烟嘧磺隆降解菌的筛选与代谢组学检测
发布时间：2024-01-23 15:08
本实验中以农药厂排污口及周围农田土壤为起始接种物。将采集来的土壤样品接种于富集培养基中，以100mg/L为初始浓度进行富集培养，每7天转接一次并提升100mg/L的烟嘧磺隆浓度，致使最终富集浓度为700mg/L。涂布平板后得到一株真菌YC-WZ1，经鉴定该菌株为斜卧青霉，可在6天内将100mg/L的烟嘧磺隆完全降解。 为了详细了解所筛选菌株YC-WZ1的烟嘧磺隆降解机制，利用代谢组学的研究方法，对YC-WZ1在烟嘧磺隆存在条件下产生的所有代谢物质进行检测。将待检测的菌株分为烟嘧磺隆处理组（TG）和空白对照组（CG）。取样后使用液氮迅速淬灭，使用衍生化试剂对样品菌株进行衍生化处理，然后使用气相色谱-飞行时间质谱（GC/TOF-MS）得到所有代谢物的检测数据。然后利用化学计量学的方法如主成分分析（PCA），偏最小二乘法（PLS），正交偏最小二乘法（O-PLS）对所得数据进行建模分析，结果显示处理组和对照组的代谢组学检测数据经化学计量法建模处理后所得数据不同组别相对集中，区分明显，可以很好地反映处理组和对照组的代谢差异。所得检测数据可以用于差异代谢产物的筛选和相关代谢通路的研究。 通过代谢组...
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 引言
1.1 磺酰脲类除草剂概述
1.2 磺酰脲类除草剂降解研究
1.2.1 磺酰脲类除草剂的光降解
1.2.2 磺酰脲类除草剂的化学水解
1.2.3 磺酰脲类除草剂的微生物降解
1.3 代谢组学概述
1.3.1 代谢组学
1.3.2 研究历史
1.3.3 代谢组学的研究对象和研究层次
1.3.4 代谢组学研究方法简介
1.3.5 代谢组学研究领域
1.4 气相色谱-质谱联用技术
1.4.1 气相色谱-质谱联用技术原理及特点
1.4.2 气相色谱-飞行时间质谱仪（GC/TOF- MS）
1.4.3 气相色谱-质谱联用技术在代谢组学中的应用
1.5 代谢组学在微生物中的应用
1.5.1 产核黄素枯草芽孢杆菌代谢工程
1.5.2 乳酸菌生理功能的代谢工程
1.5.3 丝状真菌异源蛋白表达的代谢工程
1.5.4 医学微生物学中的代谢组学研究
1.5.5 环境微生物学中的代谢组学研究
1.6 本课题的研究目的与意义
第二章 烟嘧磺隆降解菌的筛选
2.1 仪器与药品
2.1.1 供试样品
2.1.2 培养基
2.1.3 试剂与化学药品
2.1.4 主要仪器
2.2 实验方法
2.2.1 烟嘧磺隆降解菌株的富集培养与筛选分离
2.2.2 烟嘧磺隆浓度标准曲线的制作
2.2.3 菌株 YC-WZ1 降解能力的测定
2.2.4 降解菌株的形态特征
2.2.5 降解菌株的 18SRDNA 的鉴定
2.3 实验结果与分析
2.3.1 降解菌株的分离与筛选
2.3.2 烟嘧磺隆标准曲线的绘制
2.3.3 菌株 YC-WZ1 降解能力的测定
2.3.4 降解菌株的形态特征
2.3.5 降解菌株的 18SRDNA 鉴定
2.4 本章小结
第三章 烟嘧磺隆降解菌代谢组学研究
3.1 仪器和试剂
3.1.1 试剂
3.1.2 仪器
3.2 实验方法
3.2.1 待测菌种的培养
3.2.2 代谢物萃取
3.2.3 代谢物衍生化
3.2.4 系统稳定性检测
3.2.5 预实验
3.2.6 正式实验
3.2.7 上机检测
3.2.8 检测结果
3.3 数据结果分析
3.3.1 数据预处理
3.3.2 主成分(PCA)分析
3.3.3 偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)及对模型的验证
3.3.4 正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)
3.3.5 差异代谢物的筛选及鉴定
3.4 本章小结
第四章 结果与讨论
4.1 烟嘧磺隆的水解
4.2 氨基酸代谢
4.3 糖类代谢
4.4 核苷酸代谢
4.5 抗逆性物质
4.6 总体代谢轮廓
第五章 全文总结
5.1 研究结果
5.2 创新点
5.3 展望
附录
参考文献
致谢
作者简历
本文编号：3882881
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 引言
1.1 磺酰脲类除草剂概述
1.2 磺酰脲类除草剂降解研究
1.2.1 磺酰脲类除草剂的光降解
1.2.2 磺酰脲类除草剂的化学水解
1.2.3 磺酰脲类除草剂的微生物降解
1.3 代谢组学概述
1.3.1 代谢组学
1.3.2 研究历史
1.3.3 代谢组学的研究对象和研究层次
1.3.4 代谢组学研究方法简介
1.3.5 代谢组学研究领域
1.4 气相色谱-质谱联用技术
1.4.1 气相色谱-质谱联用技术原理及特点
1.4.2 气相色谱-飞行时间质谱仪（GC/TOF- MS）
1.4.3 气相色谱-质谱联用技术在代谢组学中的应用
1.5 代谢组学在微生物中的应用
1.5.1 产核黄素枯草芽孢杆菌代谢工程
1.5.2 乳酸菌生理功能的代谢工程
1.5.3 丝状真菌异源蛋白表达的代谢工程
1.5.4 医学微生物学中的代谢组学研究
1.5.5 环境微生物学中的代谢组学研究
1.6 本课题的研究目的与意义
第二章 烟嘧磺隆降解菌的筛选
2.1 仪器与药品
2.1.1 供试样品
2.1.2 培养基
2.1.3 试剂与化学药品
2.1.4 主要仪器
2.2 实验方法
2.2.1 烟嘧磺隆降解菌株的富集培养与筛选分离
2.2.2 烟嘧磺隆浓度标准曲线的制作
2.2.3 菌株 YC-WZ1 降解能力的测定
2.2.4 降解菌株的形态特征
2.2.5 降解菌株的 18SRDNA 的鉴定
2.3 实验结果与分析
2.3.1 降解菌株的分离与筛选
2.3.2 烟嘧磺隆标准曲线的绘制
2.3.3 菌株 YC-WZ1 降解能力的测定
2.3.4 降解菌株的形态特征
2.3.5 降解菌株的 18SRDNA 鉴定
2.4 本章小结
第三章 烟嘧磺隆降解菌代谢组学研究
3.1 仪器和试剂
3.1.1 试剂
3.1.2 仪器
3.2 实验方法
3.2.1 待测菌种的培养
3.2.2 代谢物萃取
3.2.3 代谢物衍生化
3.2.4 系统稳定性检测
3.2.5 预实验
3.2.6 正式实验
3.2.7 上机检测
3.2.8 检测结果
3.3 数据结果分析
3.3.1 数据预处理
3.3.2 主成分(PCA)分析
3.3.3 偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)及对模型的验证
3.3.4 正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)
3.3.5 差异代谢物的筛选及鉴定
3.4 本章小结
第四章 结果与讨论
4.1 烟嘧磺隆的水解
4.2 氨基酸代谢
4.3 糖类代谢
4.4 核苷酸代谢
4.5 抗逆性物质
4.6 总体代谢轮廓
第五章 全文总结
5.1 研究结果
5.2 创新点
5.3 展望
附录
参考文献
致谢
作者简历
本文编号：3882881
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