高酶活大豆MnSOD基因的改造及功能鉴定

发布时间：2024-05-14 19:09

　　超氧化物歧化酶是清除自由基及抗氧化最重要的酶，是研究自由基生命科学的奠基石。本研究利用低温PCR技术使已得到的超氧化物歧化酶基因发生随机突变，突变酶在大肠杆菌中进行表达，鉴定酶活性，筛选高酶活菌株。主要研究内容和成果如下： 1、将目的基因成功插入克隆载体：以本实验室保存的质粒pREP5N-MnSOD为模板，利用MnSOD特异性引物，通过低温PCR方法对超氧化物歧化酶基因进行PCR扩增，将6个扩增片段分别插入PMD18-T Vector*1，构建了克隆载体。 2、构建了表达载体pPM1-pPM6：分别将克隆载体上的低温片段经正常退火温度（52℃）PCR扩增，扩增产物与载体pREP5N分别进行双酶切，连接，将连接产物转化大肠杆菌E.coli DH5α中，经PCR及酶切鉴定，最终成功构建表达载体pPM1-pPM6。 3、目的基因序列及蛋白结构分析结果：将目的基因序列与已知大豆MnSOD基因序列比对分析，结果表明，基因序列一致性平均为86.57%，氨基酸序列同源性平均为82.58%。利用蛋白质结构分析软件对其结构进行分析，结果表明六种蛋白属于SOD-Mn型超氧化物歧化酶蛋白。 4、获得了E.c...

【文章页数】：46 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
前言
第一章 文献综述
    1.1 超氧化物歧化酶的概述
        1.1.1 超氧化物歧化酶的简介
        1.1.2 超氧化物歧化酶的分类和分布
        1.1.3 超氧化物歧化酶的来源及制备
        1.1.4 超氧化物歧化酶的作用机理
    1.2 超氧化物歧化酶的分子结构及理化性质
        1.2.1 超氧化物歧化酶的分子结构
        1.2.2 超氧化物歧化酶的理化性质
    1.3 超氧化物歧化酶的应用
        1.3.1 超氧化物歧化酶在医学方面的应用
        1.3.2 超氧化物歧化酶在化妆品中的应用
        1.3.3 超氧化物歧化酶在食品领域应用研究现状
    1.4 酶分子的定向进化
        1.4.1 易错 PCR 技术
        1.4.2 DNA 改组技术
        1.4.3 序列饱和突变
        1.4.4 低温 PCR 技术
    1.5 超氧化物歧化酶的研究动态
    1.6 本研究的目的及意义
第二章 材料与方法
    2.1 实验材料
    2.2 实验方法
第三章 结果与分析
    3.1 超氧化物歧化酶基因低温 PCR 扩增结果
    3.2 低温 PCR 扩增产物表达载体的构建及鉴定
    3.3 目的基因序列，编码序列分析以及蛋白结构分析
    3.4 目的基因在大肠杆菌中的诱导及蛋白检测
    3.5 重组转化子的酶活检测
第四章 讨论
第五章 结论
参考文献
附录A
附录B
作者简介
致谢



本文编号：3973371