基于磁性分离技术的化学发光适体传感器检测赭曲霉毒素A

发布时间：2017-09-20 21:11

  本文关键词：基于磁性分离技术的化学发光适体传感器检测赭曲霉毒素A

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【摘要】：赭曲霉毒素A(OTA)是一种具有很强毒性的真菌毒素,其毒性在真菌毒素家族中位列第二位,仅次于黄曲霉毒素。OTA在自然界分布广泛,不仅污染谷物粮食,还严重污染动物性食品,对人类构成极大的威胁。鉴于食品安全问题关乎整个社会的安危,应当引起全世界的高度关注,因此建立OTA的高灵敏简便快速分析方法越发受到科研人员的重视。本论文基于不同的传感模式和化学发光机理,构建了几种不同的适体传感器,从而实现了OTA的化学发光检测。且这几种OTA适体传感器均以磁性微球作为分离和固定载体,实现传感器的均相反应异相分离。整篇论文内容可分为如下三个部分:第一部分基于OTA适体链上的鸟嘌呤(G)碱基与化学发光试剂苯甲酰甲醛(PG)的瞬时衍生化反应产生化学发光的原理,以OTA适体为检测探针,建立了一种无标记适体传感器,采用化学发光法(CL)实现了OTA的定量分析。随着待测OTA浓度的增大,传感器CL值逐渐减小,对比未加入OTA的空白组,引起的CL变量(?CL)逐渐增大。优化实验条件下,OTA浓度在0.1~50ng/mL范围内,其对数值(X)与?CL(Y)呈现较好线性关系(r~2=0.9952),最低检出限为0.1ng/m L。对红酒样品进行加标回收,回收率在103.3%~112.5%之间,相对标准偏差(RSD)在4.2%~7.2%之间(n=3)。另外,结果显示该无标记适体传感器化学发光检测OTA具有较高特异性。第二部分以金纳米粒子作为标记物,建立了一种适体传感器,利用纳米金催化鲁米诺体系产生化学发光的机制,实现OTA的定量分析。本法以OTA适体作为固定相,利用OTA与纳米金标记的报告序列竞争结合磁性微球表面OTA适体,从而得到OTA浓度与CL信号的呈一定相关性。最优实验条件下,OTA浓度在0.01~20ng/m L范围内,其对数值(X)与?CL(Y)呈良好线性关系(r~2=0.9922),最低检出限为0.01ng/mL。加标回收率在104.1%~112.7%之间,RSD值在5.9%~8.7%之间(n=3)。经考察,采用纳米金标记的适体传感器化学发光检测OTA具有良好特异性。第三部分沿袭第二部分的传感原理,仅以辣根过氧化物酶(HRP)代替纳米金作为标记物,利用HRP催化鲁米诺体系产生化学发光的原理,从而定量分析OTA。最优实验条件下,OTA浓度在0.01~50ng/m L范围内,其对数值(X)与?CL(Y)线性相关(r~2=0.9898),最低检出限为0.01ng/mL。加标回收率在98.5%~109.3%之间,RSD值在5.2%~7.7%之间(n=3)。另外,本法特异性考察结果良好。
【关键词】：赭曲霉毒素A 核酸适配体 化学发光 磁性微球
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：TS207.3;O657.3;TP212
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 第一章 绪论10-27
• 1.1 前言10-11
• 1.2 OTA理化性质11-12
• 1.3 核酸适配体技术12-13
• 1.4 OTA检测方法研究进展13-20
• 1.4.1 OTA的传统检测方法13-14
• 1.4.2 基于核酸适配体技术的OTA分析方法14-20
• 1.5 纳米金与磁性微球20-21
• 1.5.1 纳米金20
• 1.5.2 磁性微球20-21
• 1.6 化学发光法21-24
• 1.6.1 化学发光机理21
• 1.6.2 化学发光分析法21
• 1.6.3 化学发光体系21-23
• 1.6.4 G碱基与PG化学发光机理23-24
• 1.7 主要内容及创新点分析24-27
• 1.7.1 主要内容24-25
• 1.7.2 创新点分析25-27
• 第二章 无标记适配体传感器化学发光法检测OTA27-38
• 2.1 引言27-28
• 2.2 实验部分28-31
• 2.2.1 试剂与材料28-29
• 2.2.2 仪器与设备29
• 2.2.3 OTA适配体传感器组装29-30
• 2.2.4 化学发光法检测30
• 2.2.5 无标记适体传感器性能评价30-31
• 2.3 实验结果与讨论31-36
• 2.3.1 实验原理31-32
• 2.3.2 传感器制备条件考察32-34
• 2.3.3 封闭剂的选择34
• 2.3.4 标准曲线建立34-35
• 2.3.5 无标记适体传感器性能评价35-36
• 2.4 本章小结36-38
• 第三章 纳米金适体传感器化学发光法检测OTA38-51
• 3.1 引言38
• 3.2 实验部分38-42
• 3.2.1 试剂与材料38-39
• 3.2.2 仪器与设备39
• 3.2.3 纳米金的制备及表征39-40
• 3.2.4 DNA-AuNPs的制备40-41
• 3.2.5 纳米金适体传感器制备41
• 3.2.6 化学发光检测41
• 3.2.7 纳米金适体传感器化学发光检测OTA性能评价41-42
• 3.3 实验结果与讨论42-49
• 3.3.1 实验原理42-43
• 3.3.2 纳米金表征43-44
• 3.3.3 DNA修饰纳米金考察44-45
• 3.3.4 传感器制备条件考察45-47
• 3.3.5 标准曲线建立47-48
• 3.3.6 纳米金适体传感器性能评价48-49
• 3.4 本章小结49-51
• 第四章 辣根过氧化酶适体传感器化学发光检测OTA51-60
• 4.1 前言51
• 4.2 实验部分51-53
• 4.2.1 试剂与材料51-52
• 4.2.2 仪器与设备52
• 4.2.3 辣根过氧化酶适体传感器制备52-53
• 4.2.4 化学发光检测53
• 4.2.5 辣根过氧化物酶适体传感器性能评价53
• 4.3 实验结果与讨论53-59
• 4.3.1 实验原理53-54
• 4.3.2 反应条件优化考察54-57
• 4.3.3 标准曲线建立57-58
• 4.3.4 辣根过氧化物酶适体传感器性能评价58-59
• 4.4 本章小结59-60
• 第五章 结论与展望60-63
• 5.1 结论60-61
• 5.2 展望61-63
• 致谢63-64
• 参考文献64-69

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