好氧堆肥对畜禽养殖粪污中抗生素耐药整合子的影响规律研究

发布时间：2024-05-11 03:09

　　近年来,随着兽用抗生素在集约化畜禽养殖业上使用量的日渐上升,使得抗生素污染日益严重,而耐药菌及耐药基因的出现更使得人们愈来愈聚焦于这一新兴的污染物。本研究以多耐药菌及耐药基因为研究对象,调查规模化畜禽养殖粪污中多耐药菌的污染状况,解析养殖粪污中主要耐药整合子的结构组成,分析高温好氧堆肥过程对养殖粪污中多耐药菌及其整合子的去除规律,为更好的控制养殖来源耐药基因在环境内的横向转移提供理论基础和数据支撑。主要结论如下:首先,本研究选取12个典型养殖场及其粪污堆肥厂,采集新鲜粪污和有机肥成品样品,通过添加8种抗生素培养多重耐药菌,并分析不同粪肥来源的多耐药菌的丰度及其多样性的差异。细菌计数结果表明:对于抗四环素、恩诺沙星、磺胺甲恶唑和泰乐菌素(A类),以及抗氟苯尼考、氨苄西林、头孢噻呋及粘杆菌素(B类)的两类多重耐药菌污染状况(绝对数量和相对数量)排序均为鸡粪>猪粪>牛粪,粪源有机肥中可培养的多重耐药菌的绝对数量和相对数量均有所下降,说明堆肥是一种控制多重耐药细菌的有效手段。基于16S rDNA序列扩增子测序的细菌群落结构分析表明:不同抗生素的多耐药菌群的多样性也有所不同,在α多样...

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
    1.1 研究背景
        1.1.1 抗生素污染现状
        1.1.2 耐药菌及耐药基因
        1.1.3 整合子的研究进展
        1.1.4 质粒的研究进展
        1.1.5 堆肥对抗生素污染的研究进展
    1.2 研究的目的及意义
    1.3 研究内容
2 实验材料与分析方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 仪器与设备
        2.1.2 实验试剂
    2.2 试验方法
        2.2.1 抗生素溶液的配制
        2.2.2 样品的来源及采集
        2.2.3 培养基的配制
        2.2.4 多重耐药菌的分离、计数和筛选
        2.2.5 多重耐药菌菌群的鉴定
        2.2.6 多重耐药菌的分子鉴定
        2.2.7 药敏试验
        2.2.8 耐药整合子的扩增
        2.2.9 质粒提取及检测
        2.2.10 特异性引物设计
        2.2.11 堆肥实验设计
    2.3 数据整理及计算方法
        2.3.1 粪肥中多耐药菌的浓度
        2.3.2 耐药菌占总菌数的比例
        2.3.3 基因拷贝数
        2.3.4 数据统计分析
3 规模化畜禽粪便堆肥厂的多重耐药细菌污染特征调查
    3.1 可培养多重耐药菌污染概况
        3.1.1 可培养的A类多耐药菌计数分析
        3.1.2 可培养的B类多耐药菌计数分析
        3.1.3 可培养耐药菌多样性的分析
        3.1.4 可培养耐药菌群落结构解析
    3.2 本章小结
4 多重耐药菌中耐药整合子结构解析
    4.1 禽畜粪便中多重耐药菌分离与鉴定
        4.1.1 A类多重耐药菌分离及鉴定
        4.1.2 B类多重耐药菌分离及鉴定
    4.2 分离菌株的耐药性特征
        4.2.1 A类多耐药菌的耐药性分析
        4.2.2 B类多耐药菌的耐药性分析
    4.3 多重耐药菌的整合子构成分析
    4.4 本章小结
5 高温堆肥中典型耐药整合子的变化规律解析
    5.1 耐药菌株的质粒获取及结构解析
    5.2 耐药基因引物特异性验证
    5.3 高温堆肥对多耐药菌及耐药基因的去除规律探究
        5.3.1 高温堆肥过程中可培养耐药菌的丰度变化
        5.3.2 高温堆肥过程中耐药基因的丰度变化
    5.4 本章小结
结论
参考文献
附录
攻读学位期间发表的学术论文
致谢



本文编号：3969434