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LuxS/AI-2型密度感应系统对禽致病性大肠杆菌的调控研究

发布时间:2021-03-05 10:40
  禽大肠杆菌病是由禽致病性大肠杆菌(Avian Pathogenic Escherichia coli, APEC)引起的严重影响养禽业的传染病之一。LuxS/AI-2型密度感应系统广泛存在于革兰氏阴性和阳性菌中,可产生用于细菌种间交流的通用自诱导信号分子AI-2(Autoinducer-2,AI-2),在细菌的许多生理功能中扮演着重要的角色。目前禽致病性大肠杆菌复杂的血清型和广谱的耐药性,给禽大肠杆菌病的防控提出了新的挑战,该菌LuxS/AI-2型密度感应系统的研究国内外尚未见报道。本研究旨在通过对APEC的LuxS/AI-2型密度感应系统探究,为防控APEC感染,从细菌群体角度提供了新的思路,为进一步研究密度感应系统对APEC的调控功能和机理提供参考。1.禽致病性大肠杆菌AI-2的检测及其因素分析为探讨APEC中是否存在LuxS/AI-2型密度感应系统。利用哈维弧菌BB170(vibrio harveyi BB170)对APEC是否产生信号分子AI-2进行检测,结果表明APEC能产生自诱导信号分子AI-2。为探讨禽致病性大肠杆菌在不同生长时期和不同培养条件下,信号分子AI-2活性与l... 

【文章来源】:安徽农业大学安徽省

【文章页数】:57 页

【学位级别】:硕士

【文章目录】:
摘要
Abstract
英文缩写词表
目录
文献综述
主要技术路线
引言
1 材料与方法
    1.1 试验材料
        1.1.1 主要菌株及其培养
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 主要培养基及试剂配制
        1.1.4 试验动物
        1.1.5 主要仪器设备
    1.2. 试验方法
        1.2.1 禽致病性大肠杆菌 AI-2 的检测
        1.2.2 PCR 引物设计
        1.2.3 luxS 和 pfs 的 mRNA 水平检测
        1.2.4 luxS 和 pfs 的表达及纯化
        1.2.5 重组蛋白 LuxS 多克隆抗体的制备及效价测定
        1.2.6 AI-2 的体外合成
        1.2.7 不同 AI-2 浓度下 APEC 生物被膜的检测
        1.2.8 luxS 在禽致病性大肠杆菌中的分布
        1.2.9 luxS 缺失株和回复株的构建
        1.2.10 生长曲线的测定
        1.2.11 运动性的测定
        1.2.12 半数致死量(LD50)的测定
        1.2.13 细胞黏附和入侵
        1.2.14 樱桃谷鸭感染试验
        1.2.15 毒力基因的转录水平的测定
2 结果与分析
    2.1 禽致病性大肠杆菌 AI-2 的检测及其因素分析
        2.1.1 不同 APEC 的 AI-2 活性检测
        2.1.2 不同生长阶段下 APEC 的 AI-2 活性检测
        2.1.3 不同培养条件下 APEC 的 AI-2 活性检测
        2.1.4 APEC 在不同生长阶段 luxS 和 pfs mRNA 水平
        2.1.5 APEC 在不同培养条件下 luxS 和 pfs mRNA 水平
    2.2 禽致病性大肠杆菌 AI-2 的合成及其对生物被膜的影响
        2.2.1 luxS 和 pfs 的克隆以及表达载体的构建
        2.2.2 LuxS 和 Pfs 的表达、纯化及可溶性分析
        2.2.3 AI-2 浓度测定标准曲线
        2.2.4 AI-2 的体外合成及活性检测
        2.2.5 AI-2 对 APEC 生物被膜形成能力的影响
    2.3 禽致病性大肠杆菌 luxS 缺失株的构建及生物学特性分析
        2.3.1 luxS 在禽致病性大肠杆菌中的分布
        2.3.2 luxS 带同源臂的抗氯霉素 DNA 片段的构建
        2.3.3 禽致病性大肠杆菌 luxS 缺失株的鉴定
        2.3.4 禽致病性大肠杆菌 luxS 回复株的构建
        2.3.5 不同菌株中 AI-2 的检测
        2.3.6 生长曲线的测定
        2.3.7 luxS 对 APEC 运动性的影响
        2.3.8 luxS 对 APEC 致病性的影响
        2.3.9 luxS 对 APEC 毒力基因的转录水平的影响
3 讨论
    3.1 禽致病性大肠杆菌 AI-2 的存在
    3.2 不同生长时期 AI-2 的产生及其 luxS 和 pfs 转录水平分析
    3.3 不同培养条件 AI-2 的产生及其 luxS 和 pfs 转录水平分析
    3.4 禽致病性大肠杆菌 AI-2 的合成
    3.5 AI-2 对禽致病性大肠杆菌生物被膜形成能力的影响
    3.6 禽致病性大肠杆菌 luxS 缺失株运动性分析
    3.7 禽致病性大肠杆菌 luxS 缺失株致病性分析
4 结论
参考文献
致谢
作者简介
附作者在读研期间发表的学术论文


【参考文献】:
期刊论文
[1]AI-2对鸭疫里氏杆菌粘附入侵Vero细胞及其相关基因转录水平的影响[J]. 刘蕾,韩先干,刘瑞,白灏,董洪亮,丁铲,刘海文,于圣青.  微生物学报. 2013(03)
[2]禽致病性大肠杆菌强毒力岛摄铁功能与致病性关系的研究[J]. 李叶芳,白灏,彭开松,涂健,祁克宗.  中国兽医科学. 2012(09)
[3]LuxS/AI-2对伤寒沙门菌基因表达的调节[J]. 罗哲,王敏,杜鸿,王菲,孟彦辰,倪斌,徐顺高,黄新祥.  江苏大学学报(医学版). 2011(01)
[4]鸭致病性大肠杆菌的分离鉴定及其生物学特性分析[J]. 陈文静,韩先干,何亮,胡青海,于圣青.  中国动物传染病学报. 2010(02)



本文编号:3065065

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