冬青卫矛内生菌的分离及其活性代谢物研究

发布时间：2017-10-07 17:50

  本文关键词：冬青卫矛内生菌的分离及其活性代谢物研究

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【摘要】：植物内生菌作为一种微生物类群,广泛存在于健康植物组织中且其代谢产物丰富多样,是寻找具有新颖分子骨架的生物活性化合物的重要来源。冬青卫矛是一种高抗污染植物,且具有治疗跌打损伤、小便疼痛等功效。本论文以冬青卫矛为植物材料,主要研究了内生菌的分离、发酵产物抑菌活性、菌株鉴定、活性物质的分离鉴定及发酵培养基的优化等。主要结果如下:1.分别运用组织匀浆法和切块法从冬青卫矛中分离得到42株内生放线菌和21株内生真菌。通过管碟法和生长速率法对菌株发酵液进行初步活性评价,结果表明:有5株菌株对供试病原细菌和真菌均具有良好的抑制作用,综合抗菌活性及其发酵状态等因素选取内生菌株G1和W1进行深入研究。2.通过16S rDNA序列分析,基本确定内生放线菌G1为Streptomyces flavofuscus G1。从其次生代谢物中分离得到两个活性化合物,G13和G19,分别鉴定为Phencomycin和4'-deacetyl-(-)-griseusin A。抑菌活性测定结果表明:4'-deacetyl-(-)-griseusin A对供试细菌和病原真菌均表现出抑制活性,其中,对水稻白叶枯病菌、铜绿假单孢菌、蜡状芽孢杆菌及金黄色葡萄球菌具有强烈的抑制作用,其最低抑菌浓度(MIC)值均为1.56μg/mL;对苹果树腐烂病菌和小麦赤霉病菌菌丝生长亦具有显著的抑制作用,其IC50值分别为14.70和24.35μg/mL。Phencomycin对供试细菌仅表现出微弱的抑菌活性,对病原真菌均表现出抑制活性,其中对油菜菌核病菌和苹果树腐烂病菌菌丝生长有强烈的抑制作用,其IC50值分别为5.21和4.82μg/mL。3.通过ITS序列分析,基本确定内生真菌W1为Cylindrocarpon olidum W1。从其菌丝体中分离得到一个高产量活性化合物W1-4,鉴定为壳二孢氯素(ascochlorin),并首次对其农用抑菌活性进行评价。结果表明:壳二孢氯素对供试细菌仅有微弱的活性;对病原真菌均表现出抑制活性,其中,100μg/mL浓度下,对苹果树腐烂病菌菌丝生长的抑制率为82.61%。4.采用中心组合设计及响应面分析法对内生真菌Cylindrocarpon olidum W1的发酵培养基进行优化以提高壳二孢氯素的产量。优化后的发酵培养基配方为:玉米粉30 g/L、鱼粉8.098 g/L、KCl 6.928 g/L。在此最优因素水平下,壳二孢氯素含量为1015.32μg/mL,而原始发酵培养基壳二孢氯素的含量为211.08μg/mL,是原始培养基的4.81倍。
【关键词】：冬青卫矛 内生菌 抑菌活性 phencomycin 壳二孢氯素
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S476.1
【目录】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-12
• 第一章 文献综述12-21
• 1.1 植物内生菌概述12
• 1.2 植物内生菌的多样性12-13
• 1.3 植物内生菌的活性代谢物种类13-17
• 1.3.1 抗菌活性化合物13-14
• 1.3.2 抗肿瘤活性化合物14-15
• 1.3.3 杀虫活性化合物15-16
• 1.3.4 其他活性化合物16-17
• 1.4 产活性物质植物内生菌的筛选策略17-18
• 1.5 农用抗生素的研究概况18-19
• 1.5.1 农用抗生素的发展18
• 1.5.2 农用抗生素的展望18-19
• 1.6 冬青卫矛内生菌的研究概况19
• 1.7 论文设计思路19-21
• 1.7.1 选题依据及基础19-20
• 1.7.2 研究内容及技术路线20-21
• 第二章 冬青卫矛内生菌的分离及活性评价21-26
• 2.1 实验材料21-22
• 2.1.1 植物材料21
• 2.1.2 主要仪器21
• 2.1.3 主要试剂21
• 2.1.4 培养基21-22
• 2.1.5 供试病原菌22
• 2.2 实验方法22-24
• 2.2.1 植物材料表面消毒22-23
• 2.2.2 内生菌的分离培养23
• 2.2.3 菌株的纯化23
• 2.2.4 菌株的保藏23
• 2.2.5 菌株液体培养23
• 2.2.6 活性筛选23-24
• 2.3 结果与分析24-25
• 2.3.1 表面消毒效果24
• 2.3.2 内生真菌的分离24
• 2.3.3 内生放线菌的分离24
• 2.3.4 内生菌发酵液的活性初筛24-25
• 2.4 小结与讨论25-26
• 第三章 内生放线菌G1抑菌活性研究26-40
• 3.1 菌株鉴定26-31
• 3.1.1 试验材料26-27
• 3.1.2 试验方法27-29
• 3.1.3 结果分析29-31
• 3.2 发酵液抑菌活性成分研究31-39
• 3.2.1 试验材料31-33
• 3.2.2 试验方法33-34
• 3.2.3 结果分析34-39
• 3.3 小结与讨论39-40
• 第四章 内生真菌W1抑菌活性研究40-50
• 4.1 菌株鉴定40-44
• 4.1.1 实验材料40
• 4.1.2 试验方法40-42
• 4.1.3 结果分析42-44
• 4.2 发酵液抑菌活性成分研究44-49
• 4.2.1 实验材料44-45
• 4.2.2 试验方法45-46
• 4.2.3 结果分析46-49
• 4.3 小结与讨论49-50
• 第五章 Cylindrocarpon olidum W1发酵培养基的优化50-64
• 5.1 实验材料50-51
• 5.1.1 供试菌株50
• 5.1.2 培养基50-51
• 5.1.3 主要仪器51
• 5.1.4 主要试剂51
• 5.2 实验方法51-53
• 5.2.1 菌株的液体发酵51
• 5.2.2 壳二孢氯素含量的检测51
• 5.2.3 发酵培养基优化51-53
• 5.3 结果分析53-62
• 5.3.1 单因素实验53-55
• 5.3.2 响应面分析法确定各因素最佳水平55-62
• 5.4 小结与讨论62-64
• 第六章 结论64-65
• 参考文献65-72
• 附录72-73
• 附录 菌落形态72-73
• 缩略词73-74
• 致谢74-75
• 作者简介75

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本文编号：989253