小麦土传真菌病害快速检测体系的建立及小麦茎基腐病区土壤微生物多样性研究

发布时间：2024-05-13 01:54

　　小麦纹枯病、小麦根腐病及小麦茎基腐病是目前小麦上三种重要的土传真菌病害,对小麦的品质和产量造成了严重的影响,这三种病害在发病初期较难区分,常错失防治时机。本研究针对这三种病害的病原设计特异性引物,建立可同时检测这三种病害的多重PCR体系,并将该体系应用于田间小麦样本,实现小麦土传真菌病害的快速检测;另一方面,利用高通量测序技术对小麦茎基腐病不同发生程度麦田的土壤微生物群落结构和多样性进行分析,解析土壤肥力状况及微生物群落结构与小麦茎基腐病的关系。主要研究结果如下:1、多重PCR体系的建立与应用(1)引物设计及PCR扩增根据禾谷丝核菌(Rhizoctonia cerealis)和麦根腐平脐蠕孢菌(Bipolaris sorokiniana)的rDNA-ITS、镰孢菌(Fusarium spp.)EF-1α基因序列独立设计并合成3对引物:WKF-S18/WKR-S8、RBF-S2/RBR-S1及EF-SF9/EF-SR8,3对引物扩增的基因片段大小分别为174、418、600 bp。(2)多重PCR反应体系优化为了在同一PCR反应体系中同时获得三条清晰的目的基因片段,首先优化了PCR退火温...

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图3.1单一PCR检测结果

图3.1单一PCR检测结果组DNA；泳道2：麦根腐平脐蠕孢菌基因组DNA；泳道3:假禾谷Fig.3.1ResultsofsinglePCRRhizoctoniacerealis.Lane2:genomicDNAfromBipolaris....

图3.2不同退火温度下多重PCR扩增结果

图3.2不同退火温度下多重PCR扩增结果道1-8：退火温度分别为53.0°C,53.7°C,54.9°C,56.8°C,59.1°C,61.0°C,62.2°C,63.0°Fig.3.2Optimizationoftheanne....

图3.3正交设计多重PCR扩增电泳图

图3.2不同退火温度下多重PCR扩增结果泳道1-8：退火温度分别为53.0°C,53.7°C,54.9°C,56.8°C,59.1°C,61.0°C,62.2°C,63.0°CFig.3.2Optimizationofthean....

图3.4多重PCR特异性检测结果

图3.4多重PCR特异性检测结果混合DNA；泳道2：阴性对照；泳道3-10：禾顶囊壳小麦变种，交链格孢，小孢核菌，大丽轮枝菌，烟草疫霉菌，美澳型核果链核盘菌，翠雀小核菌Fig.3.4SpecificityofmultiplexPCRNAfromR.c....

本文编号：3972206