3对棉铃虫结节形成的影响
        3.5.4 敲降Ha-Rab3对棉铃虫血淋巴清除细菌能力的影响
        3.5.5 敲降Ha-Rab3对棉铃虫血细胞包囊能力的影响
        3.5.6 敲降Ha-Rab3对血细胞延展能力的影响
4. 讨论
    4.1 干扰效果的影响因素
    4.2 Ha-Rab3参与调控棉铃虫血细胞的吞噬作用
    4.3 Ha-Rab3参与调控棉铃虫血细胞的包囊作用
    4.4 Ha-Rab3通过介导浆细胞的延展来调控棉铃虫的吞噬、包囊等细胞免疫反应
    4.5 Ha-Rab3与结节作用
    4.6 研究展望
参考文献
已发表论文
致谢



本文编号：3853461