乌司他丁对血小板激活介导Sepsis所致内皮细胞损伤的作用研究

发布时间：2017-12-06 22:21

  本文关键词：乌司他丁对血小板激活介导Sepsis所致内皮细胞损伤的作用研究

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【摘要】：目的：观察乌司他丁对血小板激活介导的LPS所致内皮细胞损伤的作用影响。方法：1、取健康志愿者肘静脉血,分离血小板,将血小板随机分为对照组、LPS组、乌司他丁组、TLR4单克隆抗体组四组。其中,LPS组分别加入不同浓度的LPS与血小板共培养,LPS浓度为0.5、1、5、10μg/ml,乌司他丁组分别加入不同浓度的乌司他丁与血小板和LPS共培养,乌司他丁浓度为5000、10000、15000、20000U/ml,流式细胞仪检测各组血小板TLR4的表达,选择对血小板TLR4表达影响最明显的LPS和乌司他丁浓度。2、分离健康志愿者中性粒细胞和血小板,与人脐静脉内皮细胞共培养,随机分为6组,分别为正常对照组、LPS组、乌司他丁组、血小板TLR4抗体组、无血小板组、乌司他丁+无血小板组。各组分别在3、6、18h采用中性粒细胞外诱捕网(NETs)快速定量检测法(PicoGreen dsDNA assay)检测NETs,酶联免疫吸附法(ELISA)检测人内皮细胞特异分子-1(Endocan)、人血管内皮细胞粘附分子-1(VCAM-1),对NETs与endocan、VCAM-1表达量进行相关分析,相关性分析采用皮尔森(Pearson)相关分析。结果：1、LPS对血小板TLR4表达的影响：对照组血小板表达TLR4为40.99±1.22%,LPS浓度达到5ug/ml能明显上调血小板TLR4表达(P0.01)。2、乌司他丁对LPS诱导下血小板TLR4表达的影响：乌司他丁呈浓度依赖性的下调LPS诱导的血小板TLR4表达,与对照组相比,乌司他丁浓度达到15000U/ml能明显下调LPS诱导血小板TLR4表达(P0.01)。3、各组脐静脉内皮细胞共培养体系中NETs表达量的比较：①LPS组3/6/18h时间点上清液中NETs表达量较同一时间点对照组显著增高(P0.01)；②与LPS组同一时间点比,无血小板组3/6/18h时间点上清液中NETs表达量均较同一时间点LPS组显著下降,差异显著(P0.05)；血小板TLR4抗体组3/6/18h时间点上清液中NETs表达量均下降,其中18h组有显著差异(P0.05)；乌司他丁组3/6/18h上清液NETs表达量均显著下降(P0.05)；③与乌司他丁组同一时间点比较,乌司他丁+无血小板组3/18h上清液NETs表达量均显著下降(P0.01)。4、各组脐静脉内皮细胞共培养体系中endocan表达量的比较：①LPS3/6/18h组endocan表达量均较同一时间点对照组显著增加(P0.01)；②无血小板3/6/18h组,上清液中endocan表达量均较同一时间点LPS组减少(P0.05)；③血小板TLR4抗体3/6/18h组,上清液中endocan表达量均较同一时间点LPS组减少(P0.05)；④乌司他丁18h组endocan的表达较LPS18h组显著下降(P0.05)；⑤乌司他丁+血小板3/6/18h组endocan的表达较乌司他丁组均下降,3h组差异显著(P0.01)。5、各组脐静脉内皮细胞共培养体系中VCAM-1表达量的比较：①LPS3/6/18h组VCAM-1表达量均较同一时间点对照组显著增加(P0.01)。②无血小板3/6/18h组,上清液中VCAM-1表达量均较同一时间点LPS组减少(P0.05)。③血小板TLR4抗体3/6/18h组,上清液中VCAM-1表达量均较同一时间点LPS组减少(P0.05)。④乌司他丁3/6/18h组上清液中VCAM-1表达量均较同一时间点LPS组减少(P0.05)。⑤乌司他丁+血小板3/6/18h组VCAM-1的表达较乌司他丁组均下降,3/6h组差异显著(P0.01)。6、各组NETs表达量和endocan、VCAM-1相关分析：上清液endocan、VCAM-1的表达量与LPS诱导产生的NETs表达量呈正相关(r=0.871,P0.001; r=0.747, P=0.005)。结论：(1)LPS通过增加血小板TLR4表达促进内皮细胞损伤和NETs的增加；(2)乌司他丁降低LPS诱导的内皮细胞损伤和NETs表达,该作用可能通过血小板及其TLR4介导；(3)NETs介导LPS引起的内皮细胞损伤。
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R459.7

【参考文献】

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1 陈欣;周丽华;黄志民;董重阳;林靖;张利鹏;李德平;;乌司他丁对内毒素心肌损伤大鼠Toll样受体4表达的影响[J];中国危重病急救医学;2012年12期

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本文编号：1260167