双抗体夹心酶联免疫方法检测丁香假单胞杆菌斑点致病变种病菌

发布时间：2017-07-20 21:07

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【摘要】：丁香假单胞杆菌斑点致病变种病菌可以引起十字花科细菌性黑斑病,是侵染萝卜、白菜、花椰菜等农作物的重要病害之一。以灭活的丁香假单胞杆菌斑点致病变种病菌(NCPPB1820)为免疫原免疫小鼠,通过杂交瘤细胞技术,筛选最终获得6株产生特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞。将辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)与抗体偶联,作为检测探针,分别将6种单克隆抗体作为包被抗体,进行两两配对筛选。结果表明,所制备的抗体特异性较好,对水稻细菌性谷枯病菌、水稻细菌性条斑病菌、玉米细菌性枯萎病菌、丁香假单胞菌丁香致病变种均没有交叉反应。以6号抗体作为检测抗体(6-HRP),以1号抗体作为包被抗体,建立酶联免疫分析法获得了最佳的敏感度。检测丁香假单胞杆菌斑点致病变种的最低检测限为1.5×105cfu/m L,定量限为4.12×105cfu/m L。基于双抗体夹心的酶免疫方法特异性好,便捷,可以实现对丁香假单胞杆菌斑点致病变种病菌高通量测定。
【作者单位】： 食品科学与技术国家重点实验室江南大学;
【关键词】： 酶联免疫测定 单克隆抗体 丁香假单胞杆菌斑点致病变种病菌
【基金】：国家十二五科技支撑计划项目(2012BAC01B07)
【分类号】：S432.4
【正文快照】： 由丁香假单胞杆菌斑点致病变种(Pseudomonassyringae pv.Maculicola)病菌引起的十字花科细菌性黑斑病是世界上重要的十字花科蔬菜细菌性病害[1]。该病菌在分类上属于原核生物细菌界、变形杆菌门、假单胞菌科[2]。该菌最适培养温度在25~27℃,主要宿主有白菜、萝卜、花椰菜等十

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本文编号：569974