复合诱变野生酵母ZZ-46选育高产油脂菌株

发布时间：2024-11-20 21:07

　　 为获得能利用葡萄糖/木糖混合糖液的高产油脂菌种,以野生酵母菌株Trichosporon dermatis ZZ-46为出发菌进行常压室温等离子体(atmospheric room temperature plasma,ARTP)-硫酸二乙酯(diethyl sulfate,DES)复合诱变,并分别以浅蓝菌素和氯化三苯基四氮唑(triphenyl tetrazolium chloride,TTC)分别为筛选因子结合尼罗红荧光染色进行高通量筛选,最终选育出1株高产菌株L7。该菌以混合糖为碳源进行摇瓶复筛后,生物量、油脂产量和油脂含量分别达到22.7 g/L、11.4 g/L和50.5%,较出发菌株分别提高12.6%、33.2%和7.8%;且该菌具有良好的遗传稳定性,其脂肪酸组成与出发菌相同,与植物油相似。结果表明,该菌具有较好利用混合糖液生产生物柴油的潜力。

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【部分图文】：

图1 不同浓度TTC和浅蓝菌素对ZZ-46的生长的影响

TTC是一种氧化还原剂，溶于水时无色，当接受脱氢酶脱下来的H+时被还原成红色物质三苯基甲臢(triphenylformazan,TF)，其颜色越深则表示脂肪酸脱氢酶的活性越强，不饱和脂肪酸的含量就越高[22]。浅蓝菌素是一种抗真菌抗生素，可抑制脂肪酸合酶的活性，从而不可逆地抑制....

图2 野生油脂酵母ZZ-46的ARTP致死率曲线

随着诱变时间延长，菌落的数量越来越少，致死率越来越高。当处理时间的140s时，致死率达到96.1%，处理170s时，致死率达到100%。由于AR-TP诱变产生的突变具有随机性，致死率和正突变之间的关系并不明确，这主要取决于诱变方法和菌株自身特性[16]。因此，为了获得生存能力....

图8 野生菌株ZZ-46和突变菌株L7的发酵曲线图

木质纤维素完全水解后得到的葡萄糖和木糖能达到总糖的90%以上，且两者的质量比约为2∶1[18]，因此选择葡萄糖∶木糖=2∶1(质量比)的初始碳源模拟纤维素水解液，总糖质量浓度保持70g/L。考察野生菌株ZZ-46和突变菌株L7生长和积累油脂的情况，结果如图8所示。由图8可知，Z....

图3 ARTP诱变菌株的相对OD600 nm和荧光强度

将经过ARTP处理140s后的酵母稀释到合适浓度并涂布到含有1.67×10-2g/LTTC和4.107×10-6mol/L浅蓝菌素的YPD平板上。按照1.2.2.2小节中的方法进行平板初筛和高通量筛选，测得各突变菌株的OD600nm和荧光强度。如图3所示，表明原始菌株和诱变....

本文编号：4012359