奶牛隐性乳房炎中致病性大肠杆菌luxS及pfs基因表达及AI-2体外合成
【部分图文】:
以特异性引物进行扩增luxS基因和pfs基因,结果显示,扩增到的条带分别约为516 bp和690 bp,与目的条带大小一致(图1)。表明PCR扩增到了目的片段。2.2 重组质粒的鉴定
构建的重组质粒经PCR鉴定结果显示,2个重组质粒均能扩增到和目的片段大小相同的片段(图2A)。重组质粒pET-luxS分别用EcoR I、Hind III单酶切,均获得了1条约5 938 bp条带,与重组质粒大小一致;用EcoR I和Hind III双酶切得到1条约5 422 bp和1条516 bp两条带,小带与目的基因luxS基因大小相同;pET-pfs分别用EcoR I、Hind III单酶切,均获得了一条约6 112 bp条带,与重组质粒大小一致,用EcoR I和Hind III双酶切得到1条约5 422 bp和1条690 bp两条带,小带与目的基因pfs基因大小相同(图2B、C)。PCR和酶切鉴定均证明重组质粒pET-luxS和pET-pfs构建成功。2.2.2 luxS基因和pfs基因序列测定
将表达纯化的LuxS和Pfs蛋白免疫新西兰大白兔获得的多抗,通过Western Blot鉴定后,在相应的位置出现了条带(24 ku和30 ku)(图4),与预期结果相符。图4 重组蛋白LuxS和Pfs Western Blot 检测及其纯化产物的SDS-PAGE
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