小菜蛾PGRP-SA的体外表达及介导酚氧化酶活力的研究

发布时间：2017-08-09 23:20

  本文关键词：小菜蛾PGRP-SA的体外表达及介导酚氧化酶活力的研究

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【摘要】：肽聚糖识别蛋白(Peptidoglycan Recognition Proteins,PGRPs)是可以识别肽聚糖和含肽聚糖的细菌的一类模式识别受体,在介导酚氧化酶级联反应中起着重要的作用。本研究以实验室克隆的小菜蛾Px PGRP-SA(Gen Bank No.EU399240)为基础,RT-PCR克隆了其开放阅读框(ORF),在原核细胞中获得了高效重组表达,利用GST一步纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备了抗血清,滴定效价为1∶51200。Western blot检测表明Micrococcus luteus和Serratia marcescens可以显著提高Px PGRP-SA在小菜蛾血淋巴中的含量。为了检测Px PGRP-SA与酚氧化酶PO的活力关系,本研究将Px PGRP-SA连接到真核表达载体p MT/Bip/V5/His A构建真核表达质粒p MTAPGRP,转染果蝇S2细胞中,获得稳定的细胞系,硫酸铜诱导获得表达后用anti-V5纯化获得重组蛋白Px PGRP-SA。将重组蛋白Px PGRP-SA与M.luteus和S.marcescens分别温育后,可以显著提高小菜蛾血浆中PO的活力。本研究结果阐明了重组蛋白Px PGRP-SA在小菜蛾体PO级联反应中的功能,为进一步研究Px PGRP-SA在小菜蛾体内免疫信号通路中的功能奠定了基础。
【作者单位】： 华南农业大学农学院昆虫学系广东省生物农药创制与应用重点实验室;
【关键词】： 小菜蛾 肽聚糖识别蛋白 酚氧化酶 细胞表达
【基金】：国家自然科学基金(30900943,1071734) 广州市科技计划项目(201509010023)
【分类号】：S433.4
【正文快照】： 在昆虫天然免疫系统中,模式识别受体(Pattern Recognition Receptors,PRRs)识别非己异物是免疫反应的第一步。PRRs由有限数量的胚系基因编码,进化上十分保守,对生物体的生存极为重要,其与病原微生物表面的病原体相关分子模式(Pathogen Associated Molecular Patterns,PAMPs)的

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本文编号：647815